35 best окрашивание images
Балаяж
Балаяж выглядит более естественно, чем мелирование
Чтобы обзавестись идеальными, словно выгоревшими на солнце светлыми прядями, у вас по сути есть два пути: привычное светлое мелирование и более новая и актуальная техника «балаяж».
Балаяж представляет собой процесс нанесения на волосы краски легким прикосновением кисти. Балаяж наделяет мастера по окрашиванию большей свободой в отношении нанесения краски по его усмотрению в отличие от мелирования, которое может быть более аккуратными.
Балаяж завоевывает салоны красоты штурмом и быстро становится более предпочтительным способом осветления прядей по сравнению с мелированием. Он подходит волосам любого цвета, но особенно удачно смотрится на блондинках с хорошим основным цветом. Мы рекомендуем попробовать сочетание светлых и темных прядей. Этот прием используется во многих приведенных ниже трендах, таких как тончайшие светлые пряди и «французский каштановый».
Как подобрать цвет по типу волос
Основным требованием для выполнения данной покраски является соответствие цветового типа. Если пряди светлые, предлагается перекрасить теплый отблеск кончиков на красивые серебристые, холодные и ледяные тона.
Любительницам холодных оттенков стоит посмотреть на варианты:
Пепельно-белое. Переход изящно смотрится на длинных прядях темного цвета, когда можно сделать его ярким и плавным. Часто проводится на светлых волосах разной длины.
Серо-русое. Сочетание популярно благодаря невысокой требовательности. Русые кончики легче реализовать на темных локонах, чем абсолютно светлые и белые. Оттенок смотрится естественно и хорошо сочетается с темными корнями. Блондинкам стоит поинтересоваться осветлением к белому, если натуральный цвет довольно светлый;
Контрастное серое. Девушки с темными локонами выбирают вариант, создавая переход в темно-серые, седые корни. Здесь разрешается добавить немного голубых или фиолетовых оттенков.
Для светлых волос
Оттенок на светлых локонах становится заметным и ярким, чем у брюнеток
Поэтому модницы обращают внимание на серебристое омбре. Обладательницы натурального холодного цвета обращаются за перевоплощением при помощи стильного цветового перехода
В руках мастера подбираются лучшие варианты, которые подходят по длине и цветовому типу.
Для светлых волос рекомендуют варианты серого окрашивания:
- плавный переход к светлому сероватому тону;
- контрастный переход к снежному, белому, холодному оттенку;
- обратный эффект — выход к темному, серому на концах;
- сочетание разных вариантов холодного русого цвета.
Красота серебристых переливов выгодно подчеркивает преимущества светловолосой стрижки. Возможность реализовать модный эффект доступна для разной длины. Короткие стрижки получают резкий небольшой перелив к кончикам, а длинные — мягкий и растянутый спектр тонов.
Для темноволосых
Владельцы холодного цветового типа часто имеют темные волосы, серые или голубые глаза, бледную кожу. Встречаются многие комбинации признаков характерной внешности, поэтому брюнетки находят свой идеальный оттенок в категории серых.
Брюнеткам стоит посмотреть на покраски в пепельных оттенках следующей вариации;
- мягкий переход в серые и серебристые пряди;
- светлый холодный акцент только возле кончиков;
- длинный серый переход с небольшим отступом от корней и до кончиков;
- контрастное окрашивание из темного оттенка в светлый пепельный.
Девушки со средними и длинными волосами могут определить желаемую длину перехода. Часто покраску выполняют только ближе к кончикам, от середины длины или с некоторым отступом от корней.
Тигровый глаз
Покраска «тигровый глаз» — настоящий хит сезона. Его сразу присмотрели признанные иконы стиля – Оливия Уайльд, Джессика Альба, Дженнифер Лопес, Мелания Трамп и др. При правильном выполнении такое окрашивание выглядит очень красиво и максимально природно. Главное – доверить пряди опытному колористу. «Тигровый глаз» подойдет лишь темноволосым дамам (шатенкам или брюнеткам). Для покраски применяют только теплые оттенки. Наиболее популярны карамельный, шоколадный, янтарный и медовый. И еще один момент – это внешний вид волос. Они должны быть здоровыми и ухоженными. Лишь тогда «тигровый глаз» заиграет своим глянцем.
Что значит «брондинка»?
Технологию брондирования выполнят на темных и черных волосах. Подбор для черных шевелюр оттенков более сложен, а окрашивание – более трудоемкое. По максимум естественный результат проявляется на кудрях светлых тонов. Оптимально выполнять осветление на прямых волосах. Но выглядит весьма эффектно такое окрашивание на любых видах стрижек, выполнение должно быть на высоком уровне, а окончательный итог максимально приближается к естественному тону. Сочетать в бронде можно максимально три оттенка, но явных цветовых переходов не должно быть заметно, и разница не должна превосходить трех тонов. Состоит сам процесс их трех шагов, количество которых определяется исходным тоном и состоянием волос, а также идеями мастера.
Выбор базового цвета – первый шаг. Он очень важен. Светлый бронд делает даму похожей на блондинку, темный придаст сходство с шатенкой. Чаще всего локоны окрашивают в темно-русые и светло-коричневые тона, проводят тонирование, мелирование и колорирование. Самой актуальной является палитра шоколадно-кофейная. При темно-русых шевелюрах этот цвет идеален в качестве базовой основы. Следующий шаг – зонирование волос и высветление отдельных прядок. Используются оттенки натурального меда, ореха, песочные и янтарные тона. Выбор зависит от исходного тона. Для процедуры осуществляется безо всякого порядка выбор прядок, промежутки неравномерны. Самые светлые тона – для самых широких прядок, для более узких – темные оттенки.
Окрашивание верхней части шевелюры в более темные, и нижней – в более светлые цвета, называется вертикальной растяжкой цвета
Отступать от корней при процедуре важно на два либо три сантиметра, чтобы получить переливы тона. Все профессионалы-мастера подходят к брондированию индивидуально, используя фантазию и опыт максимально
Применяется техника painting, нанесение вязкого красителя мазками, концами пальцев, с накрытием волос пленкой. Затем следует тонирование насыщенным цветом для сглаживания резкости переходов. Держаться на волосах качественный бронд будет не меньше двух месяцев, отросшие корни волос незаметны. Биоламинирование продлит результат и подарит блеск и здоровье волосам.
Выбор средств
Если вы хотите скрыть седину или радикально изменить цвет прически, то вам не обойтись без окрашивания волос. Технология окрашивания, а также выбор средств при этом во многом зависят от поставленной цели. По своему воздействию все красящие препараты делятся на три группы:
- Подкрашивающие. К ним относятся различные пенки, бальзамы, шампуни, растительные настойки и отвары. Такие средства используются для временного изменения цвет волос. Они придают нужный оттенок, при этом нанося минимальный урон, ведь в их составе отсутствуют различные агрессивные вещества. Увы, полученный результат держится недолго и исчезает спустя 5-8 процедур мытья головы. Технология окрашивания волос хной, которая также относится к этой группе, позволяет продлить эффект несколько дольше. Кроме того, подобная процедура придает блеск и здоровый вид локонам.
- Полустойкие красители. К таким средствам относят препараты, позволяющие сделать цвет прядей на 2-3 тона темнее или светлее. Допускаются к использованию на ломких и хрупких волосах, так как в их составе не очень много окислителя.
- Стойкие краски. В составе подобных средств присутствует значительная доля перекиси водорода. Это вещество раскрывает чешуйки кератинового слоя каждого волоска, удаляет натуральный красящий пигмент и меняет его на искусственный. При этом локоны частично повреждаются и теряют влагу. После процедуры окрашивания необходимо использовать специальный бальзам, который помогает вернуть чешуйки на место. Но полностью восстановить волосы не удастся. Локоны, на которых применялась стойкая краска, требуют к себе постоянного внимания и заботы.
Смена цвета – довольно серьезный шаг, поэтому очень важно подобрать наиболее щадящие группы красителей и основные технологии окрашивания волос
Отросшие корни волос
Шатуш
Этот прием позволяет создать гармоничный переход цвета, не пережигая волосы осветлителем. Благодаря отсутствию ярко выраженных границ, цвет плавно растягивается по всей длине прядей. Для идеальной покраски в технике шатуш обращайся только к опытному мастеру. Он сможет создать необходимый эффект выгоревших на солнце волос.
Локоны играют и переливаются на свету, благодаря чему волосы выглядят ухоженно и здорово. При таком виде способе окрашивания небе не нужно будет часто проводить коррекцию — салон можешь посещать лишь раз в 2–3 месяца.
Глоссинг
Популярная процедура глоссинга дарит волосам роскошный блеск и освежает их цвет. В процессе используется специальный состав на натуральной основе, что делает процедуру более эффективной, чем ламинирование волос. После глоссинга ты получишь послушные, гладкие волосы, которые максимально отражают свет.
Зеркальный блеск создает плавный переход цвета, и отросшие корни волос станут менее заметными. О повторном окрашивании можно забыть минимум на 5–6 недель.
Балаяж
При балаяже осветляются только концы волос, а плавный переход цвета начинается у корней. В самом популярном исполнении светлые пряди контрастируют с темными корнями.
Балаяж обеспечивает легкость и объем волосам, придает женственность и мягкость чертам лица, не портит структуру волос, поскольку их основание не осветляется. Если вместе с мастером подобрать цвет, близкий к твоему натуральному, то регулярного окрашивания корней можно избежать. С такой техникой ты сможешь отрастить локоны нужной длины, затратив минимум средств на покраску.
Омбре
Если ты мечтаешь отрастить волосы своего цвета и при этом не выглядеть неряшливо, то техника омбре как раз для тебя. Мастер вытягивает цвет по всей длине волос, создавая плавный переход от темного цвета у корней до блонда на кончиках. Благодаря правильно выполненному переходу, волосы с темными корнями не выглядят неухоженными или запущенными.
Имей в виду, что после такого окрашивания нежелательно состригать волосы. Так как будет утрачен главный эффект омбре — переход цвета от корней к кончикам.
Сомбре
В отличие от омбре, где осветляются волосы по всей длине, при сомбре обесцвечиваются лишь отдельные пряди. Общую длину волос не трогают. Близкий к натуральному цвету оттенок и плавный переход позволяют не травмировать структуру волос. По сути, собмре — это смягченное омбре.
В технике сомбре применяются три близких друг к другу тона, переходящих из одного в другой. Классика жанра — мягкий перелив от темно-коричневого и черного в холодный или пепельный блонд. Такой незаметный контраст выглядит настолько гармонично, что даже через несколько месяцев прическа смотрится лучше, чем сразу после процедуры.
Брондирование
Название техники возникло в результате слияния двух английских слов: brown — «коричневый» и blond — «белокурый». Это что-то среднее между светлым и темным оттенком волос. Во время процедуры поочередно окрашиваются тонкие отдельные пряди в оттенки, близкие к натуральному цвету.
Брондирование позволяет создать иллюзию естественно выгоревших на солнце прядей, сделать волосы более объемными на вид. Отрастающие волосы не будут выделяться из общей массы прически, к тому же при брондировании превосходно закрашивается седина. За коррекцией можно обращаться к парикмахеру аж через 2–4 месяца после процедуры.
Стробинг
Стробинг волос предусматривает создание отблеска света в волосах и подчеркивание их природной красоты. Оттенки краски подбираются по природному цвету прядей и сохраняют их натуральный вид. При помощи оветления выделяются те участки волос, на которых нужно акцентировать внимание.
Колорист создает тонкую игру нескольких тонов и добивается эффекта живых объемных волос, придает им выразительную текстуру и глубину цвета. Волосы после стробинга можно очень долго не окрашивать. Даже через несколько месяцев будет сложно заметить разницу между отросшими и окрашенными волосами из-за схожести натурального и подобранных оттенков.
Регулярная покраска корней волос заставляет женщин слишком много времени проводить в салонах. Надеемся, эти виды модного окрашивания подскажут тебе, как с минимальным ущербом для себя и своей внешности отрастить волосы своего цвета.
Ранее мы писали, как спасти шевелюру после неудачного окрашивания с помощью маски. Благодаря этому методу ты сможешь вернуть поврежденные волосы в нормальное состояние.
Фото на превью depositphotos.
Поделиться на Facebook
published on
according to the materials
Колорирование для брюнеток
Брюнеткам при колорировании придётся немного сложнее, чем блондинкам, ведь для начала необходимо будет обесцветить те пряди волос, которые в дальнейшем будут окрашены. Такая процедура не очень хорошо сказывается на структуре волоса. Поэтому окрашивающее средство лучше выбирать с натуральными добавками, чтобы окончательно не повредить их. Хорошо использовать дополнительные маски и витаминные средства. Предварительно можно выбрать по фото тот цвет, в который хотелось бы окраситься.
Само окрашивание волос происходит после того, как локоны обесцветят. Оттенки для брюнеток существенно отличаются от тех, которые используются при окрашивании блондинок. В этом случае можно выбирать даже самые невероятные цвета.
- Если брюнетка хочет кардинально изменить свой образ, то можно попробовать сочетание с пепельным алым, либо платиновым оттенком.
- Голубоватый, цвет золота и серебра будут смотреться более спокойно.
- Отлично брюнеткам подходят оттенки от сиреневого до темно-фиолетового. Для того, чтобы правильно подобрать цвет, лучше всего сначала поэкспериментировать над внешностью в фоторедакторе.
Сложность техники в зависимости от длины: инструкция по технологии окраски своими руками
Конечный результат омбре смотрится по-разному в зависимости от длины. Намного проще произвести процедуру на длинные волосы, а также выполнить колорирование на русые волосы, и намного осторожней нужно быть с окрашиванием коротких стрижек, т.к. технология усложняется.
На длинные
Чтобы провести технику омбре на длинные волосы не достаточно просто завязать все в один хвост и покрасить его. Так окрашивание будет неаккуратным, без плавного перехода. Процесс окрашивания длинных волос хоть и кропотливый, но доступный для непрофессионала, если придерживаться всех правил колорирования в домашних условиях. Ярко и стильно выглядит колорирование на рыжие волосы. Для длинных локонов большим преимуществом является возможность окраситься в несколько оттенков, что даст стильный эффект. Такое омбре создает эффект промежуточного перехода, делая прическу невероятно красивой. Но достигнуть такого результата сложно без определенных навыков и опыта. Главная сложность техники окрашивания очень длинных волос в стиле омбре – не превышать границу нанесения окраски.
Желательно, чтобы омбре начиналось на нижней половине локонов.
На средние
Для волос средней длины не просто создать плавный переход так, чтобы это смотрелось естественно и не утяжеляло прическу в целом. Так как на средней длине омбре по высоте располагается близко к лицу, сложно самостоятельно правильно подобрать нужный оттенок. Также не просто равномерно распределить плавность перехода. Сложность окрашивания на волосы средней длины или каре заключается в том, что на такой прическе недостатки в выполнении омбре особенно заметны. Об особенностях выполнения омбре на средние волосы читайте тут.
На волосах средней длины не стоит делать резкого контраста от корней к кончикам.
На короткие
Произвести технику омбре на короткие волосы – не простая задача
Важно все делать по правилам, чтобы подчеркнуть красоту стрижки. Если опыта окрашивании недостаточно, лучше использовать натуральные оттенки, отличающиеся от базового цвета на 2-3 тона. Очень эффектно смотрится пепельное колорирование и цветной окрас
Сложно самостоятельно сделать растяжку на коротких прядках и не превратить прическу в неухоженный вид с отросшими корнями. Но все же благодаря мастерству и опыту можно идеально изменить свой образ в стиле омбре на короткую стрижку.
Так как омбре будет находиться на уровне лица, подбирать подходящий оттенок придется намного тщательней.
Колорирование для блондинок
Обладательницы светлых волос благодаря сложному окрашиванию могут подчеркнуть естественность цвета с помощью оттенения нескольких прядей. Очень хорошо подойдет тонирование. Лучше всего посмотреть фото в интернете, какие цвета максимально подойдут на такой цвет. В этом случае окрашивание происходит лёгкими средствами, которые не проникают глубоко и не воздействуют на структуру. При таком колорировании красители на волосах держат не более 40 минут.
По истечении времени необходимо промыть голову обычным шампунем и нанести питательную маску. Благодаря такому колорированию краска смывается постепенно и грань между отрастающими волосами и окрашенной частью практически не заметна. Тонирование волос не только придает невероятный цвет, но и питает их и обогащает витаминами. Единственный недостаток такого способа – это недолговечность. Данный метод требуется повторять хотя бы раз в месяц.
Блонд отлично сочетается с рыжеватыми оттенками и светло-каштановыми. Также подойдут цвета молочного шоколада и красного дерева.
Выход из черного цвета в блонд
Как подготовиться к выходу из черного?
Прежде всего необходимо проконсультироваться с колористом. Он подскажет, как сделать выход из черного цвета волос наименее травматичным для структуры локонов и достичь желаемого эффекта.
Чтобы определиться, сколько времени займет осветление и как его выполнять, колорист окрасит тестовую прядь. На небольшой участок за затылке на 30-50 минут наносится осветляющий порошок. После смывания состава профессионал оценит результат и подберет оптимальные красители и смывку.
Как делается осветление
Чтобы получить желаемый оттенок, может потребоваться до 3 процедур в салоне. Этапы осветления:
- Смывка цвета.
- Депигментация с помощью специальных средств: эмульсий, пудр, порошков, супры.
- Окрашивание в пепельно-фиолетовый оттенок с целью избавиться от рыжины.
- Тонирование в нужный цвет.
Один из способов ре-пигментации перед техникой блонд — цветовая баня. Она делается для выравнивания оттенка. Готовится смесь из профессионального шампуня, окислителя и красителя. Состав наносится на пряди, выдерживается 5-20 минут и тщательно смывается водой.
Можно ли выйти в блонд из черного за один раз
Лучшее решение — обратиться к профессионалу. Он подберет нужный способ. Попытки выйти из черного цвета за один раз с помощью щелочной смывки и перекраситься в светлый цвет в домашних условиях приведет к серьезным повреждениям локонов.
Уход за волосами после осветления
Рекомендации колористов:
- Использовать мягкие шампуни и бальзамы, которые восстановят структуру локонов.
- На какое-то время отказаться от использования фена, утюжка и средств фиксации причесок.
- Носить головные уборы, защищающие от солнца или холодного воздуха.
- Каждую неделю делать оздоравливающие маски.
Качественно выйти из черного цвета в светлый — реально. Главное, довериться профессионалам и следовать их советам.
Особенности ухода после окрашивания
Любая краска в той или иной степени портит волосы, даже если она нанесена только на кончики. Поэтому сделайте упор на дополнительное увлажнение, питание и восстановление локонов. Выбирайте косметическую продукцию с соответствующей маркировкой. Шампуни и бальзамы должны заботиться о яркости цвета и убирать желтый пигмент, если блонд искусственный
Важно, чтобы они были без сульфатов
Шампуни, которые глубоко очищают пряди, не подойдут: краситель быстрее смоется с волос.
Регулярно стригите кончики, а также обрабатывайте их средствами против сечения. Пару раз в неделю делайте восстанавливающие маски. Балуйте волосы оливковым, репейным, лимонным и другими маслами. При укладке чаще обходитесь без стайлинговых препаратов, горячих инструментов и термобигуди, чтобы не пересушивать локоны. Если всё же используете плойку, фен или утюжок, применяйте термозащиту.
Светлые волосы, как и любые другие, нуждаются в бережном уходе после омбре. Благодаря этому удастся быстро восстановить их структуру, придать локонам блеск, подчеркнуть переливы оттенков на шевелюре.
Блондинки привлекали внимание и вызывали восторг у окружающих во все времена. Недаром столько девушек стремится осветлить пряди
Сделав омбре, вы дополнительно акцентируете внимание на красивых русых, золотистых или платиновых волосах, и уж точно не останетесь незамеченной.
Другие не менее популярные техники окрашивания волос:
- покраска волос в два цвета;
- черепаховое окрашивание волос;
- трафаретное окрашивание волос;
- цветной шатуш;
- красное омбре;
- пепельный балаяж.
Технология окрашивания
Выбор техники окрашивания основывается не только на анализе овала лица, но и естественного оттенка волос. Существует единая схема окрашивания, в которую вносятся изменения в зависимости от природного оттенка волос. Делают стробинг по следующей технологии:
- изначально выбирается техника, которая основывается на детальном анализе особенностей внешности;
- волосы собираются в хвост;
- по очереди вытягиваются нужные пряди, которые в дальнейшем будут подвергаться окрашиванию;
- подготавливается краска и наносится при помощи специальной кисти;
- пряди по очереди заворачиваются в фольгу и оставляются в таком положении на определенное время;
- фольга разворачивается, краска смывается.
Теперь стоит рассмотреть особенности проведения стробинга в зависимости от природного оттенка волос.
- Черные волосы являются одним из самых сложных вариантов. В этом случае техника стробинга получается многоэтапной. Черные волосы требуется осветлять, часто эта процедура разбивается на несколько этапов: в противном случае можно сжечь волосы. После осветления подбирается краска в соответствии с полученным оттенком.
- Темные волосы не нуждаются в осветлении, результат от стробинга и без того получится хорошим. Мастеру остается лишь подобрать нужные оттенки краски.
- Рыжие волосы меньше всего подходят для стробинга. Такие волосы и без того являются яркими, поэтому подобрать удачные оттенки является непростой задачей. Для ярких рыжих оттенков больше всего подходят коричневые тона с медовым оттенком. Серо-рыжие волосы оттеняются темно-русыми красками. В случае естественных оттенков с рыжим отливом подбираются блондинистые варианты красок.
Что собой представляет
Растягивание цвета на локонах — это популярная процедура окрашивания, которая предполагает плавный переход от более тёмных цветов у корней к светлым на кончиках. Как правило, во время совершения процедуры за базу принимается натуральный цвет. Специалист отступает от 3 до 10 см у основания роста волос (учитывается длина), а затем приступает к созданию «мягкого» перехода цвета.
Ниже вы можете наблюдать, как естественно и гармонично смотрится окрашивание волос растяжка цвета на фото.
Виды растяжек
Растяжение цвета на локонах может исполняться в различных техниках. Вот самые популярные из них.
Являет собой классический вариант растягивания, при котором волосы окрашиваю в 2 цвета: тёмный у корней и светлый на кончиках. Тона плавно перетекают друг в друга. Горизонтальная линия перехода как будто смывается, но вместе с тем на шевелюре виден контраст цветов (смотрите фото).
Сомбре
На волосах создаются чуть заметные блики. Корни на 1–2 тона темнее, чем основная длина. Перехода практически не видно.
Представляет собой выбор отдельных прядей и выполнение их покраски путём растушёвки. В обязательном порядке делают отступ от корней. На выходе мы видим, что цвета плавно перетекают по шевелюре и создаётся эффект солнечных бликов.
Придаёт насыщенность и глубину цвета причёске. Осуществляется мягкий переход от натурального цвета к искусственному по вертикали. Кончики окрашиваются в цвет на 3–4 тона светлее базового.
Фламбояж
Предполагает использование клеящей ленты для проведения мелирования. Осуществляется изоляция разделения между прядями, что обеспечивает плавный переход цвета.
Плюсы и минусы
Окраска волос путём растягивания цвета обладает целым рядом выгод по отношению к обычному мелированию и другим типам окрашивания. Самые явные среди них:
- гармоничность и естественность образа, которая достигается благодаря градиенту — плавному перетеканию цвета;
- не требует регулярного подкрашивания, поскольку растяжка цвета начинается от середины длины волос, а корневая часть остаётся нетронутой или подкрашивается красителем, приближённым на 1–2 тона к натуральному;
- создаёт эффект выгоревших прядей, который отвлекает от проблемной кожи, морщинок и неправильного контура лица;
- минимально воздействует на структуру волос за счёт того, что волосы у основания их роста не прокрашиваются;
- придаёт густоту и объём, делает причёску динамичной;
- скрывает посеченные кончики.
Недостатков растягивания цвета не так уж много. Процедура не применяется для слишком коротких волос, поскольку они не дают возможности «разгуляться» цвету и создать плавный переход. Ещё одним недостатком принято считать сложность техники выполнения. Но если вы хоть немного разбираетесь в покраске, сделать растяжку можно и в домашних условиях.
Брюнетка с изюминкой
Кто сказал, что русые волосы это скучно? С волосами любой темноволосой женщины можно сделать несколько вещей: сделать их темнее, насыщенного коричневого цвета оттенка «эспрессо» с едва различимыми карамельными светлыми прядями, высветлить их до золотисто-коричневого сочетания, известного под названием «бронд», или создать равномерное наслаивание цвета в технике омбре с темным цветом у корней, постепенно светлеющим по направлению к кончикам.
Еще одна тенденция — французский каштан: по сути это 3 темных оттенка, нанесенных в технике балаяж, для создания многомерного естественного эффекта. Очень в духе француженок, которые, как всем нам известно, так очаровательны без прикрас.
Современные способы окрашивания волос в Гомеле
Сложное окрашивание волос в настоящее время достаточно популярная услуга в парикмахерских и салонах красоты. На сегодняшний день существуют такие техники окрашивания как: Ombre, Sombre, Balayage, Flame Balayage, Flamboyage, Shatush, Blur и Splash Light. Рассмотрим в чем же различие между всеми этими техниками окрашивания.
Ombre (Омбре) это такая техника окрашивания волос, при которой происходит плавный переход от более темного цвета у корней волос к более светлому оттенку на кончиках. Главное условие этого метода окрашивания волос – плавность перехода.
Sombre (Сомбре) данная техника основана на методике Ombre. При технике Sombre переход мягкий, плавный, оттенки не резкие, создается эффект слегка выгоревших прядей волос на солнце по сравнению с основным фоном.
Balayage (Балаяж) данная техника окрашивания волос пришла к нам из Францции. Дословно термин переводится как «выметание». При технике Balayage можно добиться растяжки по длине, а также нанесения краски для волос от корня, чего сложно сделать с использованием фольги (при окрашивании волос в технике Balayage не используется фольга). В зависимости от красителя (его густоты и способности раздуваться или расходиться в процессе) у корней волос прикладывают ватные жгуты.
Flamboyage (Фламбалаяж) отличительной чертой данного сложного окрашивания волос от техники Balayage – краска для волос наносится не прямо по волосам, а в виде англ.буквы V, т.е. два участка соединяются в один конец на кончиках волос.
Shatush (Шатуш) окрашивание волос с эффектом растяжки цвета. Выполняется данное сложное окрашивание без использования фольги или шапочки. При технике окрашивания Shatush волосы начесывают по всей голове, а затем наносится краситель. Окрашиваются частые хаотично выбранные пряди волос, не по всей длине, а с отступом от корней. В результате окрашивания в технике «Shatush» получается плавный и красивый переход цветов. Благодаря данной технике отросшие корни будут не так заметны.
Blur (Блюр). Данная техника окрашивания волос была создана международными специалистами компании Redken. При данной технике при окрашивании два оттенка смешиваясь, в результате дают размытость, плавный переход с помощью кисти Redken и в итоге получается третий оттенок.
Splash Light (Сплеш Лайт) (с английского языка переводится, как брызги света или всплески света). Окрашенные волосы по технике Splash Light выглядят следующим образом: высветленная горизонтальная полоса, имитирующая свет софитов на волосах.
При выборе цвета и техники окрашивания, прежде всего, следует учитывать характеристики волос, черты и формы лица. Чтобы получить желаемый результат от окрашивания волос, лучше обратиться к профессиональным парикмахерам. Парикмахеры сети парикмахерских и салонов красоты ОАО «Локон» выполняют профессиональное окрашивание волос в Гомеле, учитывая все факторы.
Мы производим такие виды окрашивания как:
- обесцвечивание волос;
- художественное мелирование;
- окраска волос в технике Омбре;
- многослойная окраска волос;
- двухцветное колорирование;
- окраска волос химическим красителем;
- окраска волос у корней химическим красителем;
- брондирование волос.
Окрашивание волос в сети парикмахерских и салонах красоты ОАО «Локон» осуществляется с помощью красок для волос от ведущих итальянских компаний и других зарубежных производителей.
Парикмахеры сети парикмахерских и салонов красоты ОАО «Локон» сделают не только профессиональное окрашивание волос в Гомеле, но и посоветуют, как правильно ухаживать за волосами после их окрашивания.
Получить консультацию, а также произвести запись на окрашивание волос можно по одному из номеров телефона указанных здесь.
Будем рады видеть вас в числе наших посетителей
Выравниваем цвет на темных волосах
У вас темные волосы, и вы тоже не угадали с цветом, или результат вас, мягко говоря, разочаровал? Не переживайте, исправить ситуацию можно, и сейчас мы расскажем как!
Неудачная смывка
Studio Blond L’Oréal Professionnel Platinum Platinum Plus«Не всегда можно исправить неудачное домашнее окрашивание и особенно осветление. Если мы понимаем, что волосы уже настолько повреждены, можно только предложить закрасить их темнее или отстригать».
Алексей Нагорский
Стилист L’Oréal Professionnel
Если окрашивание в темный тон не удалось и волосы по всей длине получились разных цветов (такое бывает, если волосы до этого были обесцвечены), то можно попробовать оттеночный уход Touche Chromatique от Kérastase. Он есть и для темных волос: медный и красный оттенки усиливают цвет, помогая привести палитру ваших волос к одному знаменателю.
В салоне проблему решат быстро, правильно затонировав волосы в нужный оттенок. Так, у бренда Redken есть тонирующий краситель-блеск Shades EQ Gloss без аммиака, который действует еще и как уход. После него ваши волосы будут даже лучше, чем были до окрашиваний!
Окрашивание
|
Мастера-парикмахеры Центра красоты «РиФ» предложат вам, окрашивание волос с помощью красителей и технологий нового поколения. Для создания незабываемого образа, вы можете использовать:
Окрашивание в один тон не всегда осуществляется одной краской. Зачастую специалист смешивает несколько цветов краски, чтобы получился желаемый оттенок. Процедура окрашивания проводится по сухим волосам. Поэтапно мастер наносит краску на волосы, распределяя ее по всей длине волоса. Затем краску выдерживают на волосах от 30 до 50 мин, затем смывают. После окрашивания волосы сияют изнутри насыщенным цветом, привлекая внимание окружающих. Процедуру повторяют по мере отрастания корней примерно 1 раз в месяц.
Мелирование – способ окрашивания волос, при котором отбеливаются не все волосы, а лишь их часть – отдельные прядки.
Существуют различные варианты мелирования:
- классическое мелирование – самый популярный и пользующийся спросом способ мелирования;
- американское мелирование – молодой вид мелирования, в процессе такого окрашивания используется разноцветная фольга, а также несколько красителей, схожих по тону;
- мелирование «мажимеш» — самый щадящий способ окрашивания волос, он придает золотистый перелив всей прическе;
- мелирование «белиаж» — для экстравагантных натур, готовых ставить эксперименты на своей прическе. Суть такого мелирования в том, что окрашиваются лишь кончики волос. Очень хорошо «белиаж» смотрится на коротких и разноярусных стрижках;
- мелирование «мажиконтраст» — это специальная техника, которая позволяет добиться контраста темных и светлых прядей;
- CrazyColors («безумные цвета») – это способ мелирования для стильных молодых особ. Оттенки волос могут быть самыми разными: от классического белого до ярко-фиолетового. Такой вариант мелирования еще называют «мелирование с элементами колорирования».
- Калифорнийское мелирование — щадящая форма высветления отдельных прядок, придающая прическе эффект выгоревших на солнце волос. После процедуры волосы выглядят живыми, ухоженными и здоровыми. Плавные переходы цветов позволяют не переживать о ежемесячном подкрашивании корней, поэтому такой тип окрашивания идеально подходит не только блондинкам, но и брюнеткам.
Окрашивание волос Ombre является ультрамодной техникой. Его визитная карточка – стильный плавный переход от более темного оттенка у корней к более светлому на кончиках волос. Этот стиль уже примерили на себе большинство модниц и звезд.
Цветовая гамма крашения в технике омбре (амбре) может быть различной, однако предпочтение отдается двухцветному окрашиванию с использованием оттенков, максимально приближенных к натуральным.
Техника шатуш позволяет создать эффект выгоревших волос, которые при этом выглядят максимально естественно. Времени на окрашивание в технике шатуш уходит меньше, чем на обычное мелирование. В среднем шатуш волос занимает около 40 минут.
Колорирование как вид окрашивания бывает двух видов. В основе первого лежит метод отбеливания прядей и покраска их в светлые оттенки. Второй вид, именно само колорирование, предусматривает окрашивание волос в несколько цветов и оттенков, контрастных или близких между собой по тону, что позволяет создавать более оригинальные и яркие образы.
Последним трендом моды стало неоновое колорирование, с помощью которого окрашивается в яркие цвета отдельная прядь волос. Так как обзавестись зеленым, синим или красным локоном – довольно смелое решение, для неонового колорирования используются нестойкие красители. Буквально после 5-6-го мытья головы, цвет полностью смывается.
Подпишитесь на наш Instsgram, будьте в курсе наших акций, новинок и событий.
| Шатуш, балаяж, брондирование и другие модные тренды окрашивания волос
Осенью 2015 года в моде по-прежнему натуральность. Актуальным остается не только естественный макияж, но и окрашивание. Стилисты в наступившем сезоне предлагают интересные техники, которые помогают увеличивать объем волос с помощью цвета. Это отличная новость для тех, у кого не такая густая шевелюра, как в рекламе известного шампуня. Самые популярные оттенки этой осени – золото и медь.
Чтобы добиться визуального эффекта объема, парикмахеры комбинируют техники окрашивания волос. К примеру, мастер может сочетать балаяж и шатуш, американское колорирование и калифорнийское мелирование. Предлагаем обзор современных трендов в окрашивании волос.
Шатуш
Шатуш — это свободное мелирование без фольги. Эта техника позволяет создать плавный, акварельный переход от темных корней к светлым кончикам. Получается естественный эффект выгоревших на солнце волос. Чтобы сделать шатуш, волосы разделяют на пряди и перед окрашиванием начесывают каждую из них. Затем мастер короткими мазками наносит краску, а корни оставляет нетронутыми. Цветовой переход получается плавным, а разница между отрастающими корнями и осветленными волосами выглядит естественно.
Калифорнийское мелирование
Разновидностью шатуша считается калифорнийское мелирование. Это более щадящая техника, при которой волосы не начесывают перед окрашиванием, а собирают в маленькие пучки. Эффект окрашивания получается практически таким же. Осветление тонких прядей с использованием фольги называют «американ колорс».
Омбре
Популярная в прошлые сезоны техника окрашивания омбре тоже остается актуальной, только переход от темного цвета к светлому должен быть максимально плавным и мягким. В идеале омбре должно создавать иллюзию еле заметного, постепенного перехода от темной прикорневой зоны к очень светлым концам.
Брондирование
Термин брондирование произошел от английских слов brown и blond и подразумевает сочетание коричневого и светлого оттенков. Это одно из последних направлений в современной колористике. При брондировании мастер использует несколько (от 3 до 7) оттенков, близких к основному тону. Например, если основной цвет – темно-русый, то дополнительные цвета подбираются на 1-2 оттенка темнее и светлее. В отличие от омбре, сочетания цветов получаются более мягкими, а переходы – более плавными. После брондирования волосы выглядят естественными, густыми и объемными. Цвет смотрится шикарно, оттенки переливаются при свете и имитируют эффект солнечных бликов.
Балаяж
Еще одна популярная техника окрашивания называется балаяж. Придумали ее во Франции. Это осветление отдельных прядей, чаще всего – у лица или на кончиках. При этой технике краску не наносят на корни, поэтому отрастают волосы незаметно. Если вы хотите освежить прическу, но не готовы к регулярному посещению салона, как при традиционном мелировании, балаяж будет идеальным вариантом. Обновлять его достаточно один раз в несколько месяцев. Осветленные пряди у лица будут выглядеть ухожено и создавать ощущение, как будто вы недавно побывали в салоне.
Tweet
Share
Plus
Share
Class
Pin
Упс ! Страница не найдена !
Коллекция весна-лето
Коллекция осень-зима
Backstage осень-зима
Backstage весна-лето
Балаяж окрашивание в Минске | Омбре в Минске
ОМБРЕ
Слово «омбре» переводится с французского как «тень». Именно так называют технику окрашивания, которая позволяет создать градиентный переход с множеством оттенков от темных корней к светлым концам. В последние годы она пользуется спросом и сейчас приобрела большое разнообразие цветовых вариаций, которые не исключают использование ярких цветов вроде розового или голубого.
СОМБРЕ
Сомбре – это вариант предыдущей техники, при которой неокрашенная часть отличается от осветленных концов всего на 0,5 или 1 тон.
БАЛАЯЖ
Если вы хотите освежить образ, но боитесь навредить своей шевелюре, выбирайте балаяж волос, ведь его называют одним из самых щадящих способов осветления. Это современный вариант мелирования, во время которого окрашивают не всю длину, а только ее часть, не более 2?3 отдельными прядями, что создает дополнительный объем. Опытный мастер может сделать балаяж на прическу практически любой сложности.
БРОНДИРОВАНИЕ
Еще одна актуальная разновидность мелирования, при которой мастер применяет несколько разных тонов, что создаёт эффект световых бликов. После брондирования ваша шевелюра будет выглядеть густой, объемной и сияющей.
ШАТУШ
В этой вариации осветляют отдельные локоны у лица и кончики, используя два-три максимально близких тона к естественному окрасу вашей прически. Плавный переход имитирует эффект выгоревших на солнце волос, что выглядит весьма естественно.
НЮД
«Nude» с английского переводится как «обнаженный». Неожиданное название закрепилось за этой техникой окрашивания, так как она предполагает использование натуральных оттенков разной температуры, к примеру, платинового и карамельного, что позволяет добиться потрясающего результата. Причем подходит нюд абсолютно всем вне зависимости от цветотипа.
СТРОБИНГ
Он нацелен на то, чтобы скрыть недостатки и подчеркнуть достоинства внешности, что требует высокого мастерства колориста. Ведь он проводит осветление без какого-либо общего алгоритма, ориентируясь лишь на те черты внешности, которые он хочет подчеркнуть или замаскировать. К примеру, стробинг может визуально изменить форму лица или по-новому обыграть цвет кожи. Он универсален, но при этом два одинаковых вида стробинга найти практически невозможно.
ФОЛАЯЖ
Современное мелирование при помощи фольги. В результате пряди получаются контрастными и четкими, с размытым у корней основанием.
Окрашивание волос — Body&Soul
Каждая женщина любит эксперименты с внешностью. Смена образа помогает по-новому посмотреть на окружающий мир, улучшить настроение, обновить отношения. К тому же поход стилисту снимает стресс, а новая стрижка или окрашивание волос – первая ступень к жизненным изменениям.
Салон красоты Body&Soul предлагает прекрасным дамам необыкновенное перевоплощение. Сложная окраска волос и применение различных профессиональных техник помогут сделать образ неповторимым, подчеркнуть свой индивидуальный стиль. У нас работают профессиональные колористы, которые постоянно совершенствуют свою технику. Для процедуры используются только высококачественные европейские красители и материалы. Вы на 100% можете быть уверены в безопасности процедуры. Наши цены вас приятно удивят!
Профессиональная покраска волос Николаев
Хотите изменить свой стиль? Обращайтесь к профессионалам! Прежде всего нужно определиться с видом окрашивания, выбрать салон, где будет проходить процедура. Если вы хотите сделать сложное окрашивание волос цена на него не может быть низкой. Ведь такая работа достаточно сложная и требует высокой квалификации мастера. Дешевые парикмахерские услуги обычно предлагают специалисты без опыта работы. В таком случае никто не сможет предсказать конечный результат. Не стоит соглашаться на сомнительные эксперименты, доверяйте только мастерам своего дела.
Современное и безопасное окрашивание волос Николаев
В салоне красоты Body&Soul предлагаются следующие услуги:
- Окрашивание корней и по длине – прекрасный выбор для девушек, которые нуждаются в систематическом обновлении цвета прически.
- Омбре – двутональная покраска с плавным переходом оттенков, хорошо смотрится на любой длине шевелюры.
- Шатуш – щадящая техника, которая отлично оттенит естественный цвет шевелюры, придаст ей густоту, объем. Мастер подбирает подходящие оттенки для окрашивания, делая между ними естественные переходы.
- Балаяж – более контрастный метод покраски, великолепно смотрится на коротких стрижках и кучерявых локонах.
- Калифорнийское мелирование – метод, который сочетает мелирование и омбре.
- Брондирование – технология многоцветного колоривания в сочетании с мелированием.
- Декапаж – процедура, которая поможет вернуть натуральный цвет.
- Классическое блондирование – метод, который уже много лет пользуется популярностью у представительниц прекрасного пола, позволяет оттенить естественный шарм и красоту.
Body&Soul – профессиональный салон красоты: покраска волос любой сложности, высокое качество доступные цены
В первую очередь при выборе цвета и методики – ориентируйтесь на индивидуальные особенности своей внешности, а не только на модные тренды. Запомните, как бы красиво не выглядела покраска на фото в журнале, не факт, что оттенок так же эффектно будет смотреться при вашей внешности.
Перед проведением процедуры рекомендуем проконсультироваться с профессиональным колористом салона Body&Soul. Мастер выслушает ваши пожелания, оценит состояние шевелюры, подскажет метод окрашивания, подберет цвет. Если состояние шевелюры оставляет желать лучшего, колорист предложит максимально щадящее окрашивание волос, стоимость которого не будет запредельно высокой. Мы предлагаем самые низкие цены на парикмахерские услуги. Подробнее можно узнать на сайте.
Меняем образ – профессиональный салон красоты в Николаеве
Многие представительницы прекрасного пола стремятся сэкономить и проводят процедуру самостоятельно в домашних условиях. Профессиональные стилисты предостерегают от этого опрометчивого шага. Непреложный факт – сделать качественное сложное окрашивание самостоятельно невозможно. Прическа будет выглядеть великолепно только при условии, что оттенки подобраны правильно, цвет распределен равномерно по всей длине пряди, между тонами соблюден естественный переход. Брюнеткам, шатенкам и рыжим может дополнительно потребоваться осветление, чтобы получить нужный оттенок. Как видите, нюансов в этом сложном парикмахерском деле много. Поэтому лучше проводить процедуру у мастера с достаточным опытом, который досконально изучил все детали.
В салоне красоты Body&Soul клиенты гарантированно получают европейский сервис и безукоризненное качество работы:
- Перед процедурой колорист оценит состояние вашей шевелюры, при необходимости посоветует процедуры по уходу за волосами.
- В независимости от природного цвета мастер поможет подобрать желаемый оттенок краски, цвет кожи, глаз, тип волос.
- Ориентируясь на пожелания, клиента стилист подскажет оригинальное решение, которое подчеркнет ваш неповторимый стиль и шарм.
Не соглашайтесь на сомнительные авантюры, доверяйте свой стиль только профессионалам!
Окрашивание омбре и шатуш — Новые статьи — Статьи
Тенденции 2013-2014 года в области окрашивания волос диктуют нам естественность и элегантный классический образ. Именно поэтому техники окрашивания шатуш и омбре снискали популярность у многих голливудских селебрити.Шатуш представляет собой разновидность мелирования, но с выполнением начеса и без применения фольги, поэтому она по праву называется одной из самых щадящих техник окрашивания. С ее помощью можно достичь плавного перехода из одного цвета в другой — от темных корней к светлым кончикам, расставляя стильные и, несомненно, эффектные акценты на волосах. Именно благодаря шатуш клиентки нашего салона могут одновременно получить объемность прически и максимально естественный эффект «затронутых палящим солнцем прядок».
Очень часто клиенты путают две техники – шатуш и балаяж. На самом деле путаница вполне обоснованна: обе технологии построены на окрашивании волос с отступом у корней. Только в технике шатуш другой принцип действия: здесь делается частое мелирование открытым способом. За счет смешения многочисленных, хаотично расположенных прядок концы волос приобретают очень светлый цвет. В прикорневой зоне по желанию клиента делается разный отступ: может быть как достаточно большая длина натуральных корней, так и практически от корня. В любом случае шатуш — это растяжка цвета, но не затрагивающая корни волос.
Относительно цвета и длины волос – шатуш выполняется преимущественно на длинные, а также средней длины волосы, как правило, на волосы темных оттенков (1-5 тона). На светлых волосах практически невозможно добиться эффекта выгоревших прядей.
Плавность перехода достигается за счет того, что окрашиваются только выделенных зоны, непосредственно сам начес, корни при этом не затрагиваются. Именно этим обусловлено достижение эффекта «блика» и нечеткого контраста.
В технике шатуш, как и в омбре, не используется фольга, поэтому структура волоса гораздо меньше повреждается, чем при таком окрашивании, как классическое мелирование или колорирование. Сама процедура длится приблизительно 40 минут, причем в совокупности со временем, затраченным на нанесение красящей смеси. Повторять шатуш-мелирование можно раз в 2,5-3 месяца, так как полученные в результате такого окрашивания линии хорошо растушеваны, и при отрастании волос будут размыты границы перехода оттенков.
В салон красоты «Милена» часто приходят клиентки, страдающие аллергическими реакциями и переживающие о том, что краска негативно воздействует на кожу головы, реагируя на красители, поэтому им рекомендуется воспользоваться услугой шатуш-мелирование.
Также стоит отметить: с помощью данного способа окрашивания можно скрыть неудачное мелирование и результат предыдущего окрашивания, а также замаскировать незначительную седину.
Омбре (от французского Ombre — теневой, с градацией в тоне) – это ультрамодный плавный переход оттенков от темного к более светлому на кончиках, способный создавать глубину цвета и легкий эффект выгоревших волос. В отличии от техники шатуш омбре позволяет достичь более совершенного окрашивания в объемном варианте.
Данный способ можно использовать как на натуральные, так и уже окрашенные волосы. На натуральных волосах создается более интенсивное осветление.
Когда волосы очень часто подвергаются окрашиванию, цвет становится слишком монотонным и искусственным от корней до кончиков, его можно оживить при помощи омбре. И, безусловно, результат вас удивит: стильный переход оттенков на волосах – это финишный аккорд любой прически.
Если ваши волосы очень светлые, почти платиновый блонд, то осветлить их еще больше вам не удастся, если русые или темный блонд — из темной блондинки вы сможете превратиться в блондинку со стильным омбре.
Данная техника будет уместна, если вы являетесь обладательницей длинной челки: амбре наносится на самые кончики. Благодаря одновременному омбре на кончиках челки и кончиках волос клиенты нашего салона смогут получить завершенный образ элегантности и стиля.
Очень часто клиенты интересуются, на каком уровне следует начинать омбре и какая должна быть длина волос.
Если волосы длинные, переход цвета можно начинать чуть ниже лопаток, если длина на уровне плеч — осветлять желательно на уровне мочки уха. Классическая длина для омбре – по плечи; именно с такой длиной образ получается наиболее выигрышным. Но вы можете играть с высотой перехода цвета в зависимости от длины ваших волос и личных предпочтений.
С таким окрашиванием любой прическе можно придать особый лоск: будь то голливудские локоны, скрепленные невидимками с одной стороны и эффектно ниспадающие с другой, либо гладкие прямые волосы с играющими солнечными бликами на кончиках.
пятен по гистологии | DermNet NZ
Автор: Брайан Ву PhD. Кандидат медицинских наук, Медицинская школа Кека, Лос-Анджелес, США; Главный редактор: д-р Аманда Окли, дерматолог, Гамильтон, Новая Зеландия, июль 2015 г.
Что такое гистологические пятна?
Гистология и гистопатология образцов биопсии важны при диагностике кожных заболеваний. Они часто используются для обнаружения и диагностики рака кожи.
- Гистология — это изучение отдельных частей и структур, составляющих клетку, а также взаимосвязи между структурой и функцией.
- Гистопатология относится к изучению аномальных или больных тканей.
Гистологические красители используются для окрашивания различных структур внутри клеток.
Обработка тканей
Перед окрашиванием предметного стекла необходимо подготовить ткань и поместить на предметное стекло.
Парафиновая техника является наиболее распространенным способом подготовки гистологического предметного стекла и включает следующие этапы:
- Образец ткани повторно разрезается и фиксируется на предметном стекле
- Образец обезвоживается, затем заливается воском (парафином)
- Ткань разрезается и закрепляется
- Образец ткани очищается, затем окрашивается
- Затем ткань помещают на постоянное предметное стекло.
Другие распространенные гистологические методы включают:
- Замороженные срезы — образцы тканей замораживают, разрезают и разрезают холодным лезвием, а затем окрашивают и исследуют.
- Полутонкий метод — ткани заделывают в среду, подобную эпоксидной смоле, что позволяет срезать образец более тонко.
Какие бывают типы гистологических красителей?
Некоторые из наиболее распространенных типов пятен.
Пятно H&E
Это наиболее часто используемая комбинация для общего окрашивания образцов кожи и особенно полезна при диагностике и классификации рака.
- Гемотоксилин окрашивает определенные части клетки, например ядро, в синий цвет
- Эозин окрашивает другие части клетки, например цитоплазму, в красный или розовый цвет.
Окрашивание муцином
Окрашивание муцином лучше всего подходит для обнаружения и окрашивания мукополисахаридов. Примеры пятен от муцина:
- Альциановый синий
- Муцикармин
- Период кислоты-Шиффа (PAS).
Меланиновые пятна
Меланиновые пятна, как следует из названия, используются для окрашивания меланином и обычно используются при диагностике меланомы.Одним из типичных примеров пятен меланина является пятно Фонтана-Массона.
Пятна трихрома
Пятна трихрома используют комбинацию трех различных красителей для достижения своего эффекта. Они используются специально для окрашивания липидов. Распространенные трихромные пятна включают:
- Гомори трихром
- Трихром Мэллори,
- Суданские пятна. Одно конкретное судановое пятно, известное как красное масло O, часто используется для диагностики жировой эмболии в легких.
Какие бывают наиболее распространенные гистологические пятна?
В таблице ниже приведены примеры различных гистологических красителей.
Каковы преимущества и недостатки традиционной гистологии?
Преимущества гистологического и гистологического окрашивания:
- Это один из наименее дорогих морфологических методов
- Позволяет исследовать большие срезы образца ткани
- Можно собрать относительно быстро и с минимальным риском для пациента или без него
- Предоставляет врачам необходимый диагностический инструмент и позволяет им исследовать внутреннюю архитектуру различных клеток и тканей.
К недостаткам гистологического и гистологического окрашивания относятся:
- Подготовка слайдов с использованием парафиновой техники может занять много времени; замороженные слайды готовятся быстрее, но это может повлиять на разрешение, особенно при использовании световой микроскопии
- Метод подвержен человеческой ошибке во время подготовки и анализа слайдов.
- Этот тип окрашивания может быть менее специфичным, чем специальные методы окрашивания, такие как иммуногистохимическое (ИГХ) окрашивание.
- Иногда бывает трудно идентифицировать определенные типы клеток с помощью этого метода, что может повлиять на его ценность как диагностического инструмента.
Гистология: пятна и интерпретация срезов
При наблюдении образца ткани под световым микроскопом часто бывает трудно различить разные клетки и ткани, поскольку они почти бесцветны. Поэтому окрашивание используется для создания дифференциальной окраски, что позволяет более четко наблюдать и анализировать клетки.
Окрашивание широко используется в гистопатологии и диагностике, поскольку оно позволяет выявлять отклонения в количестве и структуре клеток под микроскопом. В гистологии используется огромное количество красителей, от красителей и металлов до меченых антител. Некоторые пятна значительно изменяют окраску клеток и тканей, отличаясь от цвета исходного красочного комплекса, явление, известное как метахромазия. Для окрашивания обычно используют парафиновые срезы ткани.Они регидратируются, а затем становятся полупрозрачными (очищаются) с помощью очищающего вещества, такого как ксилол, перед окрашиванием. В этой статье описаны наиболее распространенные красители, используемые в гистологии.
Специальные пятна
Специальные красители используются для идентификации и демонстрации определенных структур и тканей, которые не визуализируются окрашиванием H&E. Существует множество специальных пятен, краткая информация о некоторых из них приведена ниже.
Ван Гизон
Окрашивание по Ван Гизону — очень распространенное средство для выделения разницы между коллагеном и другой соединительной тканью , такой как мышечные ткани.Его часто используют для определения характерного расположения волокон при разных типах опухолей. Краситель использует смесь пикриновой кислоты и кислого фуксина для проникновения в образец ткани, в результате чего коллаген становится красным . Окружающие мышечные ткани и клетки крови окрашиваются в желтый цвет .
Окрашивание по Ван ГизонуМолекулы пикриновой кислоты очень малы и поэтому проникают во все типы тканей. Однако они полностью задерживаются только в красных кровяных тельцах и мышцах, так как они имеют тонкую плотную структуру. Кислый фуксин имеет более крупные молекулы, которые проникают сквозь коллаген, вытесняя молекулы пикриновой кислоты. Это приводит к тому, что коллаген окрашивается иначе, чем мышцы и красные кровяные тельца, что позволяет дифференцироваться. В настоящее время вещество под названием ponceau S часто используется в качестве заменителя кислого фуксина, поскольку оно немного более эффективно.
Для проведения окрашивания по Ван Гизону выполняются следующие шаги:
- Секция регидратируется, а затем очищается с использованием ксилола
- Срез окрашивают последовательностью целестин синий-гематоксилин для окраски ядер
- Избыток смывается водой
- Срез погружают в краситель по Ван Гизону на 1-5 минут
- Повторная промывка дистиллированной водой
- Затем его обезвоживают этанолом и очищают ксилолом
- Секция монтируется с использованием смолистой среды
Толуидиновый синий
Толуидиновый синий, иногда называемый хлоридом толония, представляет собой тип метахроматического красителя, который является ацидофильным, что означает, что он окрашивает кислых тканей .Его особенно привлекают нуклеиновые кислоты, и поэтому он используется для окрашивания тканей высокими концентрациями ДНК и РНК . При контакте с толуидиновым синим нуклеиновые кислоты приобретают синий цвет, а муцины и хрящи становятся пурпурными. Он используется для идентификации гранул, муцинов и хрящей тучных клеток.
Окраска хряща трахеи толуидиновым синим (гистологический препарат)Основная процедура окрашивания толуидиновым синим следующая:
- Срез ткани гидратирован дистиллированной водой
- Секцию погружают в Толуидиновый синий на несколько минут
- Избыток смывается дистиллированной водой
- Затем его обезвоживают этанолом и очищают ксилолом
- Секция монтируется с использованием смолистой среды
Синий Альциан
Альциановый синий — один из альциановых красителей, представленных еще в 1948 году.Другие альциановые красители включают альциановый желтый и альциановый зеленый. Это семейство поливалентных основных красителей содержит 2-4 изотиоурониевых групп, имеющих положительный заряд.
Альциановый синий — это фталоцианиновый краситель, который проявляет специфичность к таким веществам, как гликозаминогликанов и кислых муцинов . Чтобы охарактеризовать подтипы кислых муцинов, pH раствора альцианового синего варьируется и регулируется. Окрашивание альциановым синим приводит к тому, что кислые муцины и слизистые вещества выглядят синим , а ядра выглядят красноватыми розовыми , когда используется нейтральный красный контраст.Красители Alcian Blue растворимы в воде и кажутся синими, поскольку содержат медь. Они присоединяются к мукополисахаридам и гликопротеинам сульфата и карбоксилированной кислоты, а связывание красителя является чисто электростатическим. Это окрашивание проводят, чтобы увидеть мукоидную дегенерацию и идентифицировать кислые муцины, которые выделяются различными опухолями соединительной и эпителиальной ткани . Процедура окрашивания обычно проводится так:
- Секция гидратирована дистиллированной водой
- Он погружен в альцианский синий (время в альциановом синем может варьироваться)
- Затем его промывают в водопроводной воде и ополаскивают дистиллированной водой
- Ядерно-быстрый красный добавляется в качестве контрастного красителя на 5 минут
- Затем его обезвоживают этанолом и очищают ксилолом
- Секция монтируется с использованием смолистой среды
Гимза
Это пятно крови, которое можно использовать гистопатологически.Он был разработан в первую очередь для демонстрации малярийных паразитов. Позже он был использован в гистологии из-за его высококачественных способностей окрашивания хроматина и ядерных мембран. Он по-разному окрашивает человеческие и патогенные клетки, поэтому он используется в диагностике многих заболеваний, поскольку он окрашивает человеческие клетки в фиолетовый цвет, а бактериальные клетки в розовый, чтобы их можно было дифференцировать. Он также используется для окрашивания клеток крови, чтобы можно было наблюдать за их составом и структурой.
Окраска нейтрофила по Гимзе (гистологический препарат). Ядра окрашены в фиолетовый цвет , а цитоплазма окрашена от синего до бледно-розового , в зависимости от типа клеток.Окрашивание дифференцирует гранулы различных клеток крови , окрашивая их в разные цвета. Базофилы показывают темно-синие гранулы, а эозинофилы показывают оранжевые гранулы.
Процесс окрашивания выглядит следующим образом:
- Пленка кровь воздушная высушенная
- Затем его погружают в краситель Гимза на 1-2 минуты
- Его погружают в деионизированную воду на 2–4 минуты, а затем промывают деионизированной водой
- Затем воздух осушенный
Ретикулин
Окрашивание ретикулином заключается в использовании импрегнации серебром секции, чтобы выделить волокон ретикулина (коллаген III типа).Он в основном используется в гистопатологии печени, но также может использоваться для оценки нарушений в селезенке, костном мозге и почках. В печени и некроз, и цирроз вызывают нерегулярный характер ретикулина. Изменения ретикулина также могут сигнализировать о наличии опухолей.
Окрашивание ретикулином костного мозга при миелопролиферативном заболевании (гистологический слайд)Окрашивание вызывает окрашивание волокон черным , которое контрастирует с более светлым серым или розовым фоном .Во время процедуры окрашивания ткань сначала должна быть окислена, а затем сенсибилизирована квасцами железа перед добавлением серебра. После добавления серебра его необходимо уменьшить с помощью формалина, чтобы оно стало видимым. Ядра также могут быть контрастно окрашены красным ядерно-быстрым красным, чтобы сделать их видимыми.
Процесс окрашивания описан ниже:
- Гидратация секции осуществляется дистиллированной водой
- Погружается в раствор манганата калия на 5 минут
- Моется в водопроводной воде
- 5% добавляют щавелевую кислоту , затем смывают дистиллированной водой
- Срез сенсибилизируют с помощью квасцов железа в течение 10 минут
- Промывают в водопроводной воде и ополаскивают дистиллированной водой
- Затем его несколько раз окунают в раствор серебра , затем в дистиллированную воду
- Погружен в 10% раствор формальдегида на 30 секунд
- Промывается дистиллированной водой
- Хлорид золота добавляют в течение 1 минуты и смывают дистиллированной водой
- Затем срез погружают в 5% гипо на 1 минуту и смывают в водопроводной воде
- Ядерно-быстрый красный добавляется в качестве контрастного красителя на 5 минут
- Затем его обезвоживают этанолом и очищают ксилолом
- Секция монтируется с использованием смолистой среды
Ниссл
Окрашивание по Нисслюиспользуется для визуализации субстанции Ниссля (скопления грубого эндоплазматического ретикулума и свободных полирибосом), которая обнаруживается в нейронах.Этот краситель отличает нейроны от глии, и цитоархитектура нейронов может быть хорошо изучена с помощью этого красителя. Потеря вещества Ниссля может означать такие аномалии, как повреждение или дегенерация клеток, что, в свою очередь, может указывать на заболевание.
Окраска по Нисслю телец Ниссля (гистологический препарат)Обычно используемый краситель для этого окрашивания называется Cresyl Echt Violet Acetate, который смешивают в растворе с дистиллированной водой. Это окрашивает вещество Ниссля темно-синим или темно-фиолетовым цветом .
Для окрашивания по Нисслю используются следующие шаги:
- Секция гидратирована дистиллированной водой
- Погружается в Cresyl Echt violet ацетат на 2 минуты
- Промывается дистиллированной водой
- Затем его обезвоживают этанолом и очищают ксилолом
- Затем секция монтируется с использованием смолистой среды
Orcein
Окрашивание орсеином используется для идентификации телец включения вирусов.Это вирусные частицы в клетках человека, которые можно увидеть с помощью световой микроскопии, в отличие от самих вирусов. Окраска Orcein обычно используется для диагностики гепатита B, который вызывает образование телец включения в гепатоцитах. Orcein состоит из смеси амино- и гидроксифеноксазоновых соединений. В результате окрашивания тельца включения окрашиваются в темно-коричнево-пурпурный цвет . Белки, связанные с медью, также становятся темно-пурпурными. В процедуре используется раствор Орсеина в сочетании с 70% этанолом и соляной кислотой.
Окрашивание эластичных пластинок Орсеином (гистологический препарат)Процесс окрашивания Орсеина выглядит следующим образом:
- Гидратация секции осуществляется дистиллированной водой
- Окунуть в раствор перманганата калия на 10 минут
- Мыть в воде
- Окунуть в 5% щавелевую кислоту до бесцветного состояния
- Мойка под краном Вода
- 0.5% Затем добавляют периодическую кислоту в течение 5 минут
- Затем его промывают в водопроводной воде и ополаскивают дистиллированной водой
- Затем срез погружают в раствор Орсеина от 4 до 16 часов при комнатной температуре
- Промывается этанолом
- Затем его обезвоживают этанолом и очищают ксилолом
- Секция монтируется с использованием смолистой среды
Судан черный B
Это неионный гидрофобный краситель, используемый для идентификации липидов и липофусцинов .Липофусцины — это возрастные пигменты, встречающиеся у пожилых людей в постоянных клетках, таких как нейроны и клетки сердца. Липофусцин образуется в результате сборки лизосом, которые поглотили неперевариваемые части клеток. Как следует из названия, Sudan Black B окрашивает липофусцины в черный цвет . Его обычно используют для окрашивания липидов и жиров, поэтому важно то, что он окрашивает липофусцины. Он также может окрашивать эритроциты в черный цвет.
Чтобы провести окрашивание Судана Black B, необходимо выполнить следующие шаги:
- Образец гидратирован спиртом
- Затем погружают в суданский черный на ночь
- Затем промывают в этаноле и промывают в водопроводной воде
- Затем секция монтируется с помощью водной монтажной среды
Трихром Массона
Трихромные пятна, как следует из названия, представляют собой смесь трех красителей, используемых для дифференциации мышц , коллагеновых волокон , фибрина и эритроцитов в соединительной ткани.Один из трех красителей обычно является ядерным красителем, а два других красителя в основном дифференцируют коллаген и мышечные волокна.
Трихром Массона — одно из часто используемых красителей трихрома, используемых для подчеркивания разницы между коллагеном и мышечной тканью, как по Ван Гизону. Он широко используется для оценки коллагена при различных патологиях , например, при циррозе или опухолях печени. Три разных красителя в этом пятне имеют молекулы разного размера, которые по-разному проникают в ткани.Там, где могут проникать более крупные молекулы, более мелкие вытесняются. Сначала используется кислый краситель, такой как алый Бибрих, затем фосфорновольфрамовая и фосфорно-молибденовая кислоты и, наконец, краситель для волокон, например, светло-зеленый. Гематоксилин железа Вейгерта также используется, но в качестве фиксатора в начале процедуры. После окрашивания ядра выглядят черноватыми или синими , мышца и фибрин выглядят красными , а коллаген появляется зеленым .
Окрашивание трихромом Массона, показывающее легочную гипертоническую артериопатию (гистологический слайд)Обычные этапы окрашивания парафиновых срезов перечислены ниже:
- Секция регидратируется, а затем очищается с использованием ксилола
- Затем его очищают спиртом и ополаскивают дистиллированной водой
- Окрашивают гематоксилином железа Вейгерта в течение 5-10 минут
- Секция снова промывается дистиллированной водой
- Затем его погружают в фуксин алой кислоты Бибриха на 5-10 минут
- Избыток смывается дистиллированной водой
- Затем окрашивают фосфорновольфрамом и фосфорномолибденовой кислотой в течение 10 минут
- Сразу после окрашивания светло-зеленым в течение 5 минут
- Избыток снова смывают дистиллированной водой
- Затем секцию обезвоживают этанолом и очищают ксилолом
- Крепится с использованием смолистого материала
Трихром Мэллори
Этот краситель также различает коллаген и мышечные волокна .Среди трех красителей первый — это разбавленный кислый фуксин, второй — разбавленная фосфорно-молибденовая кислота, а третий — смесь оранжевого G, метилового синего, щавелевой кислоты и дистиллированной воды. В конце процедуры ядра и мышечные клетки выглядят красными , коллаген появляется синими , а эритроциты становятся оранжевыми . Это окрашивание довольно часто используется для обнаружения изменений в гистопатологических образцах печени и почек. Окрашивание трихромом Мэллори включает следующие этапы на парафиновых срезах:
- Для обводнения секции использовали ксилол и этанол
- Погружается в кислотный фуксин на 2 минуты
- Затем промывают дистиллированной водой
- Затем окрашивают фосфорномолибденовой кислотой в течение 2 минут
- Повторная промывка дистиллированной водой
- Затем его погружают в оранжевый раствор G на 15 минут
- Ополаскивается дистиллированной водой
- Затем его обезвоживают этанолом и очищают ксилолом
- Секция монтируется с использованием смолистой среды
Азан трихром
Окрашивание трихромом азана, иногда называемое трихромом Азана Хайденхайна, также используется для окрашивания мышц и коллагена .Следовательно, его можно использовать для дифференциации мышечной ткани и коллагеновой ткани, а также для выявления заболеваний , таких как заболевания печени. Это немного улучшенная версия трихрома Мэллори.
Он отличает клетки от внеклеточных компонентов и окрашивает мышечные волокна красный , хрящ и костный матрикс синий . Как и растворы фосфорномолибденовой кислоты оранжевого G и анилинового синего Мэллори, однако вместо кислотного фуксина для окрашивания ядер используется краситель под названием азокармин, который сочетается с уксусной кислотой и дистиллированной водой.Анилиновый синий используется в качестве контрастного красителя азокармину для окрашивания ядер. В результате образуются красные ядра, оранжевых, мышечных клеток и синий коллаген, что позволяет дифференцировать их под микроскопом. Порядок окрашивания следующий:
- Секция обводняется ксилолом и этанолом
- Затем его погружают в раствор азокармина на час при 50 градусах Цельсия
- Затем промывают дистиллированной водой
- Затем срез помещают в раствор анилина и 100 мл этанола в сочетании с 0.1 мл соляной кислоты
- Промыть дистиллированной водой
- Затем его погружают в фосфорномолибденовую кислоту на 2 часа
- Затем его помещают в смесь оранжевого G , анилинового синего , уксусной кислоты и дистиллированной воды на 2–3 часа.
- Снова промывают дистиллированной водой
- Затем его обезвоживают этанолом и очищают ксилолом
- Секция монтируется с использованием смолистой среды
Трихром Касона
Как и другие трихромные красители, это краситель также используется для дифференциации коллагена .Поэтому его применение включает диагностику нарушений, связанных с аномалиями коллагена. Окрашивает ядра и цитоплазму красный , коллаген синий и эритроциты оранжевый . Используемое краситель представляет собой смесь красителей, состоящую из оранжевого G, кислого фуксина, анилинового синего, фосфорновольфрамовой кислоты и дистиллированной воды. Процесс включает следующие шаги:
- Секция обводняется ксилолом и этанолом
- Затем его погружают в раствор красителя на 5 минут
- Ополаскивается дистиллированной водой
- Затем его обезвоживают этанолом и очищают ксилолом
- Секция монтируется с использованием смолистой среды
PAS (Периодическая кислота Шиффа)
Это краситель окрашивает гликоген и поэтому используется для проверки мембран, слизистых веществ, а также наличия грибка.Процесс окрашивания PAS обычно включает две стадии: первая — это реакция окисления периодной кислотой, приводящая к образованию альдегидов, вторая стадия — демонстрация этих альдегидов с помощью реактива Шиффа.
Окрашивание клубочков по Шиффу периодической кислотой (гистологический слайд)Фуксиновый краситель в реактиве Шиффа дает диапазон цветов от пурпурного до пурпурного. В процессе окрашивания используются периодическая кислота, гематоксилин и реагент Шиффа, который включает основной фуксин и метабисульфит натрия в сочетании с дистиллированной водой и соляной кислотой.Окрашивание приводит к тому, что ядра становятся синими , а гликоген и грибы становятся пурпурными по цвету. PAS полезен в ряде диагностических приложений . Например, его можно использовать для диагностики болезни накопления гликогена, некоторых сарком и карцином, а также грибковых инфекций. Порядок действий следующий:
- Секция гидратирована в дистиллированной воде
- Затем помещают в раствор периодической кислоты на 5 минут
- Ополаскивается дистиллированной водой
- Затем его погружают в реагент Шиффа на 15-30 минут
- Смыть излишки краном водой
- Затем срез контрастно окрашивают гематоксилином в течение 1-3 минут
- Затем его промывают в водопроводной воде и ополаскивают дистиллированной водой
- Затем секция обезвожена этанолом и очищена ксилолом
- Наконец, он устанавливается с использованием смолистой среды
Резорциновый фуксин Вейгерта (резинка Вейгерта)
Как следует из названия, этот тип морилки используется для окрашивания эластичных волокон .Это заставляет их окрашиваться в сине-черным , ядра становятся светло-сине-черными, коллаген становится розовым или красным , а другие ткани становятся желтыми .
Раствор включает основной фуксин, который образует комплекс, который прикрепляется к эластичным волокнам, вызывая их окрашивание. Раствор красителя Вейгерта также состоит из резорцина, хлорида железа, этанола, дистиллированной воды и соляной кислоты. Гематоксилин и краситель Ван Гизона также используются в качестве контрастных красителей.Процесс включает следующие шаги:
- Секция гидратирована и очищена ксилолом и этанолом
- Погружается в раствор Вейгерта на срок до часа (минимум 20 минут)
- Промыт этанолом
- 1% кислотный спирт добавлен для дифференциации
- Избыток смывается водой
- Затем добавляются контрастные красители гематоксилин и ван Гизона
- Затем секцию обезвоживают этанолом и очищают ксилолом
- Монтируется с использованием смолистого материала
Пятно Райта и Райта Гимзы
Пятна Райта и Райта Гимзы являются полихроматическими пятнами, поскольку они содержат эозин и метиленовый синий .Окраска Гимзы дополнительно содержит лазурный метиленовый синий и усиливает ядерные свойства. Затем эозин Y используется для окрашивания цитоплазмы клеток оранжевым . Оба они используются для окрашивания мазков периферической крови и мазков костного мозга. Они используются для изучения клеток, а также их морфологии, помогая в диагностике инфекций и заболеваний крови, таких как лейкемия. Различные типы клеток крови окрашиваются по-разному, что позволяет наблюдателю различать их.
Окраска эозинофила по Райту Гимза (гистологический препарат)Эти изменения перечислены ниже:
- Нейтрофилы имеют пурпурные ядра, светло-розовую цитоплазму и красновато-пурпурные гранулы
- Базофилы имеют темно-синие или фиолетовые ядра и очень темно-фиолетовые гранулы
- Эозинофилы имеют голубые ядра, светло-розовую цитоплазму и красные гранулы
- Красные кровяные тельца становятся красными или розовыми
- Тромбоциты кажутся фиолетовыми
Процесс окрашивания крови с помощью красителя по Райту выглядит следующим образом:
- Капля крови помещается между предметными стеклами и сушится на воздухе тонким слоем для окрашивания
- Затем мазок помещают в пятно Райта на 1-3 минуты
- Добавлен фосфатный буфер на этот раз вдвое
- Затем промывают водой и сушат промоканием
Альдегид фуксин
Это пятно, иногда известное как пятно альдегид-фуксина Гомори, изначально было создано для окрашивания эластичных волокон .Однако его также можно использовать для окрашивания других тканей, особенно гранул бета-клеток поджелудочной железы. Он также очень селективен в отношении нескольких других базофильных сайтов с высоким сродством, таких как гранулы тучных клеток и хрящевой матрикс.
Эластичные тканевые волокна приобретают синевато-фиолетовый цвет , а также гранулы бета-клеток и сульфатированные муцины. Раствор альдегид-фуксина содержит смесь основного фуксина, 70% этанола, концентрированной соляной кислоты и паральдегида. Альдегид фуксин обычно используется в сочетании с альциановым синим.Для окрашивания альдегид-фуксином используется следующий процесс:
- Секцию доводят до воды с использованием этанола и ксилола
- Затем он окисляется в 1% манганат калия
- Затем промывают в кране водой
- Затем манганат калия удаляют с помощью 1% щавелевой кислоты
- Затем промывают в водопроводе водой и затем этанолом
- Секцию погружают в раствор альдегид-фуксина в герметичном контейнере на 15 минут
- Ополаскивается еще раз в этаноле , затем в водопроводной воде
- Затем его обезвоживают этанолом и очищают ксилолом
- Секция монтируется с использованием смолистой среды
Иммуногистохимия и иммунофлуоресценция
Иммунофлуоресценция — это метод, используемый в иммуногистохимии. Иммуногистохимия — это отрасль науки, которая включает использование образования комплексов антитело-антиген для выборочного изучения определенных антигенов в срезе ткани.
Этот метод включает маркировку антител флуоресцентным маркером. Антитела будут связываться со специфическим антигеном в интересующем участке, а флуоресцентный маркер вызывает изменение цвета, которое можно увидеть под микроскопом. Этот метод полезен для выявления аномальных клеток, таких как раковые клетки.Специфические антигены, с которыми связываются антитела, можно найти в ряде областей клеток, включая цитоплазму, ядро, липиды, белки и клеточную мембрану.
Иммуногистохимия, показывающая нервные стволовые клеткиСначала добавляют немеченое первичное антитело , специфичное к интересующему антигену, инкубируют в течение 60 минут, а затем отмывают, используя забуференный фосфатом физиологический раствор (PBS). Затем добавляют вторичное антитело , меченное , и инкубируют около 30 минут.Это прикрепляется к первичным антителам. Затем срез промывают PBS и устанавливают для просмотра под микроскопом. Этот метод известен как непрямое иммунофлуоресцентное окрашивание . Процесс также можно проводить с использованием только меченых первичных антител, это известно как прямая иммунофлуоресценция , окрашивание .
Особенности
Окрашивание широко используется в гистопатологии и диагностике, поскольку оно позволяет выявлять отклонения в количестве и структуре клеток под микроскопом.В гистологии используется огромное количество красителей, от красителей и металлов до меченых антител. Наиболее распространенные красители, используемые в гистологии, следующие:
- Обычные пятна
- Особые пятна
- Ван Гизон
- Толуидиновый синий
- Синий Альциан
- Гимза
- Ретикулин
- Ниссл
- Orcein
- Судан Черный B
- Трихром Массона
- Трихром Мэллори
- Азан Трихром
- Трихром Касона
- Периодическая кислота Шифф
- Резорцин Вейгерта Fuchsin
- Пятно Райта и Райта Гимзы
- Альдегид фуксин
- Иммуногистохимия и иммунофлуоресценция
Специальные пятна — Отделение патологии и лабораторной медицины
Существует множество специальных красителей для демонстрации патологических процессов.Обычно они используют краситель или химическое вещество, которое демонстрирует сродство к конкретному компоненту ткани. Доступны специальные красители:
1. Пятна соединительной ткани
Массоны Трихром
Окрашивание трихромом помогает выделить поддерживающую коллагеновую строму на срезах различных органов. Это помогает определить характер повреждения тканей. Трихром также помогает в выявлении нормальных структур, таких как соединительнотканные капсулы органов, собственная пластинка желудочно-кишечного тракта и бронховаскулярные структуры в легких.
Эластичное пятно Верхоффа
Пятно на эластичной ткани помогает очертить артерии, потому что эластичная пластинка мышечных артерий и среда аорты содержат эластичные волокна. Метод Ван Гизона для эластичных волокон обеспечивает хороший контраст
Пятно ретикулина
Окрашивание ретикулином полезно в паренхиматозных органах, таких как печень и селезенка, чтобы очертить архитектуру. Видны тонкие ретикулярные волокна, которые являются аргирофильными. Окрашивание ретикулином иногда помогает выделить характер роста новообразований.
Пятно Гимзы
Существует множество пятен «типа Романовского» со смесями метиленового синего, лазурного и эозиновых соединений. Среди них пятно Гимзы и пятно Райта (или пятно Райта-Гимзы). Последний используется для окрашивания мазков периферической крови. Пятно Гимзы может быть полезно для идентификации компонентов в различных тканях. Одним из свойств красителей метиленового синего и толуидинового синего является метахромазия. Это означает, что компонент ткани окрашивается в другой цвет, чем сам краситель.Например, крупа тучных клеток, хрящ, муцин и амилоид окрашиваются в фиолетовый, а не синий цвет, что помогает идентифицировать эти компоненты.
2. Микроорганизмы
Браун и Хоппс
Бактерии появляются на H и E как синие палочки или кокки независимо от граммовой реакции. Колонии выглядят как нечеткие голубые кластеры. Окрашивание по грамму ткани в основном такое же, как в микробиологической лаборатории, за исключением того, что вместо сафранина используется нейтральный красный цвет. Грамположительные организмы обычно хорошо окрашиваются, а грамотрицательные — нет (поскольку липид бактериальных стенок удаляется при обработке тканей).
Окрашивание КУБ (кислотоустойчивых бацилл)
В этом красителе используется карбол-фуксин для окрашивания липидных стенок кислотоустойчивых организмов, таких как M. tuberculosis. Чаще всего используется метод Циля-Нильсена, хотя существует также метод Киньюна. Модификация этого красителя известна как окраска Фите и содержит более слабую кислоту для якобы более чувствительных бацилл M. leprae. Тем не менее, большая часть липидов микобактерий удаляется при обработке тканей, поэтому это пятно иногда может быть очень неприятным и заставлять вас тщательно искать организмы, которые, как вы уверены, находятся в большой гранулеме.Наиболее чувствительным пятном для микобактерий является пятно аурамина, для просмотра которого требуется флуоресцентный микроскоп. Есть и другие кислотоупорные вещества, кроме микобактерий. Включены криптоспоридиумы, изоспоры и крючки цистицерков.
Гомори метенамин, морилка
Это краситель, часто обозначаемый аббревиатурой «GMS», используется для окрашивания грибков и Pneumocystis carinii. Стенки клеток этих организмов окрашены, поэтому организмы выделяются коричневым или черным пятном.Это пятно имеет тенденцию давать много артефактов из-за фонового окрашивания, поэтому важно быть уверенным в морфологии исследуемого организма.
PAS (периодическая кислота-Шифф)
Это универсальное пятно для многих вещей. Он окрашивает гликоген, муцин, мукопротеин, гликопротеин, а также грибы. Этап предварительного переваривания амилазы устранит окрашивание на гликоген. PAS полезен для очерчивания тканевых структур — базальных мембран, капсул, кровеносных сосудов и т. Д.Он оставляет пятна на многих вещах и, следовательно, может иметь высокий фон. Это очень деликатно, но конкретность зависит от интерпретации.
3. Углеводные пятна
Коллоидное железо («AMP»)
Частицы железа стабилизируются аммиаком и глицерином и притягиваются к кислым мукополисахаридам. Требуется формалиновая фиксация. Также могут окрашиваться фосфолипиды и свободные нуклеиновые кислоты. Фактический синий цвет возникает из-за реакции берлинского синего. Ткань может быть предварительно переварена гиалуронидазой для обеспечения большей специфичности.
Синий Альциан
Для большей специфичности pH этого красителя можно отрегулировать.
PAS (пероидная кислота-Шифф)
Окрашивает и гликоген, и муцины, но ткань может быть предварительно переварена диастазой для удаления гликогена.
Муцикармин
Очень специфичен для эпителиальных муцинов.
4. Пигменты, минералы и цитоплазматические гранулы
Фонтана-Массон для Меланина
Этот метод основан на использовании гранул меланина для восстановления аммиачного нитрата серебра (но аргентафин, хромаффин и некоторые пигменты липохромов также окрашиваются в черный цвет).
Меланин отбеливатель
Методы отбеливания удаляют меланин, чтобы лучше изучить морфологию клеток. В них используется сильный окислитель, такой как перманганат калия или перекись водорода. Для обесцвечивания глазного меланина требуется несколько часов, а для отбеливания кожи — минуты.
Железное пятно
Классический метод демонстрации железа в тканях. Срез обрабатывают разбавленной соляной кислотой, чтобы высвободить ионы трехвалентного железа из связывающих белков. Затем эти ионы реагируют с ферроцианидом калия с образованием нерастворимого соединения синего цвета (реакция берлинской синей).Похоже, что ртутные фиксаторы лучше сохраняют железо в костном мозге, чем формалин.
Пятно по VonKossa
Метод восстановления серебра, демонстрирующий фосфаты и карбонаты, но они обычно присутствуют вместе с кальцием.
5. Пятна жира
Красное масло O (ORO)
Пятно Определяет нейтральные липиды и жирные кислоты в мазках и тканях. Свежие мазки или криостатные срезы тканей необходимы, потому что фиксаторы, содержащие спирты, или обычная обработка тканей с очисткой удаляют липиды.ORO — быстрое и простое пятно. Это может быть полезно для выявления жировых эмболов в легочной ткани или сгустков периферической крови.
Методы окрашивания ／ Окрашивание нервной ткани
Методы окрашивания ／ Окрашивание нервной ткани
Окрашивание H&E
Это стандартный метод окрашивания, используемый при патологии. Обычно цитоплазма клеток эозинофильная (ацидофильная) и окрашена в красный цвет, тогда как ядра и ядрышки являются «гематоксилинофильными» (базофильными) и окрашены в синий цвет.Другие физиологические и патологические структуры демонстрируют различное окрашивание; поэтому важно понимать каждую структуру в отдельности. Тельца Ниссля, которые представляют собой грубую эндоплазматическую сеть нейронов, являются базофильными, тогда как другие цитоплазматические структуры в основном эозинофильны. Аксоны и дендриты нельзя отличить, если нет изменений, связанных с отеком. Астроциты лишены эозинофильной цитоплазмы и имеют ядра, которые кажутся большими и довольно прозрачными. Когда астроциты реагируют на повреждение тканей, они кажутся эозинофильными, потому что их цитоплазма становится более обильной в результате увеличения фиброзных компонентов, которые также накапливаются в нервных отростках.С другой стороны, олигодендроглии меньше астроцитов, с базофильными плотно окрашенными ядрами и едва видимой цитоплазмой. Ядра микроглии имеют базофильные булавовидные окончания и поэтому легко различимы.
Окрашивание по Нисслю
В этом методе нейрональные тельца Ниссля (грубая эндопластическая сеть) окрашиваются в фиолетовый цвет с использованием крезилового фиолетового. Окрашенные тельца Ниссля кажутся сгруппированными и пятнистыми. Окрашивание по Нисслю удобно для измерения плотности нейронов, поскольку окрашенные клетки четко определяются и легко измеряются.
Окрашивание Luxol-fast blue (LFB)
LFB — это краситель миелиновой оболочки, окрашивающий фосфолипиды (основные составляющие миелиновой оболочки вокруг нервных отростков) в синий цвет. Луксор — это название города в Египте, где собирают синий краситель. Богатое миелином белое вещество головного мозга окрашено в синий цвет. При демиелинизирующих заболеваниях, когда миелиновая оболочка разрушена, можно четко определить распределение поражений.
Окрашивание по Клювер-Баррера (KB)
КБ — это наиболее часто используемое пятно, специфичное для нервной системы.Он включает двойное окрашивание красителями Ниссля и LFB и одновременно окрашивает как нейроны, так и окружающую миелиновую оболочку. Увеличенные изображения окрашенных образцов напоминают изображения, наблюдаемые при окрашивании LFB; однако, поскольку нейроны также окрашены по Нисслю, серое вещество становится слегка синим. Тельца Ниссля окрашиваются красителем Ниссля и окружающие миелии
.окрашивание серебром по Бодиану
Окрашивание по Бодиану использует белки серебра, медь и хлорид золота для окрашивания тел нейронов (сомы) и нервных отростков в темно-коричневый цвет.Также окрашиваются нормальные и аномальные структуры, образованные ненормальными компонентами волокна. Аргентафиновые части включают области локализованного отека аксонов (сфероид), дендритные поражения и нейрофибриллярную дегенерацию Альцгеймера [нейрофибриллярные клубки (NFT)].
Другие пятна серебра для нервной ткани
Другие процедуры окрашивания серебром, такие как окрашивание по Бельшовскому и окрашивание метенамином серебром, выполняются только по мере необходимости. Окрашивание по Бельшовскому четко окрашивает нервные волокна.Метенамин серебро — аргирофильный краситель, позволяющий четко визуализировать амилоидные компоненты сенильных бляшек; иммуноокрашенные изображения β-амилоидных белков показывают аналогичные результаты.
Окрашивание по Хольцеру
Волокнистые компоненты астроцитов окрашены в пурпурный цвет кристаллическим фиолетовым Хольцера. В частности, четко окрашен глиоз, который представляет собой вторичное рубцевание после повреждения нерва. Таким образом, поврежденные участки можно обнаружить макроскопически. Поскольку анилин в растворе для окрашивания вреден, окрашивание необходимо проводить в лабораторной вытяжной камере (т.е.е., вытяжной шкаф). Следовательно, окрашивание по Хольцеру в дополнение к окрашиванию гематоксилином фосфорно-вольфрамовой кислотой (PTAH) может быть использовано для обнаружения глиоза.
Окрашивание по Галлясу – Брааку (Великобритания)
В конце 1990-х окрашивание ГБ стало очень популярным в области нейропатии. Хотя это тип аргирофильного окрашивания, он не окрашивает существующие нормальные ткани, что позволяет четко идентифицировать отложения, частично состоящие из аномального тау-белка и других патологических структур. Хотя их можно обнаружить с помощью окрашивания H&E и Бодиана, сначала они были визуализированы с помощью окрашивания GB.Тем не менее, нормальная фоновая ткань не окрашивается, в то время как только аномальные структуры окрашиваются в черный цвет; поэтому GB удобен при изучении распределения аномалий. Следует пометить аномально накопленные тау-белки.
микробиологических красителей, наборов и красителей | Бактерии, дрожжи и жизнеспособность ПЦР
В Biotium мы специализируемся на создании флуоресцентных красителей, которые упрощают и улучшают ваши научные эксперименты. Для микробиологии мы предлагаем широкий спектр флуоресцентных красителей и наборов анализов для окрашивания бактерий, дрожжей и грибов, включая красители для оценки жизнеспособности клеток и типа окраски по граммам бактерий.Мы также разработали полный набор реагентов для ПЦР жизнеспособности, революционного метода определения жизнеспособности микробов с помощью КПЦР.
Также посетите нашу Таблицу клеточных пятен, чтобы получить полный список клеточных пятен с их способностью окрашивать различные типы клеток.
БАКТЕРИАЛЬНЫЕ ПЯТНА
Для бактерий мы предлагаем флуоресцентные красители для окрашивания живых клеток, мертвых клеток и грамм + клеток. Комбинирование этих красителей в экспериментах с многоцветной микроскопией или проточной цитометрией позволяет одновременно оценивать несколько параметров.
Окрашивание живых клеток бактерийЧасто бывает полезно визуализировать или обнаружить все бактерии, присутствующие в образце, независимо от вида или метаболического состояния. Для этого мы предлагаем ряд красителей, которые обычно окрашивают все бактерии, как грамположительные, так и грамотрицательные. Красители доступны в различных цветах и локализациях:
- BactoView ™ Live, RedDot ™ 1, DMAO, Thiazole Orange и Hoechst представляют собой красители, связывающие нуклеиновые кислоты, проникающие через клеточную мембрану.
- SynaptoGreen ™, SynaptoRed ™ и CellBrite ™ Fix являются красителями клеточной мембраны / периферии клеток. Красители CellBrite ™ Fix — это набор фиксируемых мембранных красок, доступных в нескольких цветах.
Традиционный колориметрический протокол окрашивания по граммам трудоемок, требует до 5 различных растворов для окрашивания клеток, включая токсичный спирт и ацетон для обесцвечивания образца, а также точное время.Напротив, агглютинин зародышей пшеницы (WGA), как было показано, специфически связывается с N-ацетилглюкозамином в пептидогликановом слое клеточной стенки грамположительных бактерий и может быть помечен рядом различных флуоресцентных красителей для одностадийной флуоресцентной клетки. маркировка. Мы предлагаем флуоресцентные конъюгаты WGA в 13 цветовых вариантах, а также комбинированные наборы для окраски по грамму / жизнеспособности и красителей для ДНК.
Совместное культивирование E. coli и Staphylococcus , окрашенных DAPI (синий) и CF®633 WGA (красный).Сферический грамположительный Staphylococcus окрашивает WGA, в то время как палочковидный грамотрицательный E. coli не окрашивается. DAPI окрашивает все клетки в синий цвет. Совместная культура E. coli и Staphylococcus окрашивается CF®594 WGA и DAPI. Грамположительный Staphylococcus показывает синее окрашивание DAPI и окрашивание поверхности красных клеток с помощью WGA, тогда как грамотрицательные E. coli показывают только окрашивание DAPI. Подбитые теплом Pseudomonas и Micrococcus , окрашенные жизнеспособностью бактерий и окраской по Граму Набор.CF®488A WGA окрашивает грамположительные Micrococcus зеленым, EthDIII окрашивает мертвые клетки в красный цвет, а DAPI окрашивает все клетки в синий цвет. Пятна на жизнеспособность бактерийBiotium предлагает набор различных флуоресцентных красителей и наборов для определения жизнеспособности, позволяющих дифференцировать живые и мертвые клетки с помощью микроскопии или проточной цитометрии (см. Раздел «ПЦР на жизнеспособность» ниже для обнаружения жизнеспособных бактерий с помощью количественной ПЦР).
Смесь живых и мертвых E. coli , окрашенных Live-or-Dye ™ 568/583 и DAPI.Live-or-Dye ™ 568/583 окрашивает мертвые клетки в красный цвет, а DAPI окрашивает все клетки в синий цвет Смесь живых и мертвых E. coli , окрашенных с помощью набора Viability / Cytotoxicity Kit. DMAO окрашивает все клетки в зеленый цвет, а EthD-III окрашивает мертвые клетки в красный цвет.Вернуться к началу
ПЯТНА И НАБОРЫ ДЛЯ ДРОЖЖЕЙ
Флуоресцентные красители и наборы для окрашивания дрожжевых клеток, включая красители для определения жизнеспособности, наборы для комбинированного окрашивания и красители для органелл. Комбинирование этих красителей в экспериментах с многоцветной микроскопией или проточной цитометрией обеспечивает максимальную гибкость экспериментов.
Пятна на жизнеспособность дрожжейBiotium предлагает набор различных флуоресцентных красителей и наборов для определения жизнеспособности дрожжевых клеток для дифференциации живых и мертвых дрожжевых клеток с помощью микроскопии или проточной цитометрии (см. Раздел «ПЦР на жизнеспособность» ниже для определения жизнеспособных дрожжей с помощью количественной ПЦР).
S. cerevisiae , окрашенный с помощью набора для окрашивания дрожжевой жизнеспособности: Calcofluor White окрашивает все клеточные стенки в синий цвет, а ViaVac ™ окрашивает вакуоли метаболически активных клеток в красный цвет и цитоплазму всех клеток в зеленый (не показано). S. cerevisiae , окрашенный с помощью набора Yeast Live-or-Dye ™ Fixable Live / Dead Staining Kit: тиазоловым оранжевым для окрашивания всех клеток (зеленый) и Live-or-Dye ™ 568/583 для окрашивания мертвых клеток (красный, кажется желтым в оверлее). S. cerevisiae , окрашенный с помощью набора для окрашивания жизнеспособности дрожжей: CF®640R ConA окрашивает клеточные стенки всех клеток с далекой красной флуоресценцией (на изображении — псевдо-синим), а Live-or-Dye ™ 568/583 окрашивает мертвые клетки в красный цвет. Окрашивание дрожжевых органеллРяд наших красителей органелл и клеток можно использовать для окрашивания дрожжевых клеток.Мы также предлагаем красители для грибковых клеточных стенок и шрамов от бутонов почкующихся дрожжей.
| Название продукта | Характеристики |
|---|---|
| Красители MitoView ™ | • Митохондриальные красители пяти цветов: • MitoView ™ 633 зависит от потенциала митохондриальной мембраны |
| LysoView ™ 540 и 633 | • Маркировка вакуолей в живых дрожжевых клетках • 2 красителя LysoView окрашивают дрожжевую вакуоль LysoView ™ 540 и LysoView ™ 633 |
| LipidSpot ™ 488 | • Маркировка вакуолей в живых дрожжевых клетках • Окрашивание внутриклеточных мембранных структур |
| Calcofluor White | • Синий флуоресцентный хитин окрашивает стенки клеток • Сильно окрашивает рубцы почек |
| CellBrite ™ Fix | • Окрашивает клеточную мембрану • Доступен в трех цветах красителя • Окрашивание фиксируется |
| MemBrite ™ Fix | • Окрашивает периферию клетки • Доступен в 8 цветах красителя • Окрашивание фиксируется |
| CF® Конъюгаты красителя Конканавалин A (Con A) | • Лектин Con A связывается с α-маннопиранозилом и α-глюкопиранозом в клеточной стенке дрожжей и грибов • Доступен в 10 цветах |
| Конъюгаты агглютинина зародышей пшеницы (WGA) красителя CF® | • Лектин WGA связывает сиаловую кислоту и N-ацетилглюкозамин • Надежно маркирует рубцы почек • Доступен в 13 цветах |
| Тиазоловый апельсин | • Зеленый краситель, связывающий нуклеиновые кислоты • Может использоваться как общеклеточное окрашивание дрожжей • Окрашивание в дрожжах ядерное в нефиксированных клетках и цитоплазматическое после фиксации |
| NucSpot® 470 Nuclear Stain | • Зеленый краситель, связывающий нуклеиновые кислоты • Окрашивает ядра мертвых или фиксированных и проницаемых дрожжей |
| ViaFluor® CFSE | • Может использоваться в качестве общеклеточного цитоплазматического красителя у дрожжей |
| Конъюгаты фаллоидина | • Фаллоидин окрашивает кабели и участки F-актина в фиксированных и проницаемых дрожжах • Доступны 20 цветов и биотин |
Вернуться к началу
VIABILITY PCR С PMA и PMAXX ™
Biotium является изобретателем оригинального красителя для ПЦР жизнеспособности, PMA, и нового красителя для ПЦР с улучшенной жизнеспособностью PMAxx ™. Мы также разработали широкий спектр продуктов и наборов для ПЦР на жизнеспособность. Чтобы узнать больше об этой технологии и всех связанных продуктах, посетите страницу технологии Viability PCR.
Введение в ПЦР жизнеспособности (v-ПЦР)
ПЦР на жизнеспособность — это мощная технология для чувствительного и быстрого обнаружения жизнеспособных микроорганизмов. В отличие от методов культивирования, требующих больших затрат времени, количественная ПЦР является быстрым и чувствительным методом обнаружения. Однако нормальный КПЦР не различает живые и мертвые клетки. Используя v-PCR с использованием PMAxx ™ или PMA, вы получаете скорость, чувствительность и специфичность ПЦР, а также поддающуюся количественной оценке жизнеспособность. А поскольку культивирование не требуется, вы можете даже обнаружить жизнеспособные, но не культивируемые (VBNC) бактерии.Технология v-PCR может применяться не только к бактериям, но и к другим организмам, таким как дрожжи, вирусы, эукариоты и археи.
Как работает v-PCR?
Инфографика ниже показывает основной механизм v-PCR. PMAxx ™ и PMA — фотореактивные красители с высоким сродством к ДНК. Красители внедряются в дцДНК и образуют ковалентную связь при воздействии интенсивного видимого света. Реакция подавляет ПЦР-амплификацию модифицированных ДНК-матриц за счет комбинации удаления модифицированной ДНК во время очистки и ингибирования матричной амплификации ДНК-полимеразами.Поскольку красители непроницаемы для клеточных мембран, когда образец, содержащий как живые, так и мертвые бактерии, обрабатывается красителем, только мертвые бактерии с поврежденными клеточными мембранами становятся восприимчивыми к модификации ДНК. В реакции кПЦР ДНК мертвых клеток будет демонстрировать замедленную амплификацию и более высокий Ct, чем живые клетки.
Красители для ПЦР жизнеспособности, такие как PMAxx ™ или PMA, не проницаемы для мембран, что делает их специфичными для мертвых клеток. Попав внутрь мертвой клетки, они связываются с ДНК. Воздействие интенсивного видимого света делает красители реактивными и заставляет их ковалентно прикрепляться к ДНК.Эта модификация ДНК предотвращает амплификацию в последующих реакциях ПЦР.Красители PMA и PMAxx ™ для определения жизнеспособности ПЦР
PMA — оригинальный краситель, разработанный в Biotium для v-ПЦР. Он был подтвержден на большом количестве бактериальных штаммов, а также на дрожжах и вирусах (см. Ссылки PMA). Однако, хотя PMA обычно эффективен при различении живых и мертвых бактерий с помощью кПЦР, он не полностью удаляет продукты ПЦР из ДНК мертвых клеток. Это потенциально может дать ложноположительные результаты.
PMAxx ™ был разработан учеными Biotium как превосходная альтернатива PMA. PMAxx ™ намного эффективнее устраняет ПЦР-амплификацию ДНК мертвых клеток и, следовательно, обеспечивает лучшее различие между живыми и мертвыми бактериями.
Загрузите флаеры PMA ™ и PMAxx ™, чтобы узнать больше.
Живые или мертвые бактерии, обработанные PMA или PMAxx ™ перед количественной ПЦР. Мертвые бактерии, обработанные PMA или PMAxx ™, показывают задержки в амплификации по сравнению с живыми клетками или необработанными мертвыми клетками.Бактерии, обработанные PMAxx ™, показывают большую задержку, чем бактерии, обработанные PMA. Следовательно, PMAxx ™ лучше способен отличать живые бактерии от мертвых с помощью ПЦР жизнеспособности.PMA и PMAxx ™ для ПЦР на жизнеспособность
| Название продукта | Каталожный номер | Характеристики |
|---|---|---|
| PMAxx ™, 20 мМ в h3O | 40069 | • Краситель v-PCR нового поколения • Обеспечивает наилучшую дискриминацию живого / мертвого |
| Краситель PMA | 40013 | • Оригинальный краситель v-PCR, разработанный в Biotium • Подтвержден в сотнях публикаций и на большом количестве организмов |
| Краситель PMA, 20 мМ в h3O | 40019 |
Другие реагенты для ПЦР жизнеспособности
Стартовые наборы для ПЦР жизнеспособности
Настраиваемые стартовые наборы для ПЦР на жизнеспособность содержат материалы, необходимые для выборочного обнаружения жизнеспособных клеток с использованием красителя жизнеспособности PMA или PMAxx ™ и количественной ПЦР.Вы также можете выбрать набор с усилителем для грамотрицательных бактерий или без него (не использовать с другими типами клеток). Пользователь должен будет предоставить свои собственные праймеры, чтобы усилить интересующие их виды.
| Название продукта | Каталожный номер | Краситель жизнеспособности | Тип клеток-мишеней |
|---|---|---|---|
| Стартовый набор для ПЦР жизнеспособности с PMA | 31075 | PMA | Любые клетки |
| Стартовый набор для ПЦР жизнеспособности с PMAxx ™ | 31075-X | PMAxx ™ | Любые клетки |
| Стартовый набор для ПЦР жизнеспособности с ФМА и усилителем | 31076 | PMA | Грамотрицательные бактерии |
| Стартовый набор для ПЦР жизнеспособности с PMAxx ™ и усилителем | 31076-X | PMAxx ™ | Грамотрицательные бактерии |
Наборы для ПЦР на штамм-специфическую жизнеспособность
Наборы v-PCR для конкретных штаммов разработаны для селективного обнаружения жизнеспособных бактерий из определенного штамма с использованием красителей PMAxx или PMA и ПЦР в реальном времени.Наборы содержат краситель PMA OR PMAxx ™, смесь Forget-Me-Not ™ EvaGreen® для qPCR Master Mix и аттестованные праймеры для ПЦР для обнаружения выбранных штаммов бактерий.
Наборы для ПЦР на штамм-специфическую бактериальную жизнеспособность
Усилитель PMA для грамотрицательных бактерий
PMA Enhancer для грамотрицательных бактерий был разработан для улучшения различения живых и мертвых грамотрицательных бактерий во время ПЦР жизнеспособности. PMA Enhancer предоставляется в виде 5-кратного раствора и добавляется к образцу перед добавлением красителя жизнеспособности.
| Название продукта | Каталожный номер | Характеристики |
|---|---|---|
| PMA Enhancer для грамотрицательных бактерий, 5-кратный раствор | 31038 | • Улучшает различение живых / мертвых грамотрицательных штаммов |
Устройства фотоактивации
Светодиодное устройство для фотолиза PMA-Lite ™ позволяет проводить световую обработку с регулируемым временем и температурой образцов, обработанных PMAxx или PMA, в микроцентрифужных пробирках.
Синий светодиодный осветитель Glo-Plate ™ разработан для равномерного светового воздействия на образцы, обработанные PMAxx ™ или PMA, в планшетах или больших пробирках.
| Название продукта | Каталожный номер | Характеристики |
|---|---|---|
| Светодиодное устройство для фотолиза PMA-Lite ™ | E | • Устройство фотоактивации, вмещает 16 микроцентрифужных пробирок |
| Glo-Plate ™ Синий светодиодный осветитель | E | • Устройство фотоактивации для планшетов или больших пробирок |
Наверх
Ядерные пятна
Ядро эукариотической клетки содержит две нуклеиновые кислоты: ДНК в хромосомах и РНК в ядрышке.Оба связаны с сильно основными нуклеопротеидами: это гистоны в диплоидных клетках или протамины в гаплоидных клетках, таких как сперматозоиды. Нуклеопротеины богаты аминокислотами аргинином и лизином. Катионы этих аминокислот нейтрализуются остатками фосфорной кислоты нуклеиновых кислот. ДНК и нуклеопротеин хромосом вместе составляют материал известный как хроматин, названный так в связи с его преобладанием в большинстве окрашенных препаратов.В интерфазных клетках хромосомы удлиняются. и нельзя увидеть по отдельности. Хроматин, наблюдаемый в окрашенных препаратах интерфазных ядер, может быть равномерно распределен через нуклеоплазму или собираются по типу, характерному для данного типа клеток. Красители, используемые в качестве ядерных пятен, придают окрашивает хроматин за счет связывания с нуклеиновыми кислотами, нуклеопротеином или обоими этими веществами.
Катионные красители
Катионные красители применяются из подкисленных растворов для обеспечения ионизации их первичной, вторичной или третичной аминогруппы.В тканях присутствуют три типа анионов, способных связывать катионные красители. Это фосфаты нуклеиновых кислот. кислоты, сложные эфиры сульфатов некоторых высокомолекулярных углеводов и карбоксилат-ионы углеводов и белков. Ионизация карбоксильных групп подавляется, если концентрация ионов водорода в красящем растворе слишком высока (на практике pH <3-4), а сульфатные группы остаются ионизированными даже в сильнокислой среде.Фосфорная кислота имеет промежуточную концентрацию. Основной белок, такой как гемоглобин, содержит избыток свободных амино по сравнению с карбоксильными группами, так что последние могут образовываться. доступен для связывания катионных красителей только из щелочных растворов (например, при pH 8). Окрашивающие свойства катионных красителей на них сильно влияет pH их растворов. Если они слишком кислые, только структуры, богатые сульфатированными углеводами будет раскрашен; если они нейтральные или щелочные, все испачкается.
Интерпретация результатов, полученных с катионными красителями при различных уровнях pH, была изучена достаточно глубоко (обзоры и обсуждения см. В Gabe 1976; Lillie and Fullmer 1976; Prento 2001). Окрашивание катионными красителями удобно рассматривать как процесс ионного обмена, при котором небольшие катионы, такие как H + , конкурентно вытесняются из ткани более крупными катионами красителя (см. Хоробин, 1982).Когда ткань и раствор красителя находятся вместе достаточно долгое время, наступает равновесие:
Ткань — ∙∙∙∙ H + + Краситель + ↔ Ткань — ∙∙∙∙ Краситель + + H +
Связывание красителя неионными силами способствует окрашиванию (протягивая указанную выше реакцию слева направо), тогда как высокая концентрация H + или Na + в растворе препятствует окрашиванию (проталкивая реакцию справа налево).Это простое объяснение применимо только к разбавленным растворы красителей с небольшими молекулами. В большинстве реальных методов окрашивания неионные силы вызывают агрегацию красителя, так что более чем одна окрашенная молекула связана с каждым анионным участком ткани.
Следующий список будет служить приблизительным руководством по использованию разбавленных (например, 0,01% -0,2%) растворов катионных красителей. Это относится особенно для тиазинового ряда.
| pH 1,0 | Окрашиваются только сульфатированные углеводные компоненты. Группы сульфоновой кислоты или сложные эфиры серной кислоты могут быть произведены искусственно в ткани, и они тоже будут связывать катионные красители из сильнокислых растворов. |
| pH 2.5-3,0 | Окрашивание вышеперечисленных, а также фосфатом нуклеиновых кислот (ДНК и РНК) и фосфолипидов (в замороженных срезах). |
| pH 4,0-5,0 | Окрашивание вышеперечисленных, а также карбоксильных групп углеводов и наиболее кислых белков. Карбоксильные группы свободных жирных кислоты могут быть окрашены в замороженных срезах. |
| pH> 5,0 | Окрашивание вышеуказанным, с усилением окрашивания нейтральных и основных белков по мере увеличения pH. |
При более высоких концентрациях красителя правила, изложенные выше, не соблюдаются, и окрашивание, как правило, менее специфично.В длительность воздействия красителя оказывает лишь незначительное влияние на результаты, хотя для достижения наилучшего результата требуется более длительное время. возможная глубина окрашивания (равновесие) при использовании очень разбавленных растворов. На конечный результат также влияет лечение после окрашивания.
Большинство катионных красителей довольно легко экстрагируются из шлифов 70% спиртом. Абсолютный этанол, n -бутанол и ацетон обычно менее активны в этом отношении.При любой ответственной работе с катионными красителями условия полоскание и обезвоживание должны быть тщательно стандартизированы. H 2 O, используемый для ополаскивания срезов после окрашивания, должен быть забуферен до того же pH, что и раствор красителя. Фиксативы в целом не влияют напрямую на сульфатные, фосфатные и карбоксилатные группы, но сочетание с аминогруппами или их удаление имеет эффект снижения pH, при котором окрашиваются белки.Таким образом, фиксация тетроксидом осмия, вызывающим окислительное дезаминирование, делает почти все компоненты тканей окрашиваемыми катионными красителями при pH 4 или выше.
Для общего окрашивания ядер используются катионные красители в разбавленном растворе (0,1% -0,5%) при pH 3-4,5. Водный раствор красителя обычно подкисляют добавлением уксусной кислоты или подходящего буфера. Предметы, окрашенные катионным (основным) красители считаются базофильными (Бейкер [1958] высказался в пользу «базифила»).Когда ядра окрашиваются катионными красителями, базофилия также будет очевидна в местах накопления. цитоплазматической РНК (такой как вещество Ниссля нейронов) и в структурах, содержащих сульфатированные углеводы (например, тучные клеточные гранулы, хрящевой матрикс и многие секреторные продукты). В этой склонности катионные красители существенно отличаются от некоторых красителей, образующих комплекс с металлами (протравы), используемых в качестве ядерных красителей. Как объяснялось выше, катионные красители не окрашивают ядра специфически.Следующие ниже растворы подходят для использования отдельно или в качестве контрастных красителей по сравнению с другими методами.
Толуидиновый синий (C.I. 52040)
Приготовьте 0,5% водный раствор, подкисленный добавлением ~ 1,0 мл ледяной уксусной кислоты на каждые 100 мл раствора красителя. В качестве альтернативы, вносят в 0,1 М ацетатный буфер, pH 4,0. Оптимальный pH может варьироваться от 3.0 и 5,5 в зависимости от фиксатора и ткани быть окрашенным. Окрашивают в этом растворе в течение 3 минут, промывают в H 2 O, дегидратируют в 95% этаноле с последующими двумя заменами 100% этанола, очищают в ксилоле и помещают в смолистую среду.
Если во время стирки или обезвоживания спиртом теряется слишком много цвета, переместите предметные стекла прямо на фильтровальную бумагу и тщательно промокните. с двумя или тремя слоями фильтровальной бумаги.Перелейте в чистую сухую стойку для окрашивания или банку с коплином и обезвоживайте в две смены (каждые 4-5 мин) n -бутанол. Очистите и установите, как указано выше. Если отделение секций кажется неизбежным, очистку в ксилоле можно не проводить, но смолистой среде потребуется больше времени, чтобы она стала полностью прозрачной.
Краситель также может быть иммобилизован в окрашенных структурах путем преобразования его в нерастворимый молибдат.После окрашивания смыть H 2 O и погрузите на 5 минут в 5% водный раствор молибдата аммония (парамолибдат аммония, [NH 4 ] 6 Mo 7 O 24 • 4H 2 O) раствор (который можно использовать повторно, пока не станет мутным; обычно стабильно в течение 1 или 2 недель). Стирать в проточном кране H 2 O в течение 2-3 минут. Молибдат толуидинового синего не экстрагируется H 2 O или спиртами и даже устойчив к контрастному окрашиванию кислотными смесями красителей, таких как смесь красителей Ван Гизона.
Ядра и кислые углеводные компоненты окрашены в синий цвет. Некоторые углеводсодержащие структуры окрашиваются метахроматически. (красный). Цитоплазматическая РНК (например, тельца Ниссля нейронов) также синего цвета. Другие тиазиновые красители (например, метиленовый синий Борреля, лазурный А) может быть заменен на толуидиновый синий.
Нейтральный красный (C.I. 50040)
Используйте 0,5% водный раствор в течение 1-5 мин. Обычно желательно подкисление уксусной кислотой (как для толуидинового синего). Стирка, обезвоживают и очищают, как описано для толуидинового синего.
Ядра и другие базофильные структуры окрашены в красный цвет. Сафранин О (C.I. 50240) дает аналогичный результат, но более длительное окрашивание. обычно требуется раз (часто 30 мин).
Нейтральный красный может также использоваться как флуорохром. Окрашивайте срезы гидратированного парафина в течение 5 минут в 0,002% водном растворе нейтрального красного, затем высушите, очистите и накройте обычным способом. При возбуждении ближним УФ или синим светом (325-500 нм) ядра и цитоплазма РНК излучают желто-оранжевую флуоресценцию (Аллен и Кирнан, 1994).
Этиловый зеленый (C.42590) и метиленовый зеленый (C.I. 52020)
Эти не связанные друг с другом красители являются полезными контрастными пятнами, когда объекты, представляющие больший интерес, чем ядра, окрашены в красный, пурпурный или или коричневый. Этиловый зеленый по-прежнему продается как «метиловый зеленый» — краситель, который устарел более 30 лет назад.
Для окрашивания этиловым зеленым погрузите предметные стекла на 15 мин в 0,2% раствор красителя при pH 4,0–4,5. Ацетатный буфер подходящий растворитель.Быстро промыть в H 2 O, промокнуть предметные стекла насухо и обезвожить в двух заменах ацетона или n -бутанола (как описано выше для толуидинового синего). Очистить ксилолом и накрыть смолистой монтажной средой. Ядра и остальные базофильные структуры окрашены в голубовато-зеленый цвет.
Метиленовый зеленый контраст для ядер (МакНалти и др., 2004) представляет собой 0,5% (мас. / Об.) Раствор красителя в 2,4% водной борной кислоте.Через 5 мин в этом растворе предметные стекла промывают пополам. 2-минутные смены H 2 O с последующими тремя 3-минутными сменами 100% этанола, очисткой в ксилоле и нанесением смолистой монтажной среды.
Полихромметиленовый синий
Окрашивающий раствор представляет собой смесь тиазиновых красителей, полученных путем окисления и деметилирования (полихромирования) метиленового синего.Полихромирование может осуществляться различными способами. Следующий метод, в котором оксид серебра используется в качестве окислителя. agent, рекомендуется из-за его простоты и скорости.
Реагенты
Метиленовый синий Борреля
Этанол
Монтажная среда (смолистая)
Ксилол
Метод
1.Окрашивайте замороженные срезы или срезы гидратированного парафина в течение 2 минут в разбавленном растворе метиленового синего Борреля.
2. Быстро промойте в проточной водопроводной кране H 2 O, промокните предметные стекла насухо и обезвожьте за две смены (каждые 30 секунд при перемешивании) 100% этанола.
3.Очистить ксилолом и накрыть смолистой монтажной средой.
Результаты
Все компоненты ткани окрашены в различные оттенки синего. Сильнокислые углеводы метахроматически окрашивают (красный цвет), особенно, если допускается некоторая дифференциация в промывке H 2 O.При намеренном перекрашивании, как описано, объекты, которые обычно метахроматичны, будут темно-синими или пурпурными.
Анионные красители
Анионные красители применяются из кислых растворов. При использовании отдельно анионный краситель окрашивает почти все компоненты ткани, но дифференциальные эффекты окрашивания иногда могут быть получены при одновременном или последовательном применении двух или более красителей.Метод этого типа — эозин-метиловый синий Манна. Ядра, хрящи и коллаген приобретают синий цвет, а цитоплазмы окрашены эозином в розовый или красный цвет. Причины этих результатов до конца не известны, но широко распространено мнение, что большая часть молекулы метилового синего исключены более мелкими молекулами эозина из якобы «плотной» сети цитоплазматического белка. молекулы. Коллаген и хроматин с их предполагаемой «более рыхлой» текстурой допускают молекулы обоих красителей, но эозин будет диффундировать быстрее, чем метиловый синий, при промывании срезов после погружения в смесь.Ядерная окрашивание метиловым синим было изучено McKay (1962), который обнаружил, что присутствие нуклеиновых кислот необходимо. Ему не удалось получить доказательства связывания красителя ионным привлечение и предположил, что окрашивание ядер было аналогом прямого окрашивания хлопка. Маккей сравнил метиловый синий с хлоразолом черным Е, прямым азокрасителем. Было обнаружено, что хлоразол черный E ведет себя как большинство других анионных красителей, включая эозин, и поэтому считалось, что он связан с тканями в основном за счет электровалентных сил.
Эозин-метиловый синий Манн
Приведенная ниже процедура является «коротким методом» Манна (1902 г.). «Длинный метод» (Mann 1902; Cook 1974; также подробно обсуждается Гейбом 1976) более управляем и используется для демонстрации внутриклеточных объектов, таких как секреторные гранулы и включения вирусов. тела. Фиксация не критична, но отличный контраст получается, если смеси, содержащие хлорид ртути, дихромат калия, или пикриновая кислота.
Реагенты
Этанол (95%, 100%)
Эозин-метиловый синий Манна
Монтажная среда (смолистая)
Ксилол
Метод
1.Депарафиновые и гидратные парафиновые секции.
2. Окрашивание эозин-метиловым синим Манна в течение 10 мин.
3. Промойте проточный кран H 2 O в течение нескольких секунд, чтобы удалить излишки красителя с предметных стекол.
4.Обезвоживание в 95% этаноле и две смены 100% этанола.
5. Очистите ксилолом и накройте смолистой монтажной средой.
Результаты
Ядра и коллаген окрашены в синий цвет; эритроциты, цитоплазма и ядрышки окрашены в красный цвет.С помощью этого «короткого» метода получаемые цвета весьма разнообразны. Подобно метиленовому синему от Борреля, это пятно «быстрого взгляда» для определения того, какое из серии срезов или образцов заслуживают более критического рассмотрения.
Хлоразол черный E
Полезное окрашивание ядер и цитоплазмы можно получить с помощью хлоразолового черного E.Этот краситель также окрашивает эластин, но, вероятно, по неионному механизму (Goldstein 1962).
Реагенты
Хлоразол черный E
Этанол (70%, 95%, 100%)
Монтажная среда (смолистая)
Ксилол
Метод
1.Удалите парафиновые парафиновые секции и возьмите 70% этанол.
2. Окрашивать в растворе хлоразоловой черной Е в течение ~ 10 мин.
Время не критично.
3. Промыть в 95% этаноле, две смены по 1 мин.
Перекрашивание происходит редко, если время на этапе 2 <20 мин. Дифференциация происходит медленно и контролируемо в 95% этаноле.
4. Завершите обезвоживание двумя сменами 100% этанола.
5.Очистить ксилолом и накрыть смолистой монтажной средой.
Результаты
Ядра и эластин окрашены в черный цвет. Остальные компоненты ткани визуализируются различными оттенками серого. Цитоплазма часто имеет зеленоватый оттенок, а хрящевой матрикс обычно розовато-серый. Коллаген окрашен довольно слабо.Цитоплазматические органеллы такие как митохондрии и секреторные гранулы хорошо отображаются в подходящем фиксированном материале. Цвет не тускнеет. Большинство информативные препараты представляют собой тонкие срезы (5 мкм и менее), исследуемые при большом увеличении.
Метод будет работать после любой фиксации, но, как и в случае с большинством других методов окрашивания, после фиксации достигается больший контраст. в смеси, содержащей пикриновую кислоту, хлорид ртути или дихромат калия, чем после фиксации только формальдегидом.Кэннон (1937), создатель метода, рекомендовал терпинеол в качестве дифференциатора. Он также прокомментировал схожесть концовок результат к тому, что был получен с помощью железа-гематоксилина Хайденхайна, традиционного, но трудоемкого метода, включающего критически важный дифференциация. О других методах окрашивания хлоразолом черным Е см. Clark (1981).
Металлические комплексообразующие красители
Для окрашивания ядер на срезы ткани наносят смеси протравных красителей с соответствующими солями металлов.Некоторый краситель-металл комплексы, такие как хром с галлоцианином, ведут себя так, как если бы они были простыми катионными красителями. Для других, в том числе гематеин, бразилин и эриохром цианин R, взаимодействия красителя, металла и субстрата более сложны, чем притяжение противоположно заряженных ионов. Эти последние красители используются для селективного окрашивания хроматина.
Гематеин (основной продукт окисления гематоксилина) используется в растворах, содержащих трехвалентное железо, алюминий или, реже, ионы хрома.В других смесях, используемых только для специальных целей, ион металла может быть свинцом, медью, цирконилом или фосфорновольфрамом. или фосфорномолибденовая кислота. Для окрашивания ядер раствор должен содержать значительно большую долю железа или алюминия. ионов, чем гематеина, и он должен быть подкислен. Слово «гематоксилин» обычно используется в названиях методов окрашивания и смеси, хотя правильнее было бы «гематеин».
Растворы, содержащие окисленный гематоксилин (гематеин) и Al 3+ , являются «H» (hemalum) H и E и используются повсеместно для окрашивания ядер клеток. Реакции ионов алюминия с гематеин был изучен Беттингером и Циммерманном (1991a, b), которые обнаружили, что катионный комплекс краситель-металл присутствует в кислых растворах. Комплекс был связан ДНК в срезах ткани, даже несмотря на то, что pH был ниже, чем тот, при котором нуклеиновые кислоты могут быть окрашены обычными катионными красителями.Смеси гемалума обычно содержат большой избыток ионов Al 3+ над молекулами гематеина. Ионы алюминия обладают значительным сродством к ДНК и могут предотвратить ее последующее окрашивание катионные красители. Кислоты, используемые для повышения селективности окрашивания ядер, вероятно, нарушают связь между Al 3+ и частями ткани, отличными от хроматина, а не между Al 3+ и красителем (Baker 1960; 1962).
К сожалению, сродство к Al 3+ или комплексу Al-гематеин для ДНК не учитывает селективность окрашивания ядер обычно используемым гематомом. решения.Это лишь немного подавляется предварительным извлечением ДНК из ткани, но значительно снижается после химическая блокировка остатков лизина и аргинина (Lillie et al. 1976). Кроме того, измерения интенсивности окраски ядер, окрашенных гемалумом, не меняются пропорционально содержанию ДНК (Шульте и Финк, 1995). Эти наблюдения предполагают, что комплекс краситель-металл прикрепляется в основном к компоненту ядра, отличному от ДНК. В Не-ДНК компонент хроматина является основным нуклеопротеином, который, как ожидается, будет связывать анионный, а не катионный краситель-металлический комплекс.Однако квасцы-гематеин не окрашивает другие компоненты ткани, которые имеют сродство к анионным красителям, поэтому должен иметь высокое сродство к хроматину, который не связан с ДНК или основными аминокислотами связанного с ней нуклеопротеина.
Horobin (1988) предполагает, что комплексы краситель-металл связаны с хроматином как ионными, так и неионными силами. Последние, вероятно, будут улучшены другими веществами, присутствующими в окрашивающем растворе квасцы-гематеина.Большинство составов содержат высокополярные вещества, такие как в виде глицерина, этиленгликоля или хлоралгидрата, которые, как ожидается, будут связываться водородными связями с гидрофильными компоненты ткани и препятствовать действию короткодействующих сил (ван-дер-ваальсовых, гидрофобных и т. д.), которые удерживают краситель-металл комплекс с некоторыми потенциальными субстратами. Форма комплексного иона краситель-металл, которая благоприятно согласуется с нуклеопротеином. и молекулы нуклеиновой кислоты будут связаны достаточно плотно, чтобы противостоять разрушению веществами, связывающими водородные связи.Любой краситель плотно прилегающие к ДНК или молекулам гистонов хроматина нелегко удалить водными или другими водородными связями полоскания.
Окрашивание квасцов и гематеина может быть прогрессирующим или регрессивным. Обычно предпочтительнее первое, но если перекрашивание необходимо исправить, срезы разделяют в 70% или 95% этаноле, содержащем небольшое количество соляной кислоты.Также можно использовать водную кислоту, но тогда дифференцирующее действие происходит медленнее. Добавление в окрашивающую ванну большего количества кислоты или соли алюминия также подавляет тенденцию к чрезмерному окрашиванию, тем самым делая смесь более селективной в отношении прогрессирующего ядерного окрашивания. Кислотная лабильность ядер, окрашенных квасцами-гематоксилином, препятствует контрастному окрашиванию более чем слабокислыми растворами. Эозин подходит, но смесь Ван Гизона — нет.Комплекс алюминий-гематеин меняет цвет от красновато-коричневого до синего при ~ pH. 6. Последний цвет является желаемым, поэтому окрашенные срезы промывают водопроводной струей H 2 O, в которую, возможно, придется добавить следы щелочи. Этот процесс называется посинением. Контрастное пятно эозина придает розовый и красный цвет для всех компонентов ткани, включая ядра, ранее окрашенные в синий цвет квасцами-гематеином. Следовательно, ядра в типичных препаратах H и E — пурпурные из-за смешения цветов.
Комплекс железо-гематеин имеет глубокий сине-черный цвет и может быть удален с окрашенных срезов только путем сильной кислотной дифференциации. решения. Если соль железа и гематеин наносить на срез последовательно, как в методе Хайденхайна, большое разнообразие структурных деталей можно выявить путем тщательной дифференциации. Прогрессивный режим — это метод выбора для чисто ядерных окрашивание, поэтому растворы красителей затем готовятся с большим избытком соли трехвалентного железа и кислоты (обычно соляной).Weigert’s гематоксилин — типичная смесь этого типа. Ионы трехвалентного железа в конечном итоге чрезмерно окисляют гематеин, поэтому пятно портится. постепенно (в течение нескольких дней), пока он не станет непригодным для использования. Некоторые гематоксилины железа сохраняют лучше, чем гематоксилины Вейгерта. Более стабильные смеси железа и гематоксилина содержат ионы как трехвалентного, так и двухвалентного железа. Предполагается редуцирующее действие последнего для сдерживания окисления красителя (см. Lillie and Fullmer, 1976).Мало что известно о механизмах окрашивания ядер железом-гематеином. Извлечение ДНК не имеет никакого эффекта, а химическая блокировка остатков лизина и аргинина вызывает только частичное ингибирование окрашивания (Lillie et al. 1976).
Срезы, содержащие ядра, окрашенные железо-гематоксилином, не теряют своей окраски при обработке сильнокислыми реагентами, в том числе смеси анионных красителей, используемых для дифференциальной окраски цитоплазмы и коллагена.
Также возможно окрашивание ядер синтетическими красителями, образующими комплекс с металлами, которые дешевле, чем гематоксилин. Подходящий заменитель представляет собой эриохром цианин R, используемый с солью трехвалентного железа. При использовании в качестве красителя для ядер он ведет себя как квасцы-гематеин. Несколько других альтернативы гематоксилину были описаны Lillie et al. (1976).
Часто красный цвет предпочтительнее синего и черного, которые придают ядрам окраска металл-гематеин.Этого можно достичь, используя соль алюминия с карминовой кислотой (carmalum), бразилеином (brazalum) или ядерно-стойким красным. Красные ядерные пятна чаще всего бывают используются в качестве контрастных красителей гистохимическим или другим специализированным методам, которые придают другие цвета объектам, в которых микроскописта в первую очередь интересует.
Железо-гематоксилин Хайденхайна
Этот простой классический метод используется в основном для разрешения структурных деталей внутри клеток, поэтому ткань должна быть зафиксирована. в смеси, сохраняющей цитоплазматические органеллы.Этому требованию отвечают фиксаторы Хелли или Альтманна. Парафиновые секции должна быть толщиной не более 5 мкм. Срезы замачивают в растворе, содержащем ионы трехвалентного железа, а затем погружают в гематеин. раствор, который образует черный комплекс со связанным железом повсюду в ткани. Гематейн служит только для демонстрации железо (Wigglesworth 1952), которое в основном связано с карбоксильными группами белков. Затем снова используют раствор квасцов, чтобы дифференцировать препарат до получения желаемого окрашивания.
Дифференцирующий раствор действует частично потому, что он кислый, а частично потому, что его ионы трехвалентного железа образуют растворимые комплексы с гематеин, тем самым извлекая краситель из окрашенного участка. Дифференциация только кислотой оставляет ядерный хроматин как последний материал, подлежащий уничтожению. Нейтральный или щелочной раствор соединения, содержащего железо (III), например калий феррицианид, сначала извлекает цвет из ядер и в последнюю очередь из мембранных структур, таких как миелин и митохондрии.Утюг квасцы находятся между этими крайностями и позволяют окрашивать ядра, секреторные гранулы, реснички, края щетинок, центросомы, митохондрии, различные поперечные тяжи поперечно-полосатых мышечных волокон и пучки цитоскелетных нитей. Даже конструкции которые могут быть правильно решены только с помощью электронной микроскопии, например, эндоплазматической сети (эргастоплазмы) и некоторых Органеллы простейших были первоначально описаны в препаратах, окрашенных гематоксилином Хайденхайна.Полный извлечение нуклеиновых кислот из срезов не влияет на ядерное или цитоплазматическое окрашивание этим методом; привязка железо в основном относится к карбоксильным группам белков (Puchtler 1958).
Реагенты
Этанол серии (марки)
Квасцы железные (5%)
Квасцы железа также называют сульфатом железа (аммония) .
Гематоксилин 10% -ный зрелый
Приготовьте рабочий раствор созревшего гематоксилина, разбавив 5 мл созревшего 10% -ного спиртового гематоксилина в 95 мл H 2 О. Этот раствор можно хранить (в темном месте) и использовать повторно в течение ~ 1 года.
Монтажная среда (смолистая)
Ксилол
Метод
1.Депарафиновые и гидратные парафиновые секции. При необходимости удалите ртутные отложения.
Если срезы окрашены эозином или аналогичным красным анионным красителем до шага 2, окрашивание коллагена будет меньше. железо-гематоксилином (Гейб, 1976).
2. Поместите предметные стекла в 5% раствор квасцов железа на ночь или на 24 часа.
Обычно квасцы железа и рабочий раствор созревшего гематоксилина предварительно нагревают до ~ 55 ° C. Шаги 2 и 4 могут затем сократить до 1 часа, но черный цвет не будет таким сильным, как при традиционном длинном методе.
3. Промыть в три смены H 2 O, каждую по 1 мин.
4. Поместите предметные стекла в рабочий раствор созревшего гематоксилина на ночь или на 24 часа.
5. Промойте в проточном кране H 2 O в течение 5 мин.
6.Встряхните и сотрите излишки H 2 O с одного из слайдов. Нанесите на срезы несколько капель 5% раствора железных квасцов. Поместите предметное стекло на предметный столик микроскопа, и наблюдайте за процессом обесцвечивания через 10-кратную цель.
7. Когда желаемый внешний вид будет достигнут, вставьте слайд в кран H 2 O и оставьте его там минимум на 30 мин.
Контрастное окрашивание обычно не является необходимым или желательным, но может применяться после шага 7. Кук (1974) рекомендует эозин или светло-зеленый цвет.
8. Обезвоживание с помощью градуированных этанолов.
9.Очистить ксилолом и накрыть смолистой монтажной средой.
Результаты
Ядра, цитоплазматические структуры и эритроциты окрашиваются в черный, сине-черный или серый цвет в зависимости от степени дифференцировки.
Квасцы гематоксилин: гемалум и эозин
Описанный здесь метод типичен для многих процедур H и E.Был изменен традиционный рецепт гемалама Майера. за счет уменьшения количества йодата натрия. Также описаны альтернативные алюмогематеины равной ценности. Не ждите удовлетворительного Результатом является некритическое выполнение пронумерованных шагов этого метода: Необходимо внимательно следить за включенными примечаниями.
Реагенты
Кислотно-спиртовая (необязательно; см. Шаг 2)
Гидроксид аммония (необязательно; см. Шаг 3)
Альтернативы включают:
Гидроксид кальция
Карбонат лития (насыщенный водный)
Раствор эозина
Этанол (70%, 95%, 100%)
Быстрый зеленый FCF (0.5% водный) (необязательно; см. Этап 4)
Гемалум Майера
Это вариант Ланжерона 1901 года, готовый к немедленному использованию; Оригинальная смесь Майера, опубликованная в 1891 г., действительно не включать окислитель, и необходимо было подождать несколько месяцев для достаточного атмосферного окисления гематоксилина гематин.(Для получения дополнительной информации посетите http://stainsfile.info/StainsFile/dyes/75290.htm .)
Монтажная среда (смолистая)
n -Бутанол (необязательно; см. Шаг 6)
Периодическая кислота (5% водный) (необязательно; см. Этап 3)
Ксилол
Метод
1.Депарафиновые и гидратные парафиновые секции.
Замороженные секции следует высушить на предметных стеклах.
2. Окрашивайте гемалум Майера в течение 1-15 минут (обычно 2-5 минут, но это следует проверить перед окрашиванием большой партии слайдов).
Перекрашенные участки можно легко отличить, взбалтывая в течение нескольких секунд в кислотно-спиртовом растворе, а затем тщательно промывая. в кране H 2 O.
3. Промойте проточный кран H 2 O в течение 2 или 3 минут или пока секции не станут синими. Изучите влажное предметное стекло под микроскопом, чтобы проверить селективность ядер. окрашивание достигнуто.
Если кран H 2 O недостаточно щелочной, чтобы посинить секции, несколько капель гидроксида аммония (SG 0.9) или насыщенного водного карбонат лития или небольшую щепотку гидроксида кальция можно добавить к ~ 500 мл H 2 O; промытые секции можно оставить в ней на 30-60 секунд, а затем снова промыть в кране H 2 O.
Любая синяя окраска цитоплазмы и соединительной ткани должна быть очень тусклой.
Плохое окрашивание ядер может быть связано с предшествующим чрезмерным воздействием на ткань кислых реагентов (например,г., ненейтрализованный формалин или декальцинирующие жидкости). Чтобы восстановить хромофилию, см. Руководство Луны (1968), в котором рекомендуется обрабатывать гидратированные срезы либо 5% водным раствором бикарбоната натрия (NaHCO 3 ), либо 5% водным раствором периодной кислоты в течение ночи с последующей 5-минутной промывкой. в H 2 O перед окрашиванием.
4. Погрузите предметные стекла в эозин на 30 секунд при перемешивании.
Удовлетворительной альтернативой эозину является быстрый зеленый FCF (0,5% водный раствор), который легче дифференцируется с помощью H 2 O, чем с помощью спирта. Этот краситель окрашивает ацидофильные элементы в голубовато-зеленый цвет. Ценно, если некоторые компоненты части среза уже были окрашены в розовый или красный цвет, например, методом периодической кислоты-Шиффа.
5.Промойте (и дифференцируйте) в проточном кране H 2 O в течение ~ 30 секунд.
6. Обезвоживание 70%, 95% и двумя сменами 100% этанола (с перемешиванием, ~ 30 секунд при каждой смене; без перемешивания, 2-3 мин. в каждом изменении).
Для нитроцеллюлозных срезов избегайте использования 100% этанола и завершите дегидратацию двумя сменами (каждые 10 мин) n -бутанола.Замороженные срезы обычно требуют более короткого времени в красителях и более длительного времени для дифференциации, промывки, обезвоживания и др. и расчистка.
7. Очистите в ксилоле и накройте смолистой средой.
Результаты
Ядерный хроматин окрашен от синего до пурпурного; цитоплазма, коллаген, кератин и эритроциты окрашиваются в розовый цвет.
Обсуждение
Идеальный баланс между двумя компонентами пятен H и E — дело личного вкуса и определяется интенсивностью. окраски из-за эозина. Для более слабого контрастного окрашивания используйте 0,2% эозин или продлите дифференцировку (шаг 5). Дифференциация также встречается в 70% этаноле, используемом для обезвоживания, и, в меньшей степени, в этаноле с более высокими концентрациями.Желтый до оранжевого оттенка можно различить на некоторых объектах, окрашенных эозином Y. Наиболее легко это увидеть в эритроцитах. Окрашивание эозин никогда не должен быть настолько сильным, чтобы затенять ядра.
Многие рабочие используют смесь двух ксантеновых красителей (например, эозина Y и флоксина) для увеличения разнообразия оттенков фона. цвет. Гарви (1991) отдает предпочтение комбинации флоксина с шафраном, желтым красителем, который можно дешево купить в качестве пищевого красителя.
Есть несколько альтернатив гемалузу Майера. «Гематал-16» Бейкера, который содержит 16 ионов Al 3+ на каждую молекулу гематеина, представляет собой медленное, прогрессирующее окрашивание ядер, и его следует наносить на срезы на 10-30 мин. Другим популярным решением является гематоксилин Гилла, который имеет более высокие концентрации ингредиентов и соотношение краситель: Al 3+ 1: 8 (приблизительно). Обычно он дает адекватное окрашивание менее чем за 10 мин.Гематоксилин Эрлиха, одна из старейших из этих смесей, также имеет низкое соотношение краситель: Al 3+ .
Железный гематоксилин Вейгерта
Окрашивание в течение 5-10 минут в рабочем растворе гематоксилина Вейгерта должно давать селективное окрашивание ядер без необходимости дифференцируя.
Реагенты
Кислотно-спиртовая (необязательно; см. Шаг 4)
Монтажная среда (смолистая)
Раствор А гематоксилина Вейгерта
Раствор B гематоксилина Вейгерта
Метод
1.Приготовьте рабочий раствор гематоксилина Вейгерта, смешав равные объемы растворов A и B. Поместите A в сосуд для окрашивания. сначала для более быстрого перемешивания.
Смесь следует приготовить непосредственно перед использованием, но ее можно оставить на несколько дней на столе или в течение ~ 2 недель при 4 ° C.
2.Депарафиновые и гидратные парафиновые секции.
3. Окрашивать в рабочем растворе гематоксилина Вейгерта в течение 5 мин (10 мин, если раствору более нескольких дней).
4. Промыть в проточном кране H 2 O. Проверить под микроскопом.
В случае перекрашивания срезы можно обесцветить путем погружения в спиртово-кислотный раствор, хотя процесс идет медленно. Перекрашивание можно предотвратить в будущем, используя более высокую объемную долю Раствора B в рабочей смеси. Наоборот, если окрашивание происходит слишком медленно или слишком слабо, даже при свежем смешанном рабочем растворе, долю раствора А следует увеличить.Легкая серая окраска цитоплазмы обычно не имеет значения; он исчезает при нанесении контрастного красителя.
5. (Необязательно) При желании примените другие процедуры окрашивания.
6. Обезвожить, очистить и накрыть смолистой монтажной средой.
Результаты
Ядра окрашены в черный или сине-черный цвет (может быть темно-коричневым, если рабочий раствор хранился более нескольких дней).
Модификация Лилли гематоксилина железа Вейгерта
После приготовления этот модифицированный раствор можно использовать немедленно, так же, как и исходный железогематоксилин Вейгерта.
Модификация Лилли гематоксилина железа Вейгерта
Бразилия в
Этот краситель тесно связан с гематоксилином. Его продукт окисления (бразилеин) образует с ионами алюминия комплекс, который окрашивает ядра красные. Цвет (подобный тому, что придает алюмогематеин) экстрагируется кислотами, поэтому алюм-бразилеин лучше всего применять в качестве контрастировать, чтобы использовать метод, придающий зеленый или синий цвет другим компонентам ткани.
Подходящей смесью является бразал Майера. Это делается точно так же, как гемалум Майера, но с заменой бразилина (C.I. 75280) для гематоксилина. Он более стабилен, чем гемалум Майера, возможно, потому, что бразилин имеет только одну пару гидроксильных групп. группы в конфигурации легко окисляемых катехинов. Время окрашивания обычно составляет ~ 5 мин с последующим дифференцированием, если необходимо, в кислотно-спиртовом.Ядра окрашены в красный цвет. Brazalum — отличное средство против ядерной окраски после альцианового синего или Метод берлинской голубой Перлса для залежей железа.
Mayer’s Carmalum
Кармалум Майера часто используется для обработки целых образцов, таких как эмбрионы и мелкие беспозвоночные. Для них разбавьте окрашивание смесь 20 раз в 0.5% (об. / Об.) Уксусной кислоты и красить в течение 24-48 часов.
Метод
1. Окрашивать гидратированные срезы 10-30 мин.
Перекрашивания не происходит.
2.Стирать в проточном кране H 2 O ~ 1 мин.
3. Обезвожить, очистить и накрыть.
Результаты
Ядра окрашены в малиновый цвет. Кармалум, как и квасцы-бразилин, ценен в качестве контрастного красителя.Это дает приятный вид после альциановый синий, индигогенные методы для эстераз или серебряные методы для нервной ткани.
Квасцы-ядерные быстрые красные
Метод
1. Окрашивать гидратированные срезы 5-10 мин.
2. Промывочный кран H 2 O, ~ л мин.
3. Обезвожить, очистить и накрыть крышкой.
Результаты
Ядра окрашены в малиновый цвет.Обычно также наблюдается бледно-розовое окрашивание цитоплазмы и коллагена. Если окрашивание неудовлетворительное, причиной может быть неправильная маркировка или иным образом неудовлетворительная партия красителя (см. Frank et al. 2007).
Железо-эриохром цианин R для ядер или миелина
Этот метод (Кирнан 1984) основан на методах Пейджа (1965), Ллевеллина (1974, 1978), Хогга и Симпсона (1975) и Кларка (1979a).Он имеет два варианта и может использоваться либо для селективного окрашивания ядер (аналогично тому, что наблюдается с гематеином алюминия). или для окрашивания миелиновых оболочек нервных волокон. Краситель также продается под названиями солохром цианин R, хромоксан цианин. R и протравный синий 3. Комплекс железо-краситель окрашивает все. Дифференциация кислоты и спирта удаляет цвет со всего кроме ядерного хроматина, и синий цвет появляется при промывании срезов в H 2 O.Дифференциация щелочей или солей трехвалентного железа удаляет цвет всего, кроме миелина и эритроцитов.
Реагенты
Контркрашивание
После окрашивания ядер используйте красный анионный краситель, например эозин. Также можно использовать пикрофуксин Ван Гизона. После миелинового окрашивания используйте красный основной краситель (подходит 0,5% водный нейтральный красный красный или сафранин) для окрашивания ядер и субстанции Ниссля.
Дифференцирующий раствор B (1) для ядер
Дифференцирующий раствор B (2) для миелина
Можно использовать любой из следующих водных растворов:
10% (мас. / Об.) Сульфат аммония и железа (квасцы, NH 4 Fe [SO 4 ] 2 • 12H 2 O)
5.6% (мас. / Об.) Хлорид железа (FeCl 3 • 6H 2 O)
7,3% (мас. / Об.) Нитрата железа (Fe [NO 3 ] 3 • 6H 2 O)
Кроме того, Кларк (1979b) рекомендовал щелочной дифференцирующий раствор для окрашивания миелина:
гидроксид аммония (свежеприготовленный 1% [об.] Разведение)
Это действует в течение нескольких секунд, и легко удалить слишком много синего комплекса краситель-металл.
Механизмы дифференциации Fe (III) или щелочью обсуждались Кирнаном (1984, 2007).
Дифференцирующие решения хранятся несколько лет, но могут быть использованы только один раз. Отменить, если они мутные или толстые. слой бледного нерастворимого материала на дне бутылки.
Монтажная среда (смолистая)
Раствор для окрашивания А
Метод
1.Окрасьте гидратированные секции в растворе А.
Для окрашивания ядер достаточно 5 мин. Для окрашивания миелина необходимо 15-20 мин. (Для любого метода слайды могут оставаться в растворе красителя на 30 мин без вреда.)
2. Промыть в проточном кране H 2 O, 30 секунд или в три смены H 2 O.
Это для удаления несвязанного красителя.
3. Выполните дифференциацию:
и. Для окрашивания ядер погрузите в дифференцирующий раствор B (1) при непрерывном перемешивании на 10 секунд, промойте проточной водопроводной водой H 2 O в течение ~ 30 секунд и исследуйте под микроскопом, чтобы убедиться, что окрашены только ядра.Если окрашиваются и другие конструкции, снова поместите слайды в раствор для дифференцирования B (1) еще на 10 секунд и снова проверьте. (Дифференциация обычно занимает 10-30 сек.) Если выделено слишком много цвета, вернитесь к шагу 1 и используйте более короткую дифференциацию в следующий раз.
ii.Для окрашивания миелина погрузите в раствор B (2) до тех пор, пока не останется только миелин (белое вещество центральной нервной системы [ЦНС]). пятно.
Обычно это занимает 5-10 мин. Иногда невозможно полностью обесцветить ядра без потери некоторой интенсивности. в миелине.
4.Промойте в кране H 2 O (непрерывно, или три или четыре смены) в течение ~ 5 мин.
5. При желании нанесите контрастное пятно.
6. Высушите, очистите и покройте смолистой монтажной средой.
Результаты
При окраске ядер ядра окрашиваются в синий цвет.Краска более устойчива к водным кислотам, чем у алюмогематеина, позволяя использовать большее разнообразие контрастных красок.
При окраске миелина миелин окрашивается в синий цвет. Эритроциты тоже голубого цвета.
Галлоцианин Хромовые квасцы
Галлоцианин-хромовые квасцы — это синий катионный комплекс хрома (III) с оксазиновым красителем.Это полезный краситель для нуклеиновых кислот. кислоты, которые противостоят экстракции спиртами или кислотными контрастными красителями в большей степени, чем более простые катионные красители. Образцы может быть зафиксирован в любой смеси, сохраняющей ДНК и РНК. Метод применяется в основном на парафиновых срезах, но также может быть используется на замороженных срезах фиксированного формалином материала.
Реагенты
Контркрашивание (необязательно; см. Шаг 3)
Галлоциновый раствор хромовых квасцов
Монтажная среда (смолистая)
Метод
1.Депарафиновые и гидратные парафиновые секции.
2. Окрашивайте либо в течение 2 часов при 50 ° C-60 ° C (банка коплина в духовке), либо в течение 24 часов при комнатной температуре.
3. Промойте в кране H 2 O и при необходимости обработайте пятно (например, эозином).
4. Обезвожить, очистить и поместить в смолистую среду.
Результаты
Субстанция Ниссля нейронов и ядерный хроматин (включая ядрышки) окрашены в синий цвет. Отложения рибосомальной РНК в цитоплазме клеток, кроме нейронов, также синего цвета.Протеогликаны (тучные клетки, хрящевой матрикс) и некоторые виды слизи, содержащие кислые углеводы, такие как бокаловидные клетки кишечника, также окрашиваются.
Стандартное окрашивание H&E | Исследования в больнице Святого Михаила
Что такое H&E?Окрашивание гематоксилином и эозином (H&E) — одно из основных красителей в гистологии. Это окрашивание не менялось в течение многих лет, поскольку оно хорошо работает с различными фиксаторами и демонстрирует широкий спектр свойств цитоплазматического, ядерного и внеклеточного матрикса.До сих пор это пятно по-прежнему наиболее широко используется в медицинской диагностике и часто является золотым стандартом.
Гематоксилин — это соединение, извлекаемое из сердцевины бревна. Гематоксилин можно рассматривать как базовый краситель. Используется для окрашивания кислотных структур в пурпурно-синий цвет. ДНК в ядре и РНК в рибосомах и в шероховатом эндоплазматическом ретикулуме являются кислыми, поэтому гемотоксилин связывается с ними и окрашивает их в пурпурный цвет. Сам по себе гематоксилин технически не является красителем и не окрашивает ткани напрямую.Следовательно, его необходимо использовать в сочетании с «протравой» — соединением, которое помогает ему связываться с тканями с образованием связи ткань-протрава-гематоксилин. В качестве протравы обычно используется катион металла, например алюминия.
Эозин является анионным и действует как кислотный краситель. Он заряжен отрицательно и окрашивает основные (или ацидофильные) структуры в красный или розовый цвет. Большинство белков цитоплазмы являются основными, поэтому эозин связывается с этими белками и окрашивает их в розовый цвет. Это включает цитоплазматические волокна в мышечных клетках, внутриклеточных мембранах и внеклеточных волокнах.
Как следует из названия, краситель H&E использует комбинацию двух красителей — гематоксилина и эозина.