3 д окрашивание: 3D-окрашивание

3d окрашивание волос — фото до и после, технология

Содержание

• Что такое 3d окрашивание
• Достоинства и недостатки
• Техника окрашивания
• Уход за волосами после процедуры

Натуральный цвет локонов часто считают некрасивым из-за его «плоскости» и отсутствия выраженного блеска. Кашемировое 3d окрашивание волос позволяет придать прядкам удивительное сияние и объем, при этом, не нарушая естественности образа.

Что такое 3d окрашивание

Главным отличием окраски в стиле 3d от мелирования волос является то, что во втором случае краска смотрится как блики от света. Это визуально придает пышности и густоты, а также помогает подчеркнуть выразительность родного оттенка локонов. Процедура выполняется специально обученным парикмахером-колористом. Примечательным является то, что сейчас данная технология широко используется для оттенения даже окрашенных темных волос.

3d окрашивание на вьющихся волосах

Само окрашивание волос методом 3d подразумевает под собой нанесение на локоны краски смежных оттенков. Мастер, в зависимости от конкретной ситуации и пожеланий клиентки, может работать как двумя, так тремя и более пигментами. Эффект от такого способа окраски можно сравнить с колорированием, за тем исключением, что вся гамма находится в пределах одного оттенка (рыжего, русого и т. д.).

Основа для выбора цвета окрашивания

Достоинства и недостатки

Это окрашивание относится к методикам нового поколения, т. е., преимущественно им начали работать недавно. Естественно, что из-за высокой популярности такой необычный метод колорирования сразу оброс мифами. Рассмотрим основные плюсы и минусы этого стиля окраски.

Разные стили 3d окрашивания

Достоинства 3d окрашивания:

1. Не требует регулярной коррекции. Благодаря работе в определенной гамме оттенков Вам можно забыть про ежемесячные отросшие кончики. Это особенно удобно тем, кто выполняет 3д окрашивание на «своем» цвете;

   3d окрашивание на каре

2. Естественность. Профессиональный мастер сможет подобрать оттенки краски так, чтобы они практически не отличались от натурального пигмента, но давали красивый блеск. Это же обеспечивает визуальное увеличение объема и густоты;

   Кашемировое окрашивание на светлых волосах

3. Универсальность. Такой стиль окрашивания подойдет любой: начиная от тех, кто отращивает «родной» цвет и заканчивая девушкам, регулярно окрашивающимся. После сеанса пигмент будет выглядеть более живым и ярким, появится блеск;
   3d окрашивание на темных волосах

4. Красота. Почему натуральный цвет не всегда красиво смотрится? Чаще всего это происходит о того, что родная пигментация слишком плотная. Из-за этого нет блеска и перехода оттенков, что зрительно уменьшает объем и делает локоны тусклыми. Технология 3д позволяет полностью решить эту проблему.

   Мягкое 3d на темных волосах

Недостатки 3d окрашивания:

1. Высокая стоимость. Сложность нанесения различных красок (для разных типов волос нужны разные схемы), трудности в подборе определенных родственных оттенков, ювелирное распределение прядей – все это отражается на цене. В большинстве случаев, колорирование 3d обойдется даже дороже, чем модное сейчас омбре или деграде;
   Разница между разными стилями объемного окрашивания

2. Несмотря на универсальность этого способа покраски, больше всего он к лицу блондинкам. Во-первых, светло-русые девушки и те, которые красятся в блонд имеют большую гамму предпочтительных оттенков, во-вторых, именно у них легче всего добиться объемизации цвета и красивых переходов бликов;

   Покраска 3d на светлых волосах

3. Как и любая другая окраска, этот вид вредит волосам. Чтобы сделать натуральное колорирование блондинкам нужно будет некоторые пряди полностью обесцвечивать, что сделает их пористыми и ломкими. Поэтому безопаснее всего выполнять сеанс брюнеткам, русым и рыжим.

   Эффектное 3d окрашивание волос

Техника окрашивания

Технология 3d окрашивания волос очень похожа на омбре или шатуш. Перед началом покраски, колорист обязательно должен подобрать максимально подходящие оттенки и определиться с нужным эффектом.

Например, если требуется просто придать локонам блеск и сделать их более яркими, то будет достаточно двух оттенков. Если нужно добавить прическе объема или сделать образу натуральным (выйти из старой краски), то берется 3 и более цвета.

Приготовление смеси

Пошаговая техника выполнения 3d окрашивания на темные волосы:

1. Волосы распределяются на 4 зоны: треугольная затылочная, две височные и макушка. Очень важно сразу правильно их разделить, иначе в дальнейшем не выйдет ровного перехода пигмента;

   Разделение волос по зонам

2. Первой окрашивается затылочная зона. Здесь берется максимально похожий на базовый, оттенок. В природе не бывает так, что цвет ложится ровной по всей плоскости волос – есть определенные перепады, затемнения. Поэтому в некоторых случаях сеанс проводится даже с начесом;
3. Когда треугольник на затылке прокрашен, к нему добавляются по тонкой пряди с каждой височной доли. Они уже являются началом перепада цвета.
   Их нужно окрасить на тон или половину тона светлее базы;
4. Если будет использоваться 3 цвета и более, то дальше происходит чередование оттенков. С височной доли берется снова по паре локонов и они красятся следующим подтоном, так повторяется до тех пор, пока каждый из участков не будет обработан;

   Процесс окрашивания

5. Остается большая доля макушки. Здесь повторяется такая же техника окраски, как и на затылке. От общей массы волос отделяется отдельная прядь. Она должна идти четко по пробору. Её красят в базовый цвет. После с каждой стороны поочередно подбирается по паре локонов, которые красятся способом чередования;

   Выделение пряди

6. Иногда на макушке оставляют незакрашенный ромб. Так делается исключительно на натуральных волосах, чтобы избежать регулярной коррекции цвета. Обратите внимание, что черные крашенные пряди все равно придется со временем дополнительно оттенять. В тоже время, если нужно придать тонким локонам объема, парикмахер может начесать оставшиеся локоны и окрасить их по типу омбре;
7. Весь процесс проводится без фольги и полиэтилена. Волосы во время сеанса должны «дышать». Это очень важно для получения естественного перехода пигментов.

   Как профессионалы красят волосы в 3d

Видео: вот так делается 3D окрашивание волос

Если специалисты работает на родном оттенке, то процедура длится не более 2 часов. Но есть полностью перекрашиваются светлые волосы – сеанс может занять от 2,5 до 4 часов. При этом, выход из черного цвета или темно-коричневого в блонд или русый нельзя выполнить за один сеанс. Профессиональному колористу для такого понадобится до 4 процедур, повторяющихся через 2 недели.

Смывание краски

На фото до и после видно, что окрашивание волос 3d удивительно преобразовывает внешность. Придает сияния не только локонам, но и коже. Выход в более светлый оттенок позволяет выглядеть свежее и моложе, а мягкий перепад пигментов поможет любой укладке выглядеть превосходно. Вместе с этим важно помнить, что самостоятельно проводить сеанс не рекомендуется.

Несмотря на то, что многие известные производители красок (Лореаль, Wella) предлагают свои новинки для мягкого колорирования, сложно подобрать правильный оттенок. У парикмахера в салоне есть возможность смешать несколько пигментов, чтобы получить нужный базовый или переходной, дома так не выйдет.

L’oreal для колорирования блондинок

Уход за волосами после процедуры

Как сказано выше, 3d окрашивание может негативно сказаться на общем состоянии волос. Чтобы предотвратить их ломкость, нужно обязательно усиленно за ними ухаживать. В первую очередь, замените обычные бальзамы и маски профессиональными для окрашенных прядок. Помимо этого, рекомендуется регулярно делать масляные маски.

Нанесение бальзама на покрашенные волосы

Для осветленных локонов не рекомендуется использовать облепиховый и эфир, т. к. он придает желтизны. Первые дни не пользуйтесь термическими инструментами для укладки. Также запрещены повторные покраски в течение 2 недель, любые процедуры по наращиванию, завивке и т. п.

Профессиональная линейка для ухода за окрашенными волосами

цены, описание, фото – услуга в центрах красоты Ola

От 2900 ₽ + Акции (5)

Смотреть все акции и цены

Бесплатная консультация

профессионального колориста

При правильном уходе

цвет сохраняется 3 месяца и дольше

Профессиональная косметика для ухода за волосами

по лучшим ценам в городе

После окрашивания наносится

восстанавливающая маска с витаминами

Современные техники сложного окрашивания

Бесплатная трихологическая диагностика

волос и кожи головы

Калькулятор стоимости

Акции Цены Бесплатная консультация Наши работы Отзывы(812) 701-00-10

в 13 центрах OLA

№1 по окрашиваниям

волос в Санкт-Петербурге

44 000 +

Премиальных окрашиваний

ежегодно выполняется в центрах OLA

100 +

Колористов-экспертов

Победители и призеры международных конкурсов

14 +

Центров красоты

Во всех районах Петербурга, с едиными стандартами качества

К вашим услугам

Перед парикмахерскими услугами делается трихологическая диагностика структуры волоса.

Мойки раскладываются до положения полулежа/лежа, а кресла снабжены массажем.

Камера заднего вида позволяет оценить проделанную работу со всех сторон.

Климазон позволяет краске быстрее и глубже проникнуть в структуру волоса.

Кольцевая лампа для потрясающих selfie и фото.

Мы — крупнейший дистрибьютор и партнер Wella Professionals в Петербурге.

Инструменты стерилизуются и хранятся в одноразовых крафт-пакетах, которые вскрываются при клиенте.

Наши работы: фото и видео

До — После

Техника выполнения

3D-окрашивание относится к разряду сложных техник, поэтому перед покраской волос стилист разрабатывает настоящую тактику работ. В зависимости от типа волос и внешности клиента мастер планирует зоны, на которых нужно сделать акцент.

Этапы объемного окрашивания:

1. Разделение волос на зоны по заранее заготовленному эскизу.
2. Подготовка красящих составов.
3. Покраска волос. Стилист последовательно отделяет пряди в каждой зоне, часть из них прокрашивает в базовый цвет, соседние пряди – на 0,5-1 тон светлее или темнее предыдущих. Направление окрашивания – от корней к кончикам. В первую очередь прокрашиваются волосы на затылке, затем на висках, в последнюю очередь на теменной части. Окрашенные пряди изолируются друг от друга фольгой.
4. Смывание краски. После того, как прошло время выдерживания краски на волосах (согласно инструкции к красящему составу), голову моют без шампуня.
5. Восстановление волос. На пряди наносят восстанавливающую маску с витаминами и питательными маслами.
6. Сушка, укладка волос.

3D-окрашивание – сложная техника окраски волос, в которой используется 2-3 цвета и множество тонов в рамках этих цветов. В результате на волосах раскрывается невероятная игра оттенков, благодаря которой прическа визуально приобретает объем. Этот эффект дал второе название 3D-окрашиванию – объемное окрашивание.

3D-окрашивание в центрах красоты OLA выполняют опытные стилисты, их работа приравнивается к творчеству художника. Умело распределяя оттенки, наши мастера подарят вам идеальную прическу – ваши волосы после 3D-окрашивания будут выглядеть роскошно!

Преимущества

• Техника подходит для волос любой длины и цвета.
• В результате грамотного подбора оттенков создается впечатление, что волосы струятся, переливаются, но сохраняют натуральный внешний вид.
• С помощью техники можно подчеркнуть достоинства внешности.

• Ни одна техника не создает такой эффект объема и густоты, как 3D-методика.
• Женщины, которые воспользовались этой методикой, выглядят на несколько лет моложе.

Показания

Тонкие волосы, отсутствие объема.

Появление седины.

Желание изменить имидж.

Невыразительная внешность.

Тусклый цвет волос, отсутствие живого блеска.

Противопоказания

Аллергия на компоненты краски.

Очень сухие, ломкие волосы.

Повреждения кожи головы.

Болезни кожи головы и волос.

Результаты 3D-окрашивания

По сравнению с другими техниками 3D-окрашивание имеет преимущество: волосы переливаются разными оттенками, но при этом выглядят естественно. Такой эффект достигается из-за использования цветов близких к натуральному.

3D-окрашивание дает приятные изменения:

• Внешность становится яркой, интересной.
• Лицо, обрамленное волосами, преображается, сияет молодостью и красотой.
• Оттенки плавно перетекают друг в друга, благодаря игре тонов кажется, что волосы блестят.
• Прическа выглядит объемной, цвет волос приобретает особую глубину.

• Особенно выигрышно волосы смотрятся в объективе фото- и видеокамер.
• Волосы выглядят роскошно, переливаются живым светом даже в помещении.
• Последующая коррекция цвета заключается только в обновлении корней.

Нашли на маркетплейсах уходовую косметику дешевле, чем у нас?
Мы сделаем для вас дополнительную скидку и предоставим лушую цену!

Тренды 2023 года

Образы от команды OLA

Продолжительность процедуры:

до 4 часов

Процедура доступна

в 13 центрах

Средства для окрашивания

подбираются индивидуально

Продолжительность эффекта:

3 месяца и дольше

Подарочный сертификат:

на любую сумму

Периодичность зависит от:

скорости роста волос, их натурального цвета и ухода после окрашивания

Рассчитайте стоимость окрашивания

Вид окрашивания:

Примеры:

Длина волос:

Выше ушейВыше плечНиже плечНиже лопаток

Густота волос:

ТонкиеСредней густотыГустые

Категория стилиста по волосам:

СтилистТоп-стилист

Стрижка, укладка

Стрижка + укладкаУкладкаТолько сушим феном

Общая стоимость:

с % скидкой на услуги

Услуга окрашивания

0 ₽ 0 ₽

—

0 ₽ 0 ₽

Дополнительные расходные материалы

0 ₽

Примечание

• Указан ориентировочный расход красителя. Фактический расход определяется колористом в момент посещения и объявляется клиенту ДО окрашивания.
• В случае наличия в прайс-листе диапазона цен для выбранной длины волос, точная стоимость определяется мастером и объявляется клиенту ДО окрашивания.

Шаг 1/5

Стоимость окрашивания указана без учета стоимости красителя. Дополнительно необходима услуга с сушкой волос (сушка или стрижка или укладка).

Цветовые эффекты

Стилист

Топ-Стилист

1 категория сложности (растяжка цвета, шатуш, омбре, балаяж, мелирование)

волосы выше ушей

2900 ₽

3100 ₽

волосы выше плеч

3700 ₽

3900 ₽

волосы ниже плеч

4800 ₽

5000 ₽

волосы ниже лопаток

5600 ₽

5800 ₽

2 категория сложности (airtouch)

волосы выше ушей

4200 ₽

4400 ₽

волосы выше плеч

5500 ₽

5700 ₽

волосы ниже плеч

7100 ₽

7300 ₽

волосы ниже лопаток

8100 ₽

8300 ₽

3 категория сложности (американский блонд)

волосы выше ушей

6200 ₽

6500 ₽

волосы выше плеч

8200 ₽

8500 ₽

волосы ниже плеч

10500 ₽

10700 ₽

волосы ниже лопаток

12700 ₽

12900 ₽

Женские стрижки

Стрижка + Укладка

Стилист

Топ-Стилист

волосы выше ушей

1500 ₽

1700 ₽

волосы выше плеч

1700 ₽

1800 ₽

волосы ниже плеч

1900 ₽

2100 ₽

волосы ниже лопаток

2300 ₽

2500 ₽

стрижка блейдом +100 ₽

Трихологическая диагностика

бесплатно, к любой услуге

Укладка с использованием горячих инструментов

Стилист

Топ-Стилист

волосы выше ушей

1500 ₽

1700 ₽

волосы выше плеч

1600 ₽

1800 ₽

волосы ниже плеч

1700 ₽

1900 ₽

волосы ниже лопаток

2300 ₽

2500 ₽

Сушка волос

Стилист

Топ-Стилист

волосы выше ушей

волосы выше плеч

1000 ₽

волосы ниже плеч

1000 ₽

1100 ₽

волосы ниже лопаток

1100 ₽

1200 ₽

Цветовые эффекты

Стилист

Топ-Стилист

1 категория сложности (растяжка цвета, шатуш, омбре, балаяж, мелирование)

волосы выше ушей

2900 ₽

3100 ₽

волосы выше плеч

3700 ₽

3900 ₽

волосы ниже плеч

4800 ₽

5000 ₽

волосы ниже лопаток

5600 ₽

5800 ₽

2 категория сложности (airtouch)

волосы выше ушей

4200 ₽

4400 ₽

волосы выше плеч

5500 ₽

5700 ₽

волосы ниже плеч

7100 ₽

7300 ₽

волосы ниже лопаток

8100 ₽

8300 ₽

3 категория сложности (американский блонд)

волосы выше ушей

6200 ₽

6500 ₽

волосы выше плеч

8200 ₽

8500 ₽

волосы ниже плеч

10500 ₽

10700 ₽

волосы ниже лопаток

12700 ₽

12900 ₽

Женские стрижки

Стрижка + Укладка

Стилист

Топ-Стилист

волосы выше ушей

1500 ₽

1700 ₽

волосы выше плеч

1700 ₽

1800 ₽

волосы ниже плеч

1900 ₽

2100 ₽

волосы ниже лопаток

2300 ₽

2500 ₽

стрижка блейдом +100 ₽

Трихологическая диагностика

бесплатно, к любой услуге

Укладка с использованием горячих инструментов

Стилист

Топ-Стилист

волосы выше ушей

1500 ₽

1700 ₽

волосы выше плеч

1600 ₽

1800 ₽

волосы ниже плеч

1700 ₽

1900 ₽

волосы ниже лопаток

2300 ₽

2500 ₽

Сушка волос

Стилист

Топ-Стилист

волосы выше ушей

волосы выше плеч

1000 ₽

волосы ниже плеч

1000 ₽

1100 ₽

волосы ниже лопаток

1100 ₽

1200 ₽

Вопросы и ответы

Что такое 7D-окрашивание?

Техника 7D была разработана на основе 3D-методики. Главное отличие 7D-окрашивания заключается в том, что здесь используется 4-5 цветов и более (речь идет именно о цветах, а не об оттенках).

На какой длине волос лучше смотрится 3D-окрашивание?

Результат окрашивания не зависит от длины волос, 3D-техника применяется на прядях различной длины. Решающее значение имеет профессионализм стилиста: только от его опыта, фантазии и художественных навыков зависит внешний вид клиента. В центрах Ola вы получите результат, превосходящий ожидание!

Советуете ли вы делать объемное окрашивание на темных волосах?

На темных волосах этот вид окрашивания смотрится очень эффектно, так как мастеру проще всего воссоздать сияющие блики на темном фоне. Палитра цветов для шатенок разнообразна, наши стилисты подберут оттенки, которые наиболее соответствуют вашему образу.

Как смотрятся светлые волосы, окрашенные по этой технике?

3D-окрашивание на светлых прядях смотрится необычайно гармонично, волосы просто сияют, выглядят густыми и объемными. Техника способна оживить цвет и исправить ситуацию, даже если волосы были ранее неудачно окрашены в блонд и выглядят немного искусственно.

Когда-то у меня была аллергия на краску для волос, подойдет ли мне 3D-окрашивание?

Наши стилисты используют в работе красящие составы премиум-класса, которые безопасны для организма и редко вызывают аллергию. В любом случае перед окрашиванием мастер проводит тест на чувствительность, чтобы исключить риск появления аллергической реакции.

Сколько длится процедура?

На длительность 3D-окрашивания влияет длина волос и количество используемых оттенков. Так как техника выполнения довольно сложная, процесс покраски может занимать до 4 часов (при условии работы на родном оттенке). Если цвет волос полностью изменяется, одного сеанса недостаточно, стилиста придется посещать несколько раз.

В чем отличие мелирования от 3D-окрашивания?

Мелирование не создает такой эффект объема и естественности, как 3D-окрашивание. К тому же в мелировании наблюдается четкая граница между темными и светлыми прядями, нет плавного перехода. Оттенки, которые используются в объемном окрашивании, близки к натуральным, поэтому прическа смотрится очень естественно.

Могу ли я научиться делать 3D-окрашивание дома?

Это настолько сложная техника, что самостоятельно научиться выполнять ее невозможно. В лучшем случае, вы получите обычное мелирование или колорирование.

Как ухаживать за волосами после 3D-окрашивания?

Уход за волосами такой же, как и после обычного окрашивания. Мойте голову специальными шампунями для окрашенных волос, используйте маски, бальзамы, натуральные масла для поддержания здоровья волос. Не пересушивайте пряди феном, утюжком, плойкой. Обратите внимание, что при неправильном уходе вы потеряете такие эффекты 3D-окрашивания как объем и блеск, волосы будут казаться тусклыми и грязными. Наши стилисты подробно расскажут вам об уходе, порекомендуют хорошие средства для волос, чтобы нужный эффект был сохранен надолго.

Можно ли после 3D-окрашивания сделать биозавивку?

Да, можно, но нужно выдержать небольшой интервал – после окрашивания должно пройти 1-2 недели. Биозавивку вы можете сделать в наших центрах: мы используем лучшие средства для завивки на натуральной основе. После биозавивки в центрах OLA ваши локоны будут выглядеть естественно, волосы сохранят свою структуру и природный блеск.

Объемное окрашивание больше подходит для прямых или завитых волос?

Эффект объема и плавного перехода оттенков после 3D-окрашивания одинаково хорошо создается как на прямых, так и на завитых волосах. Вы можете смело экспериментировать со своей внешностью после покраски волос: выпрямляйте и накручивайте волосы ‒ в любом случае вы будете выглядеть великолепно благодаря необычайному эффекту 3D.

Что такое голографическое окрашивание?

Это еще одно название 3D-окрашивания, но так как техника объемного окрашивания достаточно новая, название пока еще не вошло прочно в обиход.

Когда краска смоется, эффект 3D исчезнет?

Со временем любая краска немного смывается с волос, поэтому меняется интенсивность цвета. Особенность 3D-окрашивания в том, что при смывании красителей появляются новые оттенки, при этом цвет раскрывается по-новому, 3D-эффект сохраняется.

Слышала, что есть облегченный метод 3D-окрашивания?

Упрощенную технику 3D-окрашивания используют начинающие стилисты, чаще всего самоучки. Ее суть заключается в том, что сначала на волосах выполняется мелирование, а потом сверху на осветленные пряди наносится основной тон. Эта техника не дает настоящего 3D-эффекта на волосах, поэтому мы не рекомендуем прибегать к такому способу окрашивания.

Это дорогая процедура?

Стоимость 3D-окрашивания достаточно высока по сравнению с другими техниками, это объясняется сложностью выполнения покраски. На окончательную цену влияет длина волос, стоимость красителей, поэтому точную сумму вам скажет ваш мастер.

Это интересно

Эксперимент: салон vs. частный мастер

Мы попросили двух участниц изменить своим привычкам: одна пойдет в салон, а вторая будет делать окрашивание у частного мастера дома. Смотрите, что из этого получилось

Отзывы клиентов

Посты клиентов в Instagram

Надежда Блызнюк

2 Сентября 2020

Окрашивание в технике 3д сделала впервые. Цвета переливаются, хотя издалека смотрится как мелирование, но вблизи это прям объемно и с разными оттенками. Реально справится только хороший колорист. Мне понравилось.

Татьяна Гарбар

28 Августа 2020

Была на сложной технике окрашивания волос 3д, хотелось нового дыхания в свои волосы. Это просто фантастика. Мастер мне попался прекрасный. А мои волосы приобрели красивый блеск и необычный цвет. Даже и  не ожидала, что могу быть такой привлекательной всего за счет смены цвета волос. Спасибо вам огромное, приду еще обязательно.

Татьяна Гевчук

19 Августа 2020

Недавно ходила в салон на окрашивание волос 3д. Сказать, что это восторг — ничего не сказать! Раньше мои волосы были тусклыми и совсем не  блестящими, и цвет был странный, так как предпочитала краситься на дому, а сейчас я красотка,  не могу собой налюбоваться. Волосы шикарные. Цвет бомба. Теперь если краситься то только так, оно того стоит. СПАСИБО БОЛЬШОЕ!

Виталина Гришко

16 Августа 2020

Сделала 3д окрашивание здесь. Техника требует творческого подхода, ловких рук и художественного видения, что несомненно есть у мастера. Процедура сложная, но она того стоит — волосы преображаются до неузнаваемости.

Овчарук Ангелина

18 Октября 2019

Салон:

Ленинский пр. 81 к1

Выбрала я 3 д окрашивание волос в этот раз. Оно  похоже на обычное мелирование, но когда присматриваешься, действительно волосы переливаются разными цветами. Не знаю, как долго, вся красота эта сохранится, но мне очень нравится. Цвет волос стал необычным, да и образ в целом совсем другой. Все мои знакомые оценили, им понравился.Я рекомендую это окрашивание!!!

Средняя оценка

5 (Кол. оценок: 5)

Показать все отзывы

3D-окрашивание тканей позволяет визуализировать целые органы

Регистрация завершена Внутри лаборатории микроскопия и визуализация, гистология, Технологии и инновации, неврология

Новый метод окрашивания открывает дверь в 3D-гистопатологию

Люк Тернер | 25. 05.2020 | Быстрое чтение

3D-визуализация тканей имеет большие перспективы, но, хотя очистка тканей позволяет получать потрясающие изображения, сама по себе она не имеет большого научного значения. Для изучения конкретных типов тканей и клеток необходим универсальный метод окрашивания и маркировки, который работает с целым рядом окрашивающих агентов и антител. Команда из Японии разработала именно это, используя свою технику CUBIC-HistoVision, для окрашивания и визуализации не только тканей, но даже всего мозга мыши (1). Эцуо Сусаки из Центра исследований динамики биосистем RIKEN объясняет больше.

Проводя физические и химические анализы, мы обнаружили, что физико-химические свойства биологической ткани могут быть воссозданы в электролитном геле. Тойити Танака впервые описал биологическую ткань как гель в Массачусетском технологическом институте в 1980-х годах, и мы были рады заново открыть для себя его работу.

Мы выбрали искусственный гель, имитирующий биологическую ткань, и экспериментально оценили различные условия окрашивания, чтобы создать отлаженный метод трехмерного окрашивания под названием CUBIC-HistoVision. Наш восходящий подход к проектированию работает с более чем 30 различными антителами и ядерными красителями.

Иммуноокрашивание — это эффективный способ определения типов клеток, экспрессии белков, модификаций белков и локализации белков в тканях. Трехмерное изображение может показать точное местоположение этих сигналов с таким же уровнем детализации, как и транскриптомика. Этот метод можно использовать для определения новых состояний клеток или клеточных связей или для сбора информации о типах клеток и их положении в организме. Его также можно применять к таким проектам, как Атлас клеток человека или Атлас белков человека, чтобы помочь в картографировании местоположений и взаимосвязей.

Мы уже использовали наш метод для сравнения анатомических особенностей целых органов у разных видов, включая визуализацию мозга мыши, половины мозга мартышки и квадратного сантиметра ткани мозга человека. Наша предыдущая работа, в которой мы применили этот метод к тканям легких и лимфатических узлов человека для выявления злокачественных новообразований, подчеркнула потенциал 3D-гистопатологии (2) — и дальнейшие исследования повысят диагностическую точность и объективность 3D-исследования клинической патологии в будущем. .

Кредит: институт RIKEN.

Электронная почта*

Выберите пароль

Я прочитал и понял Уведомление о конфиденциальности *

Будьте в курсе других наших информационных бюллетеней и информации о спонсорах, специально предназначенных для интересующих вас областей.

Я хочу быть в курсе событий в области инфекционных заболеваний Я хочу быть в курсе событий в области педагога-патолога

Когда вы нажмете «Подписаться», мы отправим вам по электронной почте ссылку, которую вы должны нажать, чтобы подтвердить адрес электронной почты, указанный выше, и активировать подписку. Если вы не получили это письмо, свяжитесь с нами по адресу [электронная почта защищена].
Если вы хотите отказаться от подписки, вы можете обновить свои настройки в любой момент.

1. EA Susaki et al., Nat Commun, 11, 1982 (2020). PMID: 32341345.
2. S Nojima et al., Sci Rep, 7, 9269 (2017). PMID: 28839164.

Об авторе Люк Тернер

Получив степень бакалавра в области биологии, я вскоре обнаружил, что моя страсть и сила заключаются в том, чтобы писать о науке, а не работать в лаборатории. Моя степень магистра в области научной коммуникации позволила мне развить навыки научного письма, и мне посчастливилось прийти в Texere Publishing сразу после университета. Здесь мне предоставляется возможность писать о передовых исследованиях и общаться с ведущими учеными, а также быть частью фантастической команды!

флуоресцентных реагентов для окрашивания 3D-культур клеток, созданных с помощью матрицы Cell-Mate3D | Thermo Fisher Scientific

(См. список продуктов, представленных в этой статье.)

В отличие от своих 2D-аналогов в тканевых культурах, опухоли и связанные с ними микроокружения содержат очень сложный и динамичный набор взаимодействий между различными типами клеток [1], многочисленными химические градиенты [2] и различные компоненты внеклеточного матрикса [3,4]. Помимо происходящих биохимических реакций, физические характеристики опухоли, в том числе жесткость или жесткость внеклеточного матрикса, могут регулировать ее физиологию [5–7]. Следующие открытия в области биологии и лечения рака потребуют инструментов, которые помогут создавать более актуальные и прогностические модели, а также методы для их эффективного анализа.

Сочетание методов 3D-культуры клеток с методами анализа здоровья клеток обещает дать новое понимание механизмов рака и новые стратегии для прерывания или подрыва критических путей. Здесь мы описываем применение анализов и протоколов на основе флуоресценции в сложной трехмерной среде, часто с незначительными корректировками времени экспозиции или концентрации реагентов. Флуоресцентные реагенты от Thermo Fisher Scientific можно использовать для оценки функции клеток, включая жизнеспособность, пролиферацию и апоптоз, в ответ на различные условия 3D-культивирования и обработки.

Создание трехмерных культур с помощью матрицы Cell-Mate3D

Матрица Cell-Mate3D™ от BRTI Life Sciences — это тканеподобная матрица, которая предлагает исследователям биологически значимую и химически определенную микросреду для биомедицинских исследований in vitro и in vivo. Матрица Cell-Mate3D состоит из двух встречающихся в природе биополимеров: хитозана, положительно заряженного полисахарида, полученного из хитина, обнаруженного в экзоскелете ракообразных; и гиалуроновая кислота, линейный полисахарид, обнаруженный во внеклеточном матриксе соединительной, эпителиальной и нервной тканей. Гиалуроновая кислота обычно участвует в пролиферации клеток, миграции, эмбриональном развитии и заживлении ран.

При смешивании Cell-Mate3D Dry Blend с клетками, ресуспендированными в Cell-Mate3D Hydration Fluid, матрикс формируется мгновенно за счет электростатического взаимодействия между карбоксильными группами гиалуроновой кислоты и аминогруппами хитозана. Полученный полиэлектролитный комплекс представляет собой волокнистую матрицу, обладающую тканеподобной жесткостью, имитирующую естественную клеточную среду. Матрица Cell-Mate3D позволяет моделировать миграцию и пролиферацию клеток; Лабораторные методы, такие как окрашивание и визуализация клеток, проточная цитометрия и сканирующая электронная микроскопия, могут использоваться с этой технологией [8].

Определение жизнеспособности клеток в трехмерных культурах

Набор Invitrogen LIVE/DEAD Viability/Cytotoxicity Kit представляет собой хорошо зарекомендовавший себя флуоресцентный анализ для определения жизнеспособности широкого спектра клеток животных. Анализ жизнеспособности LIVE/DEAD включает два флуоресцентных зонда — кальцеин AM, проникающий в клетку субстрат эстеразы, и гомодимер-1 этидия, проникающий в клетку высокоаффинный краситель нуклеиновой кислоты, — которые используются одновременно для окрашивания клеток. Мы использовали анализ жизнеспособности LIVE/DEAD с трехмерными клеточными культурами, которые были созданы путем встраивания клеток рака молочной железы AU565 в матрицу Cell-Mate3D. После инкубации матрикса с внедренными клетками в течение 4 дней один образец оставляли необработанным, а эквивалентный образец обрабатывали 0,5% детергентом Triton X-100, разрушающим клеточные мембраны и убивающим клетки. Затем оба образца были проанализированы с использованием набора LIVE/DEAD Viability/Cytotoxicity и прилагаемого протокола, за исключением того, что время инкубации было сокращено с 30 до 20 минут для оптимизации уровней окрашивания в этой системе. После контрастного окрашивания синим флуоресцентным красителем нуклеиновых кислот образцы визуализировали на инвертированном конфокальном микроскопе (9). 0060 Рисунок 1 ). Необработанный образец показывает живые клетки, отмеченные зеленой флуоресценцией, тогда как обработанный образец показывает мертвые клетки, отмеченные красной флуоресценцией.

Рис. 1. Обнаружение жизнеспособных клеток в матрице Cell-Mate3D с использованием анализа жизнеспособности LIVE/DEAD. Клетки рака молочной железы AU565, растущие в матрице Cell-Mate3D, были окрашены с использованием набора Invitrogen LIVE/DEAD Viability/Cytotoxicity Kit и контрастно окрашены с использованием реагента Invitrogen NucBlue Live ReadyProbes. (А) В необработанном образце живые клетки флуоресцируют зеленым, а ядра флуоресцируют синим; обнаруживается очень мало нежизнеспособных (красно-флуоресцентных) клеток. (B) После обработки 0,5% детергентом Triton X-100 образец содержит в основном нежизнеспособные (красно-флуоресцентные) клетки; фиолетовый цвет клеток на изображении представляет собой перекрытие красных и синих флуоресцентных пятен. Образцы визуализировали с помощью инвертированного конфокального микроскопа при 20-кратном увеличении.

Обнаружение пролиферации клеток в 3D-культурах

Помимо своей важной роли в развитии, пролиферация клеток является важным маркером раковых клеток и может служить мишенью противораковой терапии. Наборы для визуализации Invitrogen Click-iT EdU обеспечивают простой и эффективный анализ пролиферации, который обнаруживает синтез ДНК с помощью флуоресцентной микроскопии. В анализе Click-iT EdU модифицированный аналог тимидина (5-этинил-2′-дезоксиуридин, или EdU) вводят в клетки, включают во вновь синтезированную ДНК, а затем метят ярко флуоресцентным красителем Invitrogen Alexa Fluor в быстром режиме. , высокоспецифичная реакция на клик. Мы использовали набор для визуализации Click-iT EdU Alexa Fluor 488 Imaging Kit (без изменений прилагаемого протокола) с 3D-культурами клеток, которые были созданы путем встраивания клеток HeLa в матрицу Cell-Mate3D, и обнаружили, что пролиферирующие клетки (которые флуоресцируют зеленым цветом) легко визуализируется в 4-дневных культурах ( Рисунок 2 ).

Рис. 2. Обнаружение пролиферирующих клеток в матрице Cell-Mate3D с помощью окрашивания Click-iT EdU. Клетки HeLa заключали в матрицу Cell-Mate3D и культивировали в течение 4 дней. Пролиферирующие клетки обнаруживали с помощью набора для визуализации Invitrogen Click-iT EdU Alexa Fluor 488 (зеленый). Клетки контрастировали реагентом Invitrogen NucBlue Fixed Cell ReadyProbes Reagent (синий) и визуализировали с помощью инвертированного конфокального микроскопа при 60-кратном увеличении.

Обнаружение апоптоза в трехмерных культурах

Реагент Invitrogen CellEvent Caspase-3/7 Green Detection обеспечивает быстрый и надежный количественный анализ апоптотических клеток в культуре. Этот нефлуоресцентный субстрат состоит из 4-аминокислотного пептида DEVD, который содержит сайт узнавания каспазы-3/7, конъюгированный с красителем, связывающим нуклеиновую кислоту. В присутствии активированной каспазы-3 или -7 субстрат расщепляется, высвобождая краситель для связывания с ДНК и создавая ярко-зеленый флуоресцентный сигнал, указывающий на апоптоз. Чтобы протестировать этот реагент с 3D-культурами клеток, мы поместили клетки рака молочной железы AU565 в матрицу CellMate-3D и культивировали клетки в течение 12 дней. В течение этого времени один образец оставался необработанным, а эквивалентный образец обрабатывали 100 мкМ паклитаксела (общее название фармацевтического препарата Taxol) для индукции апоптоза. Затем образцы окрашивали 15 мкМ реагента CellEvent Caspase-3/7 (в 3 раза больше рекомендуемой концентрации). Зеленые флуоресцентные апоптотические клетки были четко видны в образце, обработанном паклитакселом, с помощью конфокальной микроскопии (9).0060 Рисунок 3 ).

Рис. 3. Обнаружение апоптотических клеток в матрице Cell-Mate3D с использованием реагента CellEvent Caspase-3/7 Green. клеток рака молочной железы AU565 были встроены в матрицу Cell-Mate3D и культивированы в течение 12 дней. В течение этого времени клетки (A) оставляли необработанными или (B) обрабатывали 100 мкМ паклитаксела для индуцирования апоптоза. Затем клетки инкубировали с реагентом Invitrogen CellEvent Caspase-3/7 Green Detection Reagent (15 мкМ) в течение 30 минут, чтобы пометить апоптотические клетки зеленой флуоресценцией, контрастно окрашивали реагентом Invitrogen NucBlue Live ReadyProbes Reagent (синий) и визуализировали с помощью инвертированного конфокального микроскопа. при 20-кратном увеличении.

Применение протоколов флуоресценции к вашим 3D-экспериментам

Хотя при применении флуоресцентных зондов к 3D-клеточным культурам, растущим в матрице Cell-Mate3D, требовалась некоторая оптимизация, мы обнаружили, что в целом реагенты способны проникать в сложную среду и точно сообщать о состоянии клеток. параметров и ферментативной активности. Анализ клеточной функции в трехмерных клеточных культурах значительно выиграет от множества доступных флуоресцентных зондов клеточной функции.

Благодарности: Эта статья была подготовлена ​​Бет Линдборг, Кейтлин Джонсон, И Вен Чай, Ю Хан Ли и Скотт Браш, BRTI Life Sciences, Ту Харборс, Миннесота (brtilifesciences. com). Изображения были получены в Центре визуализации Университета Миннесоты (UMN-UIC); мы очень признательны члену UMN-UIC Гранту Бартелу за помощь в конфокальной микроскопии.

Ссылки

1. Baker BM, Chen CS (2012) J Cell Sci 125:3015–3024.
2. Hoffman BD, Grashoff C, Schwartz MA (2011) Nature 475:316–323.
3. Kimlin LC, Casagrande G, Virador VM (2013) Mol Carcinog 52:167–182.
4. Солдатов В.Ю., Леклюйз Э.Л., Гриффит Л.Г. и др. (2013) Toxicol Res (Camb) 2:23–39.
5. Zschenker O, Streichert T, Hehlgans S et al. (2012) PLoS One 7:e34279.
6. Smalley KS, Lioni M, Herlyn M (2006) In Vitro Cell Dev Biol Anim 42:242–247.
7. Шварц М.А., Чен К.С. (2013) Наука 339:402–404.
8. Chai YW, Lee EH, Gubbe JD et al. (2016) PLoS One 11:e0162853.

Узнать больше о:

• Приложения, инструменты и ресурсы для клеточного анализа
• Анализы жизнеспособности, пролиферации и функции клеток — Руководство по молекулярным зондам, глава 15

Скачать статью

Загрузите версию этой статьи для печати.