Меню Закрыть

Сложное окрашивание это: Сложные окрашивания волос

Содержание

Сложное окрашивание – hqbeauty.by

Сложное окрашивание

Профессиональные техники окраски волос постоянно обновляются и совершенствуются. И если раньше огромной популярностью пользовались исключительно монохромные технологии, то сегодня лидирующие позиции занимают сложные методы окрашивания. Последние модные тенденции диктуют многоцветные способы нанесения цвета, благодаря которым удается подчеркнуть индивидуальность и яркость образа, сделать прическу более выразительной и стильной.

Осуществить сложное окрашивание в домашних условиях практически невозможно. Лучше всего доверить выполнение этой техники профессиональному мастеру, который обладает соответствующими знаниями и умениями в области индустрии красоты и парикмахерского искусства. Поэтому обратившись к колористам салона HQ, вы точно не прогадаете и сможете добиться желаемого безупречного результата.

Многоцветные окрашивания волос дают возможность девушкам одновременно сохранить красоту и здоровье прядей.

Они помогают создавать некую иллюзию плавного перехода цвета, что делает внешний вид локонов максимально естественным и натуральным. Кроме того, сложная окраска позволяет представительницам прекрасного пола выглядеть оригинально и модно.

Покраска в подобном стиле заключается в распределении разного количества тонов, как близких по палитре к природному цвету прядок, так и более контрастных оттенков.

Сложное окрашивание волос

Наряду с привлекательностью современная мода диктует легкость и естественность прически. Такой же точки зрения придерживаются и мастера салона HQ. Стилисты советуют своим клиентам сложные виды окрашивания, поскольку они позволяют не только выделиться, как личность, но и придать волосам роскошный внешний вид. Самые популярные технологии, такие как балаяж, меллирование, омбре дают возможность создавать невероятно красивые и по-настоящему яркие образы. Покраска прядей в этом стиле помогает девушке выглядеть свежо, элегантно и женственно.

Мастера парикмахерского искусства салона красоты HQ обладают высокой квалификацией и знают толк в своей работе. Профессиональные стилисты и колористы с удовольствием подберут для вас подходящий вид сложного окрашивания в соответствии с вашими предпочтениями и цветотипом. Благодаря этому вы сможете получить действительно качественный результат, который продержится на волосах максимально долго. В салоне HQ вас ждут выгодные цены, обученные специалисты, высокий уровень сервиса и приятная атмосфера, благодаря чему вам захочется возвращаться сюда снова и снова.

Сложное окрашивание фото

Сложное окрашивание – процесс не простой. И мы прекрасно понимаем, что вам важно, не только качество выполнения техники покраски, но и конечный результат, который мы готовы предоставить.

Фото сложного окрашивания, сделанные мастерами салона HQ, вы можете посмотреть в нашем аккаунте инстаграм. Все они сняты с готовых образов реальных клиентов, поэтому любую из понравившихся технологий, наши колористы смогут с легкостью повторить на ваших локонах. Будьте уверены, что они смогут добиться желаемого эффекта и придать волосам стильный, а, главное, естественный вид.

На сегодняшний день широким спросом пользуются следующие технологии сложного окрашивания:

• балаяж, позволяющий сочетать в себе несколько разных оттенков с соблюдением четких границ;
• брондирование, дающее возможность осуществить плавный переход от темных тонов к более светлым;
• колорирование, выполняющееся нанесением на волосы разнообразных оттенков и полутонов;

• омбре, позволяющее выполнять плавный или резкий переход темного цвета от корней к светлому на концах;
• меллирование, дающее возможность осветлять пряди выборочно;
• шатуш, предусматривающий чередование темных и светлых тонов.

Цвета для некоторых способов сложного окрашивания применяются в зависимости от пожелания клиента и его внешних данных. Они могут быть как естественных оттенков, так и экстремально ярких. Колористы салона HQ помогут вам скорректировать любой цвет и избежать проблем со здоровьем ваших волос с помощью профессиональных средств. Это чрезвычайно важно, так как использование дешевых, низкопробных красителей может привести не только к выпадению, сечению, сухости и ломкости прядей, но и к негативному результату. Ни в коем случае не занимайтесь самостоятельным окрашиванием дома. Лучше обратитесь к профессионалам салона HQ и, тем самым, сохраните свои волосы в идеальном состоянии.

Наши колористы наносят краску без применения инструментов и продукции, которые могли бы предотвращать поступления кислорода в пряди. Именно поэтому составы профессионального красящего пигмента оказывают щадящее воздействие на волосы и не повреждают их ни снаружи, ни изнутри. При этом они глубоко проникают в каждый волосяной стержень и равномерно прокрашивают его. После такого способа нанесения краски пряди остаются гладкими и мягкими на протяжении длительного времени, а при дополнительном уходе профессиональными шампунями, масками и бальзамами, они остаются здоровыми навсегда.

Сложное окрашивание цена в Минске

Процедура монохромного или многоцветного окрашивания осуществляется непросто. Для того чтобы добиться идеального результата, мастеру в некоторых случаях может потребоваться гораздо больше времени, чем планируется. Ведь здесь все зависит от структуры волос, их густоты и начального состояния. Поэтому если вы хотите, чтобы ваши локоны оставались красивыми и здоровыми, обращайтесь к профессионалам салона HQ. Специалисты учтут все ваши пожелания и сделают все возможное и невозможное для достижения заветной цели. В своей работе они используют только качественную краску с безопасным составом, что гарантирует вам создание безупречного образа без вреда для волос.

Как и любой другой вид покраски, сложное окрашивание, выполняемое в салоне красоты, имеет массу достоинств. К ним можно отнести:

• возможность выделиться среди окружающих;
• создание стильного образа;
• сохранение структуры и здоровья волос;
• зрительное увеличение объема локонов;
• натуральность и естественность прически;
• правильность подобранных оттенков;
• маскировка седых волосков;
• отсутствие необходимости в частом повторении окрашивания;

• возможность подчеркнуть стрижку.

Цена на сложное окрашивание в Минске устанавливается в зависимости от используемого в процессе работы материала, его качества, а также от опыта колориста и имиджа салона. По этим причинам чаще всего стоимость услуг на такую процедуру неоправданно завышена. Но только не в салоне HQ. Мы заботимся о своих клиентах, поэтому не увеличиваем ценовой порог, поскольку хотим, чтобы наши процедуры были доступны для каждого человека.

Мечтаете о роскошных, блестящих и здоровых волосах, окрашенных в модные оттенки и оформленных стильной стрижкой? Тогда скорее записывайтесь к нашим колористам и парикмахерам, которые с удовольствием сделают ваш образ незабываемым!

Окрашивание волос

Окрашивание волос

Окрашивают волосы по разным причинам. Но, в любом случае, с приобретением нового цвета появляется шанс начать новую жизнь, ведь окрашивание волос это один из самых доступных способов радикально изменить свой образ, стать более заметным и привлекательным.

В РАБОТЕ С ЦВЕТОМ ВОЛОС МЫ ИСПОЛЬЗУЕМ ТОЛЬКО ПРОДУКЦИЮ КЛАССА «ЛЮКС» и «ПРЕМИУМ»: «L’OREAL» (Франция), «WELLA» (Германия).

Является ли Ваш цвет волос таким же оригинальным и неповторимым как Вы сами?

AirTouch

AirTouch -переводится как прикосновение воздуха. Именно прикосновение воздуха и лежит в основе этого вида сложного окрашивания.

Этот вид сложного окрашивания позволяет добиться максимально естественного эффекта. Блики и мягкие переливы цвета и прядей визуально делают волосы объемнее.

Еще одно преимущество такого окрашивания – это очень плавное отрастание, что позволяет делать коррекцию окрашивания значительно реже. Струящиеся, легкие и воздушные волосы с ненавязчивым и неявным переходом цветов – вот главные особенности окрашиваний airtouch.

Калифорнийское мелирование

При таком окрашивании волосы у корней остаются темного цвета, к кончикам обретая бежевый, медовый или кофейно-коньячный оттенок.

Почему называется калифорнийское мелирование? Потому что на пляжах калифорнии волосы у женщин выгорали до очень светлого цвета отсюда и название.

Шатуш

Шатуш – позволяет создавать плавный, акварельный переход от более темных корней к более светлым кончикам волос.

Затемненные корни и хаотично расположенные, осветленные пряди создают эффект натурально выгоревших на солнце волос, а также придают волосам «глубину» и визуальный дополнительный объем.

Брондирование

Брондирование –смешивание оттенков (brown + blond) с применением сложной технологии мультиколорирования и мелирования – это и есть голливудское окрашивание, названное «брондирование».

При окрашивании прядей мастер сделает идеальные плавные переходы тонов (от светло-бежевого до коричневого, шоколадного), заставив блики цвета переливаться, перетекать друг в друга.

Балаяж

Балаяж – это когда солнце запуталось в волосах ….Технология окрашивания балаяж это осветление отдельных прядей волос. Создается контрастный переход между цветами, образ выгоревших волос или просто добавление ярких акцентов.

Работая в технике балаяж, мастер окрашивает абсолютно все кончики, то есть волос нигде не пропускается.

 

Ждем Вас в салоне красоты ТанГо на Косыгина пр. 33 корп. 1

☎Предварительная запись по телефону: +7 (812) 525-32-31, +7 (905) 211-91-99

Что такое сложное окрашивание волос и какие есть виды

Большинство представительниц прекрасного пола регулярно, или время от времени, прибегают к окрашиванию волос, так как это самый доступный способ изменить свою внешность, если очень хочется.

В последние годы наиболее востребовано сложное окрашивание волос, которое выполняется в салонных условиях, так как самостоятельно дома качественно сделать это невозможно.

Что такое сложное окрашивание волос

Сложное окрашивание подразумевает использование не одного цвета, а разные оттенки.

Пряди отличаются по цвету в итоге, но тон примерно одинаковый. Одни пряди светлее, другие темнее и т.д. Расхождение в оттенках минимальное, без сильных контрастов за счёт чего и получается естественный эффект, увеличивается визуально объем и выглядит это очень привлекательно.

Большинство техник сложного окрашивания не трогает корни волос. В первую очередь это делается для того чтобы защитить волосы и не портить их краской.

Кроме того, это изначально небольшой эффект отросших волос. Так как переход цвета не резкий, а плавный, выглядит это очень естественно. Преимущество в том что, даже если девушка не успела вовремя обновить окрашивание, за счёт того что корни изначально были тёмными, это не будет смотреться некрасиво и бросаться в глаза.

Техники сложного окрашивания волос

Их огромное количество. Несмотря на то, что сама техника сложного окрашивания была придумана относительно недавно, некоторые способы уже стали чуть ли не классическими.

Однако каждый сезон стилисты придумывают какие-то новые способы. Наиболее популярными видами техники сложного окрашивания волос являются следующие:

  • Омбре
  • Балаяж
  • Шатуш
  • Пиксельное окрашивание
  • Тигровый глаз
  • Колорирование
  • Брондирование
  • 3D окрашивание
  • Скво
  • Контуринг
  • Смоки блонд
  • Скандинавский поинт
  • Блонетирование и многое другое.

Где лучше выполнить

Самостоятельно данную технологию не используют даже опытные мастера. Просто потому что они физически не видят то, что у них в затылочной части, например. Поэтому дилетантам, тем более, не стоит пытаться выполнить такое окрашивание дома.

Можно обратиться в салон, либо к мастеру который принимает дома. Последний вариант дешевле, но достаточно рискованный, потому что нет никаких гарантий. К мастеру, который принимает дома, нужно идти только после большого количества положительных рекомендаций от знакомых людей которые у него красились.

В остальных случаях лучше пойти в проверенный салон, к опытному ТОП-мастеру с большим количеством о положительных отзывов и безупречной репутацией.

Окрашивание волос. Окраска волос только профессиональной косметикой

Сложность Расход Цена

Окрашивание I сложности:

— окрашивание волос в один тон;

— окрашивание прикорневой зоны.

40 / 60

90 / 120

150

3000 / 3200

4050 / 4450

5300

Окрашивание II сложности:

— пилинг + тонирование;

— окрашивание волос с предварительной пегментацией;

— сложное выравнивание цвета;

— создание переходных цветов от более темных корней к светлым концам;

— блондирование прикорневой зоны с последующим тонированием.

40 / 60

90 / 120

150 / 200

4200 / 4500

5950 / 6750

7950 / 8200

Окрашивание III сложности:

— мелирование с последующим тонированием;

— прикорневое мелирование с последующим тонированием;

— балаяж, омбре, шатуш, AirTouch с последующим тонированием.

40 / 60

90 / 120

150 / 200

4700 / 5500

7950 / 8750

10950 / 11200

Мелирование без тонирования

40 / 60

90 / 120

150 / 200

3500 / 4300

5300 / 6000

6500 / 6800

Make up для волос (экспресс тонирование) 25 / 30 / 40 2500 / 3000 / 4000
Смывка для волос

40 / 60

90 / 120

150 / 200

3500 / 4300

5300 / 6000

6500 / 6800

Насыщенный цвет волос – всегда будет предметом восхищения и гордостью любой девушки. Профессиональное окрашивание в нашем салоне поможет Вам добавить эффектности и индивидуальности в образ. Мастера FashionPlace используют при окрашивании волос профессиональную косметику LANZA. В Данную услугу входит:

  • Окрашивание в один тон
  • Сложное окрашивание
  • Брондирование волос
  • Окрашивание краской клиента
  • Процедура «смывка цвета»

Окрашивание волос – это самый быстрый и удобный способ преобразить стиль, освежить образ и, возможно, изменить жизнь. Помимо изменения имиджа, покраска волос помогает в таких случаях, как появление седины, оживление потускневшего цвета волос и прочего.

Конечно, многие пробовали красить волосы самостоятельно. Но, к сожалению, такие эксперименты не всегда приносят желаемый результат. Мало того, что в итоге вид может выйти просто неэстетичным, но еще существует риск повредить структуру волос, а это уже более серьезная проблема.

В магазинах всё чаще появляется некачественная краска, способная испортить волосы, не говоря уже выборе неподходящего тона. Бытовые красители, даже самого темного оттенка содержат в себе очень большое количество аммиака и перекиси (около 9-12%), происходит сильное воздействие на кутикулу, волосы становятся хрупкими и ломкими. А волосы, как известно, способны накапливать шлаки, происходит токсикация пигмента, в результате чего, цвет получается тусклым и некрасивым. Такие волосы трудно спасти без применения специальной помощи.

Во избежание неприятных ситуаций, связанных с неудовлетворительными итогами окрашивания, рекомендуется проводить такую процедуру исключительно в салонах у опытных мастеров.

Наши специалисты настоящие профессионалы своего дела способны удовлетворить вас на 100% и избавить от риска повреждения структуры волос.

Профессиональное окрашивание волос в салоне – это гарантия идеального результата. Мастера парикмахерской помогут определиться с оттенком и техникой!

Большой выбор техник окрашивания волос – лучший способ сохранить безупречную прическу. Наши мастера владеют техниками балаяж, шатуш, омбре, сомбре, брондирование и классическое мелирование. А также в процедуру окрашивания входит:

Окрашивание в один тон. Тонирование. Окрашивание краской клиента. Мелирование. Осветление. Процедура «смывка цвета». Сложное окрашивание.

Кроме того, проведение подобной процедуры в нашей студии является гарантией того, что и волосяные корни, и кончики будут окрашены в равномерном порядке. Покраска волос в салоне является работой профессиональных стилистов, которые наносят краску, подбирают приемлемый цвет и дают дельный совет по уходу за волосяным покровом головы.

Таким образом, покрасить волосы не представляет никакого риска, потому что:

  1. Оно осуществляется мастерами своего дела
  2. В работе мы используем только профессиональные средства

Преимущества окрашивания в салоне красоты Fashion Place:

Процедура проводится на самом высоком уровне без риска и вреда для здоровья волос. В процессе применяются самые надежные средства от ведущих лидеров в индустрии по окрашиванию волос. Наши специалисты подберут оптимальный вариант для каждого клиента независимо от интересующей техники окрашивания. Наши мастера предоставляют современные рекомендации по стилю, моделированию прически. Мастера подбирают цвет для покраски волос, который сочетается с цветом кожи и глаз. При этом стилисты учитывают возраст женщины, её стиль и личные предпочтения. Приятная атмосфера салона красоты и продуманный интерьер позволят вам чувствовать себя как дома во время любой процедуры.

Приглашаем вас в салон красоты в Москве на Войковской и Балтийской, который ценит своих клиентов – Fashion place. Красота – это естественность и истинное удовольствие! И вы в этом убедитесь на личном опыте!

Сложное окрашивание Kydra Nature | N-Ergo

Красивые, здоровые, блестящие волосы издавна являлись главным украшением женщины. А ведь действительно, роскошные волосы определённо привлекают внимание. Как же сохранить красоту и здоровье волос, когда вокруг столько соблазнов: брондирование, омбре, калифорнийское мелирование и 3D окрашивание – прямо глаза разбегаются. Как быть?! Попробовать трендовые техники окрашивания, а потом постепенно лечить волосы и кожу головы или да ну его, это модное окрашивание, зато волосы будут здоровыми. Теперь нет необходимости делать этот мучительный выбор. Существует новое поколение красок, которые не содержат перекиси водорода и аммиака, которые не повреждают структуру волос, а наоборот, восстанавливают её — это Kydra Nature!

Что из себя представляют средства для окрашивания Kydra Nature?

В 60-х годах прошлого столетия в знаменитом парижском салоне красоты Carita работал гениальный мастер парикмахерского искусства по имени Патрик Алес. Он впоследствии стал основателем бренда Phyto, “фишкой” которого стала специализация на средствах для ухода и окрашивания волос на основе натуральных компонентов. Опыт специалистов лаборатории “Phytosolba” можно исчислять десятилетиями, что позволяет выпускать принципиально новые линии продукции, такие как средства для окрашивания Kydra Nature.

Что такое сложное окрашивание?

Если вам надоел ваш цвет волос и “душа просит” экспериментов, то сложное окрашивание – именно то, что “доктор прописал”! По сути, это нанесение на волосы нескольких тонов, что позволяет придать окрашенным волосам вид натурального перехода цвета или добавить яркие акценты. Причём никаких ограничений, поскольку сложное окрашивание подходит для любого типа и цвета волос.

Как происходит сложное окрашивание красителями Kydra Nature?

Окрашивание от Kydra отличается от аналогичных процедур с использованием прочих средств тем, что помимо стандартной процедуры окрашивания, колорист использует целый комплекс средств по уходу за волосами. Сложное окрашивание с Kydra Nature длится примерно полтора часа. Во время работы колорист корректирует и выравнивает цвет по всей длине, поэтому эта процедура подойдёт для очаровательных обладательниц длинных натуральных волос.

Чем средства Kydra Nature для сложного окрашивания отличаются от аналогов?

Красители Kydra Nature отлично смешиваются, благодаря чему колорист создает свои, уникальные оттенки, что позволит посетительницам салона реализовать самые смелые идеи. При этом никакого вреда волосам не будет, ведь средства для окрашивания Kydra Nature на 80% состоят из натуральных растительных компонентов. Более того “Kydra” работает только с проверенными салонами, в которых колористы проходят обучение по работе с этими средствами.

Какой результат я увижу после сложного окрашивания Kydra Nature?

В результате вы увидите здоровые, блестящие волосы, которые поражают глубиной и насыщенностью цвета. Спустя месяц после окрашивания ваши волосы сохранят яркость, словно в первый день в салоне. С каждый окрашиванием структура волос будет улучшаться.

Сколько стоит сложное окрашивание Kydra Nature?

Салон «N-Ergo» на Можайском шоссе
Окрашивание Kydra Nature 7500,00

Грамм Окрашивание


Создано Моникой З. Брукнер

Что такое окрашивание по Граму?
Окрашивание по Граму

— это распространенный метод, используемый для дифференциации двух больших групп бактерий на основе их различных компонентов клеточной стенки. Процедура окрашивания по Граму различает грамположительные и грамотрицательные группы путем окрашивания этих клеток в красный или фиолетовый цвет. Грамположительные бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет из-за наличия толстого слоя пептидогликана в их клеточных стенках, который сохраняет кристаллический фиолетовый цвет, которым окрашены эти клетки.В качестве альтернативы грамотрицательные бактерии окрашиваются в красный цвет, что объясняется более тонкой стенкой пептидогликана, которая не сохраняет кристаллический фиолетовый в процессе обесцвечивания.

Как работает окрашивание по Граму?

Окрашивание по Граму включает три процесса: окрашивание водорастворимым красителем, называемым кристаллическим фиолетовым, обесцвечивание и контрастное окрашивание, обычно сафанином. Из-за различий в толщине пептидогликанового слоя в клеточной мембране между грамположительными и грамотрицательными бактериями грамположительные бактерии (с более толстым пептидогликановым слоем) сохраняют окраску кристаллическим фиолетовым во время процесса обесцвечивания, в то время как грамотрицательные бактерии теряют окраску кристаллическим фиолетовым. и вместо этого окрашиваются сафранином в процессе окончательного окрашивания.Процесс состоит из трех этапов:

  1. Клетки окрашены кристально-фиолетовым красителем. Затем добавляют раствор йода по Граму (йод и йодид калия) для образования комплекса между кристаллическим фиолетовым и йодом. Этот комплекс представляет собой более крупную молекулу, чем исходный кристаллический фиолетовый краситель и йод, и нерастворим в воде.
  2. К образцу добавляется обесцвечивающее средство, такое как этиловый спирт или ацетон, которое обезвоживает слой пептидогликана, сжимая и уплотняя его. Большой кристаллический комплекс фиолетово-йода не может проникнуть через этот плотный пептидогликановый слой и, таким образом, задерживается в клетке грамположительными бактериями.Напротив, внешняя мембрана грамотрицательных бактерий разрушается, и более тонкий пептидогликановый слой грамотрицательных клеток неспособен удерживать комплекс кристаллического фиолетового йода, и цвет теряется.
  3. К образцу добавляется контрастное краситель, например, слабо растворимый в воде сафранин, окрашивающий его в красный цвет. Поскольку сафранин светлее кристаллического фиолетового, он не нарушает пурпурную окраску грамположительных клеток. Однако обесцвеченные грамотрицательные клетки окрашиваются в красный цвет.

Порядок окрашивания и проблемы:

Реактивы:

  • Кристально-фиолетовый (первичная окраска)
  • Раствор йода / йод по Граму (протрава, фиксирующая кристаллический фиолетовый цвет на клеточной стенке)
  • Обесцвечивающее средство (например, этанол)
  • Сафранин (вторичная окраска)
  • Вода (желательно в шприц-бутылке)
  1. Сделайте слайд с образцом клеток для окрашивания. Закрепите образец на предметном стекле нагреванием, осторожно пропустив предметное стекло с каплей или небольшим кусочком образца через горелку Бунзена три раза.
  2. Добавьте основной краситель (кристаллический фиолетовый) к образцу / предметному стеклу и инкубируйте в течение 1 минуты. Промойте предметное стекло слабой струей воды не более 5 секунд, чтобы удалить несвязанный кристаллический фиолетовый цвет.
  3. Добавьте йод по Граму на 1 минуту — это протрава или средство, которое фиксирует кристаллический фиолетовый на стенке бактериальной клетки.
  4. Промойте образец / предметное стекло ацетоном или спиртом в течение ~ 3 секунд и промойте слабой струей воды . Спирт обесцвечивает образец, если он грамотрицательный, удаляя кристаллический фиолетовый цвет.Однако , если спирт остается в образце слишком долго, он также может обесцвечивать грамположительные клетки .
  5. Добавьте вторичный краситель, сафранин, на предметное стекло и инкубируйте в течение 1 минуты. Стирать под слабой струей воды не более 5 секунд. Если бактерия является грамположительной, она сохранит первичную окраску (кристаллический фиолетовый) и не получит вторичную окраску (сафранин), из-за чего под микроскопом она будет выглядеть фиолетовой / пурпурной. Если бактерия грамотрицательна, она потеряет первичное пятно и заберет вторичное, из-за чего при просмотре под микроскопом он станет красным.

Литература

Ссылки по теме

Преподавательская деятельность


Окрашивание по

Грамму — StatPearls — Книжная полка NCBI

Введение

Окрашивание по Граму является одним из наиболее важных методов окрашивания в микробиологии. Он получил свое название от датского бактериолога Ганса Христиана Грэма, который впервые представил его в 1882 году, в основном для выявления организмов, вызывающих пневмонию.[1] Часто при первом проведенном тесте окрашивание по Граму включает использование кристаллического фиолетового или метиленового синего в качестве основного цвета. [2] Термин для организмов, которые сохраняют основной цвет и кажутся пурпурно-коричневыми под микроскопом, — грамположительные организмы. Организмы, которые не поглощают первичную окраску, под микроскопом выглядят красными и являются грамотрицательными организмами.

Первым этапом окрашивания по Граму является использование красителя кристаллического фиолетового для первоначального окрашивания предметных стекол. Следующий шаг, также известный как закрепление красителя, включает использование йода для образования кристаллического фиолетово-йодного комплекса для предотвращения легкого удаления красителя.Впоследствии для удаления красителя используется обесцвечивающее средство, часто растворитель этанол и ацетон. Основной принцип окрашивания по Граму заключается в способности стенки бактериальной клетки удерживать краситель кристаллического фиолетового во время обработки растворителем. [3] Грамположительные микроорганизмы имеют более высокое содержание пептидогликана, тогда как грамотрицательные микроорганизмы имеют более высокое содержание липидов. [4]

Первоначально все бактерии поглощают краситель кристаллический фиолетовый; однако при использовании растворителя липидный слой грамотрицательных организмов растворяется.С растворением липидного слоя грамнегативы теряют первичную окраску. Напротив, растворитель обезвоживает стенки грамположительных клеток с закрытием пор, предотвращая диффузию фиолетово-йодного комплекса, и, таким образом, бактерии остаются окрашенными [5]. Продолжительность обесцвечивания является критическим этапом при окрашивании по Граму, поскольку длительное воздействие обесцвечивающего агента может удалить все пятна от обоих типов бактерий. [6]

Последним этапом окрашивания по Граму является использование основного красителя фуксина для придания обесцвеченным грамотрицательным бактериям розового цвета для облегчения идентификации.Он также известен как контрастное пятно. Некоторые лаборатории используют сафранин в качестве контрастного красителя; однако основной фуксин окрашивает грамотрицательные организмы более интенсивно, чем сафранин. Аналогично, Hemophilus spp., Legionella app и некоторые анаэробные бактерии плохо окрашиваются сафранином.

Сбор образцов

Для окрашивания по Граму можно использовать различные клинические образцы. Некоторые из часто используемых образцов — это мокрота, кровь, спинномозговая жидкость, асцитическая жидкость, синовиальная жидкость, плевральная жидкость, моча и т. Д.Также можно использовать мазки из ноздрей, горла, прямой кишки, раны, шейки матки и т. Д. Сбор образцов всегда должен производиться в стерильных контейнерах.

Процедуры

Типы оборудования, необходимого для окрашивания по Граму, включают:

Реагенты, необходимые для окрашивания по Граму, включают:

  • Кристаллический фиолетовый (первичное окрашивание) [1]
  • Раствор йода по Граму (протрава) [1]
  • Ацетон / этанол (50:50 по объему) (обесцвечивающее средство) [1]
  • 0.1% основной раствор фуксина (контрастный краситель) [1]
  • Вода

Процедура

1. Подготовка мазка на предметном стекле:

  • Петля для посева используется для переноса капли суспендированной культуры на предметное стекло микроскопа.

  • Если в чашке Петри или наклонной культуральной пробирке есть колония, добавляют каплю или несколько петель воды, чтобы облегчить перенос минимального количества колонии на предметное стекло.

  • Требуется минимальное количество культуры. Если культура может быть обнаружена визуально на петле посева, это указывает на сбор слишком большого количества культуры.

  • Культуру распределяют с помощью петли для посева до однородной тонкой пленки по кругу диаметром 15 мм. Типичный слайд может содержать до 4 небольших мазков, если исследуется более одной культуры.

  • Предметное стекло можно сушить на воздухе или сушить с помощью тепла на слабом огне.Ползун следует перемещать круговыми движениями над пламенем, чтобы предотвратить перегрев или образование кольцевых узоров на ползуне. Тепло способствует адгезии клеток к предметному стеклу и предотвращает значительную потерю культуры во время ополаскивания.

2. Окрашивание по Граму:

  • К фиксированной культуре добавляют краситель кристаллического фиолетового.

  • Через 10–60 секунд пятно сливается, а излишки пятна смываются водой. Цель — смыть пятно без потери закрепленной культуры.

  • Раствор йода используется для покрытия мазка на 10-60 секунд. Этот шаг известен как «закрепление красителя». Раствор йода сливают, предметное стекло ополаскивают проточной водой. Лишняя вода с поверхности стряхивается. [7]
  • На предметное стекло добавлено несколько капель обесцвечивающего средства. Обесцвечивающие средства часто представляют собой смешанный растворитель этанола и ацетона. Этот этап известен как «обработка растворителем». Предметное стекло ополаскивают водой в течение 5 секунд. Чтобы предотвратить чрезмерное обесцвечивание грамположительных клеток, прекратите добавлять обесцвечивающее средство, как только растворитель перестанет окрашиваться, когда он течет по предметному стеклу.

  • Мазок окрашивают основным раствором фуксина в течение 40-60 секунд. Раствор фуксина смывается водой, а избыток воды промокается бибулярной бумагой. Слайд также можно сушить на воздухе после стряхивания лишней воды.

3. Микроскопическое исследование предметного стекла:

  • Предметное стекло необходимо исследовать под микроскопом в масляной иммерсии.

  • При первичном исследовании предметных стекол следует использовать объектив X40 для оценки распределения мазков, а затем их следует исследовать с помощью масляного иммерсионного объектива X100.

  • Все области слайда требуют первичного осмотра. Следует исследовать участки толщиной всего в одну ячейку. Толстые области на слайдах часто дают переменные и неверные результаты.

  • Лейкоциты и макрофаги окрашивают грамотрицательные.

  • Клетки плоского эпителия окрашивают грамположительные.

Используются различные модификации окрашивания по Граму, такие как окрашивание по Граму Аткин, окрашивание по Граму Берк и т. Д.

Показания

Окрашивание по Граму показано при подозрении на бактериальную инфекцию для легкой и ранней диагностики.[8]

Возможный диагноз

Окрашивание по Граму помогает в диагностике заболевания или патологического состояния.

Примеры грамположительных организмов:

  • Кокки: Staphylococcus видов и Streptococcus видов

  • Bacilli: Corynebacterium видов, Clostridium видов и Listeria видов

  • Примеры грамотрицательных организмов. :
  • Кокки: Neisseria gonorrheae, Neisseria meningitidis, и Moraxella видов

  • Бациллы: Спирали Escherichia, виды Pseudomonas , Proteus видов и видов клебсиелл

    000

    грабсиеллы и видов клебсиелл. К вариабельным организмам относятся:

  • Actinomyces видов

Нормальные и критические результаты

Нормальным признаком стерильной биологической жидкости должно быть отсутствие каких-либо патологических микроорганизмов в мазке.Организмы идентифицируются по цвету и форме. Грамположительные организмы имеют фиолетовый или синий цвет, а грамотрицательные — розовый или красный цвет. Бациллы палочковидные, а кокки сферические.

Результаты окрашивания по Граму, указывающие на основные бактериальные инфекции:

  • Грамположительные кокки в скоплениях: Обычно характерны для видов Staphylococcus , таких как S. aureus.

  • Грамположительные кокки в цепочках: Обычно характерны для видов Streptococcus , таких как S.pneumoniae, стрептококки группы В

  • Грамположительные кокки в тетрадках: Обычно характерны для Micrococcus spp.

  • Грамположительные бациллы, толстые: Обычно характерны для Clostridium spp., Таких как C. perfringes , C. septicum .

  • Грамположительные бациллы, тонкие: Обычно характерны для Listeria spp.

  • Разветвленные грамположительные палочки: обычно характерны для Actinomyces и Nocardia .

  • Грамотрицательные диплококки: Обычно характерны для видов Neisseria , таких как N. meningitidis .

(Обратите внимание: виды Moraxella и Acinetobacter spp., Часто являются диплококками по морфологии. Иногда Acinetobacter могут проявляться как грамположительные кокки, а могут быть плеоморфными.

  • Coccobacilli : Обычно характерен для Acinetobacter spp., И они могут быть грамположительными, грамотрицательными или грамположительными.

  • Грамотрицательные бациллы, тонкие: обычно характерны для Enterobacteriaceae , таких как E. coli .

  • Коккобациллы: Обычно характерны для видов Hemophilus , таких как H. influenzae .

  • Изогнутый: Обычно характерен для Vibrio spp.,; Campylobacter spp., Например V. cholerae и C. jejuni .

  • Форма тонкой иглы: Обычно характерна для Fusobacterium spp.

Организмы с грамотрицательными изменениями: эти организмы не подразделяются ни на грамположительные, ни на грамотрицательные.

Мешающие факторы

Если образец не является стерильным, образец может быть заражен множеством организмов. Точно так же неправильный сбор образцов и предварительное использование антибиотиков могут помешать росту организмов. Во время интерпретации окраски по Граму, как описано Всемирной организацией здравоохранения в 2003 году, необходимо выполнить следующие шаги:

1.Общий характер мазка требует анализа при малом увеличении (10X)

  • Фон слайда, как правило, должен быть грамотрицательным или прозрачным

  • Белые кровяные тельца, если они есть, должны окрашивать грамотрицательные

  • Тонкие кристаллические фиолетовые преципитаты или осадки горечавки не следует путать с грамположительными bacillus бактерии

  • Мазок должен быть толщиной в одну клетку, без перекрытия клеток

2.Следует использовать малое увеличение, чтобы отметить следующее:

  • Относительное количество полиморфноядерных нейтрофилов (PMN), мононуклеарных клеток и эритроцитов (RBC)

  • Относительное количество плоских эпителиальных клеток и нормальных бактерий микробиоты

  • Расположение, расположение и форма организмов

3. Нефтьиммерсионное исследование нескольких месторождений необходимо отметить следующее:

  • Микроорганизмы: если идентифицированы, обратите внимание на номера и морфологию

  • Формы: кокки, палочки, коккобациллы, филаменты и дрожжевые

  • Внешний вид концов: закругленные, конические, вогнутые, булавовидные и уплощенная

  • Внешний вид сторон: параллельные, яйцевидные, неправильные или вогнутые

  • Ось организма: прямая, изогнутая или спиральная

  • Плеоморфизм (изменение формы)

  • Ветвистая или клеточная удлинители

Осложнения

Интерпретация слайдов может быть затруднена, если микроскопический мазок толстый и комковатый.Время обесцвечивания следует тщательно контролировать, чтобы избежать обесцвечивания или чрезмерного обесцвечивания. Более густые мазки требуют более длительного времени обесцвечивания. Точно так же следует проводить оценку еще свежих культур. Старые культуры имеют тенденцию терять клеточные стенки пептидогликана, что предрасполагает грамположительные клетки к грамотрицательным или грамположительным. Окрашивание по Граму бесполезно для организмов без клеточной стенки, таких как виды Mycoplasma , и для более мелких бактерий, таких как виды Chlamydia и Rickettsia .

Окраска по Граму не может ложно выявить микроорганизмы в следующем сценарии:

  • Использование антибиотиков перед взятием образца

  • Несоответствующий возраст посева: слишком молодой или слишком старый

  • Фиксация мазка до его высыхания

  • Мазок слишком толстый

  • Низкая концентрация кристаллического фиолетового

  • Чрезмерная термофиксация

  • Чрезмерная промывка между этапами

  • Недостаточное воздействие йода

  • Длительное обесцвечивание

  • Чрезмерное контрастное окрашивание

  • Опыт

  • и просмотр слайда

Иногда результаты окрашивания по Граму могут не совпадать с окончательными результатами посева и потенциально могут привести к неправильному использованию антибиотиков.[10]

Клиническая значимость

Окраска по Граму часто является первоначальным диагностическим тестом для оценки инфекций. Использование окраски по Граму способствует быстрому применению соответствующих антибиотиков. Однако генетические последовательности и молекулярные методы более специфичны, чем классическое окрашивание по Граму.

Список литературы

1.
BARTHOLOMEW JW, MITTWER T. Окрашивание по Граму. Bacteriol Rev.1952 Март; 16 (1): 1-29. [Бесплатная статья PMC: PMC180726] [PubMed: 14

5]
2.
O’Toole GA. Classic Spotlight: как работает пятно по Граму. J Bacteriol. 2016, 01 декабря; 198 (23): 3128. [Бесплатная статья PMC: PMC5105892] [PubMed: 27815540]
3.
LIBENSON L, McILROY AP. О механизме образования пятен по Граму. J Infect Dis. 1955 июль-август; 97 (1): 22-6. [PubMed: 13242849]
4.
SHUGAR D, BARANOWSKA J. Исследования окраски по Граму; важность белков в реакции Грама. Acta Microbiol Pol (1952). 1954; 3 (1): 11-20. [PubMed: 13147751]
5.
HASLETT AS. Химическое значение теста Грама для бактерий. Aust J Sci. 1947, 21 июня; 9 (6): 211. [PubMed: 20255991]
6.
Попеску А., Дойл Р.Дж. Окраска по Граму спустя более века. Biotech Histochem. 1996 Май; 71 (3): 145-51. [PubMed: 8724440]
7.
МИТТВЕР Т., БАРТОЛОМЬЮ Д.В., КАЛЛМАН Б.Дж. Механизм граммовой реакции. II. Функция йода в пятне по Граму. Stain Technol. 1950 Октябрь; 25 (4): 169-79. [PubMed: 14782050]
8.
Уилсон МЛ. Клинически значимая, экономичная клиническая микробиология. Стратегии уменьшения ненужного тестирования. Am J Clin Pathol. 1997 Февраль; 107 (2): 154-67. [PubMed:
  • 64]
  • 9.
    Beveridge TJ, Davies JA. Клеточные ответы Bacillus subtilis и Escherichia coli на окрашивание по Граму. J Bacteriol. 1983 ноябрь; 156 (2): 846-58. [Бесплатная статья PMC: PMC217903] [PubMed: 6195148]
    10.
    Rand KH, Tillan M. Ошибки в интерпретации окрашивания по Граму из положительных культур крови.Am J Clin Pathol. 2006 ноябрь; 126 (5): 686-90. [PubMed: 17050065]

    Окрашивание по Граму — StatPearls — Книжная полка NCBI

    Введение

    Окрашивание по Граму является одним из наиболее важных методов окрашивания в микробиологии. Он получил свое название от датского бактериолога Ганса Христиана Грэма, который впервые представил его в 1882 году, главным образом для выявления организмов, вызывающих пневмонию. [1] Часто при первом проведенном тесте окрашивание по Граму включает использование кристаллического фиолетового или метиленового синего в качестве основного цвета.[2] Термин для организмов, которые сохраняют основной цвет и кажутся пурпурно-коричневыми под микроскопом, — грамположительные организмы. Организмы, которые не поглощают первичную окраску, под микроскопом выглядят красными и являются грамотрицательными организмами.

    Первым этапом окрашивания по Граму является использование красителя кристаллического фиолетового для первоначального окрашивания предметных стекол. Следующий шаг, также известный как закрепление красителя, включает использование йода для образования кристаллического фиолетово-йодного комплекса для предотвращения легкого удаления красителя. Впоследствии для удаления красителя используется обесцвечивающее средство, часто растворитель этанол и ацетон.Основной принцип окрашивания по Граму заключается в способности стенки бактериальной клетки удерживать краситель кристаллического фиолетового во время обработки растворителем. [3] Грамположительные микроорганизмы имеют более высокое содержание пептидогликана, тогда как грамотрицательные микроорганизмы имеют более высокое содержание липидов. [4]

    Первоначально все бактерии поглощают краситель кристаллический фиолетовый; однако при использовании растворителя липидный слой грамотрицательных организмов растворяется. С растворением липидного слоя грамнегативы теряют первичную окраску.Напротив, растворитель обезвоживает стенки грамположительных клеток с закрытием пор, предотвращая диффузию фиолетово-йодного комплекса, и, таким образом, бактерии остаются окрашенными [5]. Продолжительность обесцвечивания является критическим этапом при окрашивании по Граму, поскольку длительное воздействие обесцвечивающего агента может удалить все пятна от обоих типов бактерий. [6]

    Последним этапом окрашивания по Граму является использование основного красителя фуксина для придания обесцвеченным грамотрицательным бактериям розового цвета для облегчения идентификации. Он также известен как контрастное пятно.Некоторые лаборатории используют сафранин в качестве контрастного красителя; однако основной фуксин окрашивает грамотрицательные организмы более интенсивно, чем сафранин. Аналогично, Hemophilus spp., Legionella app и некоторые анаэробные бактерии плохо окрашиваются сафранином.

    Сбор образцов

    Для окрашивания по Граму можно использовать различные клинические образцы. Некоторые из часто используемых образцов — это мокрота, кровь, спинномозговая жидкость, асцитическая жидкость, синовиальная жидкость, плевральная жидкость, моча и т. Д.Также можно использовать мазки из ноздрей, горла, прямой кишки, раны, шейки матки и т. Д. Сбор образцов всегда должен производиться в стерильных контейнерах.

    Процедуры

    Типы оборудования, необходимого для окрашивания по Граму, включают:

    Реагенты, необходимые для окрашивания по Граму, включают:

    • Кристаллический фиолетовый (первичное окрашивание) [1]
    • Раствор йода по Граму (протрава) [1]
    • Ацетон / этанол (50:50 по объему) (обесцвечивающее средство) [1]
    • 0.1% основной раствор фуксина (контрастный краситель) [1]
    • Вода

    Процедура

    1. Подготовка мазка на предметном стекле:

    • Петля для посева используется для переноса капли суспендированной культуры на предметное стекло микроскопа.

    • Если в чашке Петри или наклонной культуральной пробирке есть колония, добавляют каплю или несколько петель воды, чтобы облегчить перенос минимального количества колонии на предметное стекло.

    • Требуется минимальное количество культуры. Если культура может быть обнаружена визуально на петле посева, это указывает на сбор слишком большого количества культуры.

    • Культуру распределяют с помощью петли для посева до однородной тонкой пленки по кругу диаметром 15 мм. Типичный слайд может содержать до 4 небольших мазков, если исследуется более одной культуры.

    • Предметное стекло можно сушить на воздухе или сушить с помощью тепла на слабом огне.Ползун следует перемещать круговыми движениями над пламенем, чтобы предотвратить перегрев или образование кольцевых узоров на ползуне. Тепло способствует адгезии клеток к предметному стеклу и предотвращает значительную потерю культуры во время ополаскивания.

    2. Окрашивание по Граму:

    • К фиксированной культуре добавляют краситель кристаллического фиолетового.

    • Через 10–60 секунд пятно сливается, а излишки пятна смываются водой. Цель — смыть пятно без потери закрепленной культуры.

    • Раствор йода используется для покрытия мазка на 10-60 секунд. Этот шаг известен как «закрепление красителя». Раствор йода сливают, предметное стекло ополаскивают проточной водой. Лишняя вода с поверхности стряхивается. [7]
    • На предметное стекло добавлено несколько капель обесцвечивающего средства. Обесцвечивающие средства часто представляют собой смешанный растворитель этанола и ацетона. Этот этап известен как «обработка растворителем». Предметное стекло ополаскивают водой в течение 5 секунд. Чтобы предотвратить чрезмерное обесцвечивание грамположительных клеток, прекратите добавлять обесцвечивающее средство, как только растворитель перестанет окрашиваться, когда он течет по предметному стеклу.

    • Мазок окрашивают основным раствором фуксина в течение 40-60 секунд. Раствор фуксина смывается водой, а избыток воды промокается бибулярной бумагой. Слайд также можно сушить на воздухе после стряхивания лишней воды.

    3. Микроскопическое исследование предметного стекла:

    • Предметное стекло необходимо исследовать под микроскопом в масляной иммерсии.

    • При первичном исследовании предметных стекол следует использовать объектив X40 для оценки распределения мазков, а затем их следует исследовать с помощью масляного иммерсионного объектива X100.

    • Все области слайда требуют первичного осмотра. Следует исследовать участки толщиной всего в одну ячейку. Толстые области на слайдах часто дают переменные и неверные результаты.

    • Лейкоциты и макрофаги окрашивают грамотрицательные.

    • Клетки плоского эпителия окрашивают грамположительные.

    Используются различные модификации окрашивания по Граму, такие как окрашивание по Граму Аткин, окрашивание по Граму Берк и т. Д.

    Показания

    Окрашивание по Граму показано при подозрении на бактериальную инфекцию для легкой и ранней диагностики.[8]

    Возможный диагноз

    Окрашивание по Граму помогает в диагностике заболевания или патологического состояния.

    Примеры грамположительных организмов:

    • Кокки: Staphylococcus видов и Streptococcus видов

    • Bacilli: Corynebacterium видов, Clostridium видов и Listeria видов

    • Примеры грамотрицательных организмов. :
    • Кокки: Neisseria gonorrheae, Neisseria meningitidis, и Moraxella видов

    • Бациллы: Спирали Escherichia, виды Pseudomonas , Proteus видов и видов клебсиелл

      000

      грабсиеллы и видов клебсиелл. К вариабельным организмам относятся:

    • Actinomyces видов

    Нормальные и критические результаты

    Нормальным признаком стерильной биологической жидкости должно быть отсутствие каких-либо патологических микроорганизмов в мазке.Организмы идентифицируются по цвету и форме. Грамположительные организмы имеют фиолетовый или синий цвет, а грамотрицательные — розовый или красный цвет. Бациллы палочковидные, а кокки сферические.

    Результаты окрашивания по Граму, указывающие на основные бактериальные инфекции:

    • Грамположительные кокки в скоплениях: Обычно характерны для видов Staphylococcus , таких как S. aureus.

    • Грамположительные кокки в цепочках: Обычно характерны для видов Streptococcus , таких как S.pneumoniae, стрептококки группы В

    • Грамположительные кокки в тетрадках: Обычно характерны для Micrococcus spp.

    • Грамположительные бациллы, толстые: Обычно характерны для Clostridium spp., Таких как C. perfringes , C. septicum .

    • Грамположительные бациллы, тонкие: Обычно характерны для Listeria spp.

    • Разветвленные грамположительные палочки: обычно характерны для Actinomyces и Nocardia .

    • Грамотрицательные диплококки: Обычно характерны для видов Neisseria , таких как N. meningitidis .

    (Обратите внимание: виды Moraxella и Acinetobacter spp., Часто являются диплококками по морфологии. Иногда Acinetobacter могут проявляться как грамположительные кокки, а могут быть плеоморфными.

    • Coccobacilli : Обычно характерен для Acinetobacter spp., И они могут быть грамположительными, грамотрицательными или грамположительными.

    • Грамотрицательные бациллы, тонкие: обычно характерны для Enterobacteriaceae , таких как E. coli .

    • Коккобациллы: Обычно характерны для видов Hemophilus , таких как H. influenzae .

    • Изогнутый: Обычно характерен для Vibrio spp.,; Campylobacter spp., Например V. cholerae и C. jejuni .

    • Форма тонкой иглы: Обычно характерна для Fusobacterium spp.

    Организмы с грамотрицательными изменениями: эти организмы не подразделяются ни на грамположительные, ни на грамотрицательные.

    Мешающие факторы

    Если образец не является стерильным, образец может быть заражен множеством организмов. Точно так же неправильный сбор образцов и предварительное использование антибиотиков могут помешать росту организмов. Во время интерпретации окраски по Граму, как описано Всемирной организацией здравоохранения в 2003 году, необходимо выполнить следующие шаги:

    1.Общий характер мазка требует анализа при малом увеличении (10X)

    • Фон слайда, как правило, должен быть грамотрицательным или прозрачным

    • Белые кровяные тельца, если они есть, должны окрашивать грамотрицательные

    • Тонкие кристаллические фиолетовые преципитаты или осадки горечавки не следует путать с грамположительными bacillus бактерии

    • Мазок должен быть толщиной в одну клетку, без перекрытия клеток

    2.Следует использовать малое увеличение, чтобы отметить следующее:

    • Относительное количество полиморфноядерных нейтрофилов (PMN), мононуклеарных клеток и эритроцитов (RBC)

    • Относительное количество плоских эпителиальных клеток и нормальных бактерий микробиоты

    • Расположение, расположение и форма организмов

    3. Нефтьиммерсионное исследование нескольких месторождений необходимо отметить следующее:

    • Микроорганизмы: если идентифицированы, обратите внимание на номера и морфологию

    • Формы: кокки, палочки, коккобациллы, филаменты и дрожжевые

    • Внешний вид концов: закругленные, конические, вогнутые, булавовидные и уплощенная

    • Внешний вид сторон: параллельные, яйцевидные, неправильные или вогнутые

    • Ось организма: прямая, изогнутая или спиральная

    • Плеоморфизм (изменение формы)

    • Ветвистая или клеточная удлинители

    Осложнения

    Интерпретация слайдов может быть затруднена, если микроскопический мазок толстый и комковатый.Время обесцвечивания следует тщательно контролировать, чтобы избежать обесцвечивания или чрезмерного обесцвечивания. Более густые мазки требуют более длительного времени обесцвечивания. Точно так же следует проводить оценку еще свежих культур. Старые культуры имеют тенденцию терять клеточные стенки пептидогликана, что предрасполагает грамположительные клетки к грамотрицательным или грамположительным. Окрашивание по Граму бесполезно для организмов без клеточной стенки, таких как виды Mycoplasma , и для более мелких бактерий, таких как виды Chlamydia и Rickettsia .

    Окраска по Граму не может ложно выявить микроорганизмы в следующем сценарии:

    • Использование антибиотиков перед взятием образца

    • Несоответствующий возраст посева: слишком молодой или слишком старый

    • Фиксация мазка до его высыхания

    • Мазок слишком толстый

    • Низкая концентрация кристаллического фиолетового

    • Чрезмерная термофиксация

    • Чрезмерная промывка между этапами

    • Недостаточное воздействие йода

    • Длительное обесцвечивание

    • Чрезмерное контрастное окрашивание

    • Опыт

    • и просмотр слайда

    Иногда результаты окрашивания по Граму могут не совпадать с окончательными результатами посева и потенциально могут привести к неправильному использованию антибиотиков.[10]

    Клиническая значимость

    Окраска по Граму часто является первоначальным диагностическим тестом для оценки инфекций. Использование окраски по Граму способствует быстрому применению соответствующих антибиотиков. Однако генетические последовательности и молекулярные методы более специфичны, чем классическое окрашивание по Граму.

    Список литературы

    1.
    BARTHOLOMEW JW, MITTWER T. Окрашивание по Граму. Bacteriol Rev.1952 Март; 16 (1): 1-29. [Бесплатная статья PMC: PMC180726] [PubMed: 14

    5]
    2.
    O’Toole GA. Classic Spotlight: как работает пятно по Граму. J Bacteriol. 2016, 01 декабря; 198 (23): 3128. [Бесплатная статья PMC: PMC5105892] [PubMed: 27815540]
    3.
    LIBENSON L, McILROY AP. О механизме образования пятен по Граму. J Infect Dis. 1955 июль-август; 97 (1): 22-6. [PubMed: 13242849]
    4.
    SHUGAR D, BARANOWSKA J. Исследования окраски по Граму; важность белков в реакции Грама. Acta Microbiol Pol (1952). 1954; 3 (1): 11-20. [PubMed: 13147751]
    5.
    HASLETT AS. Химическое значение теста Грама для бактерий. Aust J Sci. 1947, 21 июня; 9 (6): 211. [PubMed: 20255991]
    6.
    Попеску А., Дойл Р.Дж. Окраска по Граму спустя более века. Biotech Histochem. 1996 Май; 71 (3): 145-51. [PubMed: 8724440]
    7.
    МИТТВЕР Т., БАРТОЛОМЬЮ Д.В., КАЛЛМАН Б.Дж. Механизм граммовой реакции. II. Функция йода в пятне по Граму. Stain Technol. 1950 Октябрь; 25 (4): 169-79. [PubMed: 14782050]
    8.
    Уилсон МЛ. Клинически значимая, экономичная клиническая микробиология. Стратегии уменьшения ненужного тестирования. Am J Clin Pathol. 1997 Февраль; 107 (2): 154-67. [PubMed:
  • 64]
  • 9.
    Beveridge TJ, Davies JA. Клеточные ответы Bacillus subtilis и Escherichia coli на окрашивание по Граму. J Bacteriol. 1983 ноябрь; 156 (2): 846-58. [Бесплатная статья PMC: PMC217903] [PubMed: 6195148]
    10.
    Rand KH, Tillan M. Ошибки в интерпретации окрашивания по Граму из положительных культур крови.Am J Clin Pathol. 2006 ноябрь; 126 (5): 686-90. [PubMed: 17050065]

    Окрашивание по Граму — StatPearls — Книжная полка NCBI

    Введение

    Окрашивание по Граму является одним из наиболее важных методов окрашивания в микробиологии. Он получил свое название от датского бактериолога Ганса Христиана Грэма, который впервые представил его в 1882 году, главным образом для выявления организмов, вызывающих пневмонию. [1] Часто при первом проведенном тесте окрашивание по Граму включает использование кристаллического фиолетового или метиленового синего в качестве основного цвета.[2] Термин для организмов, которые сохраняют основной цвет и кажутся пурпурно-коричневыми под микроскопом, — грамположительные организмы. Организмы, которые не поглощают первичную окраску, под микроскопом выглядят красными и являются грамотрицательными организмами.

    Первым этапом окрашивания по Граму является использование красителя кристаллического фиолетового для первоначального окрашивания предметных стекол. Следующий шаг, также известный как закрепление красителя, включает использование йода для образования кристаллического фиолетово-йодного комплекса для предотвращения легкого удаления красителя. Впоследствии для удаления красителя используется обесцвечивающее средство, часто растворитель этанол и ацетон.Основной принцип окрашивания по Граму заключается в способности стенки бактериальной клетки удерживать краситель кристаллического фиолетового во время обработки растворителем. [3] Грамположительные микроорганизмы имеют более высокое содержание пептидогликана, тогда как грамотрицательные микроорганизмы имеют более высокое содержание липидов. [4]

    Первоначально все бактерии поглощают краситель кристаллический фиолетовый; однако при использовании растворителя липидный слой грамотрицательных организмов растворяется. С растворением липидного слоя грамнегативы теряют первичную окраску.Напротив, растворитель обезвоживает стенки грамположительных клеток с закрытием пор, предотвращая диффузию фиолетово-йодного комплекса, и, таким образом, бактерии остаются окрашенными [5]. Продолжительность обесцвечивания является критическим этапом при окрашивании по Граму, поскольку длительное воздействие обесцвечивающего агента может удалить все пятна от обоих типов бактерий. [6]

    Последним этапом окрашивания по Граму является использование основного красителя фуксина для придания обесцвеченным грамотрицательным бактериям розового цвета для облегчения идентификации. Он также известен как контрастное пятно.Некоторые лаборатории используют сафранин в качестве контрастного красителя; однако основной фуксин окрашивает грамотрицательные организмы более интенсивно, чем сафранин. Аналогично, Hemophilus spp., Legionella app и некоторые анаэробные бактерии плохо окрашиваются сафранином.

    Сбор образцов

    Для окрашивания по Граму можно использовать различные клинические образцы. Некоторые из часто используемых образцов — это мокрота, кровь, спинномозговая жидкость, асцитическая жидкость, синовиальная жидкость, плевральная жидкость, моча и т. Д.Также можно использовать мазки из ноздрей, горла, прямой кишки, раны, шейки матки и т. Д. Сбор образцов всегда должен производиться в стерильных контейнерах.

    Процедуры

    Типы оборудования, необходимого для окрашивания по Граму, включают:

    Реагенты, необходимые для окрашивания по Граму, включают:

    • Кристаллический фиолетовый (первичное окрашивание) [1]
    • Раствор йода по Граму (протрава) [1]
    • Ацетон / этанол (50:50 по объему) (обесцвечивающее средство) [1]
    • 0.1% основной раствор фуксина (контрастный краситель) [1]
    • Вода

    Процедура

    1. Подготовка мазка на предметном стекле:

    • Петля для посева используется для переноса капли суспендированной культуры на предметное стекло микроскопа.

    • Если в чашке Петри или наклонной культуральной пробирке есть колония, добавляют каплю или несколько петель воды, чтобы облегчить перенос минимального количества колонии на предметное стекло.

    • Требуется минимальное количество культуры. Если культура может быть обнаружена визуально на петле посева, это указывает на сбор слишком большого количества культуры.

    • Культуру распределяют с помощью петли для посева до однородной тонкой пленки по кругу диаметром 15 мм. Типичный слайд может содержать до 4 небольших мазков, если исследуется более одной культуры.

    • Предметное стекло можно сушить на воздухе или сушить с помощью тепла на слабом огне.Ползун следует перемещать круговыми движениями над пламенем, чтобы предотвратить перегрев или образование кольцевых узоров на ползуне. Тепло способствует адгезии клеток к предметному стеклу и предотвращает значительную потерю культуры во время ополаскивания.

    2. Окрашивание по Граму:

    • К фиксированной культуре добавляют краситель кристаллического фиолетового.

    • Через 10–60 секунд пятно сливается, а излишки пятна смываются водой. Цель — смыть пятно без потери закрепленной культуры.

    • Раствор йода используется для покрытия мазка на 10-60 секунд. Этот шаг известен как «закрепление красителя». Раствор йода сливают, предметное стекло ополаскивают проточной водой. Лишняя вода с поверхности стряхивается. [7]
    • На предметное стекло добавлено несколько капель обесцвечивающего средства. Обесцвечивающие средства часто представляют собой смешанный растворитель этанола и ацетона. Этот этап известен как «обработка растворителем». Предметное стекло ополаскивают водой в течение 5 секунд. Чтобы предотвратить чрезмерное обесцвечивание грамположительных клеток, прекратите добавлять обесцвечивающее средство, как только растворитель перестанет окрашиваться, когда он течет по предметному стеклу.

    • Мазок окрашивают основным раствором фуксина в течение 40-60 секунд. Раствор фуксина смывается водой, а избыток воды промокается бибулярной бумагой. Слайд также можно сушить на воздухе после стряхивания лишней воды.

    3. Микроскопическое исследование предметного стекла:

    • Предметное стекло необходимо исследовать под микроскопом в масляной иммерсии.

    • При первичном исследовании предметных стекол следует использовать объектив X40 для оценки распределения мазков, а затем их следует исследовать с помощью масляного иммерсионного объектива X100.

    • Все области слайда требуют первичного осмотра. Следует исследовать участки толщиной всего в одну ячейку. Толстые области на слайдах часто дают переменные и неверные результаты.

    • Лейкоциты и макрофаги окрашивают грамотрицательные.

    • Клетки плоского эпителия окрашивают грамположительные.

    Используются различные модификации окрашивания по Граму, такие как окрашивание по Граму Аткин, окрашивание по Граму Берк и т. Д.

    Показания

    Окрашивание по Граму показано при подозрении на бактериальную инфекцию для легкой и ранней диагностики.[8]

    Возможный диагноз

    Окрашивание по Граму помогает в диагностике заболевания или патологического состояния.

    Примеры грамположительных организмов:

    • Кокки: Staphylococcus видов и Streptococcus видов

    • Bacilli: Corynebacterium видов, Clostridium видов и Listeria видов

    • Примеры грамотрицательных организмов. :
    • Кокки: Neisseria gonorrheae, Neisseria meningitidis, и Moraxella видов

    • Бациллы: Спирали Escherichia, виды Pseudomonas , Proteus видов и видов клебсиелл

      000

      грабсиеллы и видов клебсиелл. К вариабельным организмам относятся:

    • Actinomyces видов

    Нормальные и критические результаты

    Нормальным признаком стерильной биологической жидкости должно быть отсутствие каких-либо патологических микроорганизмов в мазке.Организмы идентифицируются по цвету и форме. Грамположительные организмы имеют фиолетовый или синий цвет, а грамотрицательные — розовый или красный цвет. Бациллы палочковидные, а кокки сферические.

    Результаты окрашивания по Граму, указывающие на основные бактериальные инфекции:

    • Грамположительные кокки в скоплениях: Обычно характерны для видов Staphylococcus , таких как S. aureus.

    • Грамположительные кокки в цепочках: Обычно характерны для видов Streptococcus , таких как S.pneumoniae, стрептококки группы В

    • Грамположительные кокки в тетрадках: Обычно характерны для Micrococcus spp.

    • Грамположительные бациллы, толстые: Обычно характерны для Clostridium spp., Таких как C. perfringes , C. septicum .

    • Грамположительные бациллы, тонкие: Обычно характерны для Listeria spp.

    • Разветвленные грамположительные палочки: обычно характерны для Actinomyces и Nocardia .

    • Грамотрицательные диплококки: Обычно характерны для видов Neisseria , таких как N. meningitidis .

    (Обратите внимание: виды Moraxella и Acinetobacter spp., Часто являются диплококками по морфологии. Иногда Acinetobacter могут проявляться как грамположительные кокки, а могут быть плеоморфными.

    • Coccobacilli : Обычно характерен для Acinetobacter spp., И они могут быть грамположительными, грамотрицательными или грамположительными.

    • Грамотрицательные бациллы, тонкие: обычно характерны для Enterobacteriaceae , таких как E. coli .

    • Коккобациллы: Обычно характерны для видов Hemophilus , таких как H. influenzae .

    • Изогнутый: Обычно характерен для Vibrio spp.,; Campylobacter spp., Например V. cholerae и C. jejuni .

    • Форма тонкой иглы: Обычно характерна для Fusobacterium spp.

    Организмы с грамотрицательными изменениями: эти организмы не подразделяются ни на грамположительные, ни на грамотрицательные.

    Мешающие факторы

    Если образец не является стерильным, образец может быть заражен множеством организмов. Точно так же неправильный сбор образцов и предварительное использование антибиотиков могут помешать росту организмов. Во время интерпретации окраски по Граму, как описано Всемирной организацией здравоохранения в 2003 году, необходимо выполнить следующие шаги:

    1.Общий характер мазка требует анализа при малом увеличении (10X)

    • Фон слайда, как правило, должен быть грамотрицательным или прозрачным

    • Белые кровяные тельца, если они есть, должны окрашивать грамотрицательные

    • Тонкие кристаллические фиолетовые преципитаты или осадки горечавки не следует путать с грамположительными bacillus бактерии

    • Мазок должен быть толщиной в одну клетку, без перекрытия клеток

    2.Следует использовать малое увеличение, чтобы отметить следующее:

    • Относительное количество полиморфноядерных нейтрофилов (PMN), мононуклеарных клеток и эритроцитов (RBC)

    • Относительное количество плоских эпителиальных клеток и нормальных бактерий микробиоты

    • Расположение, расположение и форма организмов

    3. Нефтьиммерсионное исследование нескольких месторождений необходимо отметить следующее:

    • Микроорганизмы: если идентифицированы, обратите внимание на номера и морфологию

    • Формы: кокки, палочки, коккобациллы, филаменты и дрожжевые

    • Внешний вид концов: закругленные, конические, вогнутые, булавовидные и уплощенная

    • Внешний вид сторон: параллельные, яйцевидные, неправильные или вогнутые

    • Ось организма: прямая, изогнутая или спиральная

    • Плеоморфизм (изменение формы)

    • Ветвистая или клеточная удлинители

    Осложнения

    Интерпретация слайдов может быть затруднена, если микроскопический мазок толстый и комковатый.Время обесцвечивания следует тщательно контролировать, чтобы избежать обесцвечивания или чрезмерного обесцвечивания. Более густые мазки требуют более длительного времени обесцвечивания. Точно так же следует проводить оценку еще свежих культур. Старые культуры имеют тенденцию терять клеточные стенки пептидогликана, что предрасполагает грамположительные клетки к грамотрицательным или грамположительным. Окрашивание по Граму бесполезно для организмов без клеточной стенки, таких как виды Mycoplasma , и для более мелких бактерий, таких как виды Chlamydia и Rickettsia .

    Окраска по Граму не может ложно выявить микроорганизмы в следующем сценарии:

    • Использование антибиотиков перед взятием образца

    • Несоответствующий возраст посева: слишком молодой или слишком старый

    • Фиксация мазка до его высыхания

    • Мазок слишком толстый

    • Низкая концентрация кристаллического фиолетового

    • Чрезмерная термофиксация

    • Чрезмерная промывка между этапами

    • Недостаточное воздействие йода

    • Длительное обесцвечивание

    • Чрезмерное контрастное окрашивание

    • Опыт

    • и просмотр слайда

    Иногда результаты окрашивания по Граму могут не совпадать с окончательными результатами посева и потенциально могут привести к неправильному использованию антибиотиков.[10]

    Клиническая значимость

    Окраска по Граму часто является первоначальным диагностическим тестом для оценки инфекций. Использование окраски по Граму способствует быстрому применению соответствующих антибиотиков. Однако генетические последовательности и молекулярные методы более специфичны, чем классическое окрашивание по Граму.

    Список литературы

    1.
    BARTHOLOMEW JW, MITTWER T. Окрашивание по Граму. Bacteriol Rev.1952 Март; 16 (1): 1-29. [Бесплатная статья PMC: PMC180726] [PubMed: 14

    5]
    2.
    O’Toole GA. Classic Spotlight: как работает пятно по Граму. J Bacteriol. 2016, 01 декабря; 198 (23): 3128. [Бесплатная статья PMC: PMC5105892] [PubMed: 27815540]
    3.
    LIBENSON L, McILROY AP. О механизме образования пятен по Граму. J Infect Dis. 1955 июль-август; 97 (1): 22-6. [PubMed: 13242849]
    4.
    SHUGAR D, BARANOWSKA J. Исследования окраски по Граму; важность белков в реакции Грама. Acta Microbiol Pol (1952). 1954; 3 (1): 11-20. [PubMed: 13147751]
    5.
    HASLETT AS. Химическое значение теста Грама для бактерий. Aust J Sci. 1947, 21 июня; 9 (6): 211. [PubMed: 20255991]
    6.
    Попеску А., Дойл Р.Дж. Окраска по Граму спустя более века. Biotech Histochem. 1996 Май; 71 (3): 145-51. [PubMed: 8724440]
    7.
    МИТТВЕР Т., БАРТОЛОМЬЮ Д.В., КАЛЛМАН Б.Дж. Механизм граммовой реакции. II. Функция йода в пятне по Граму. Stain Technol. 1950 Октябрь; 25 (4): 169-79. [PubMed: 14782050]
    8.
    Уилсон МЛ. Клинически значимая, экономичная клиническая микробиология. Стратегии уменьшения ненужного тестирования. Am J Clin Pathol. 1997 Февраль; 107 (2): 154-67. [PubMed:
  • 64]
  • 9.
    Beveridge TJ, Davies JA. Клеточные ответы Bacillus subtilis и Escherichia coli на окрашивание по Граму. J Bacteriol. 1983 ноябрь; 156 (2): 846-58. [Бесплатная статья PMC: PMC217903] [PubMed: 6195148]
    10.
    Rand KH, Tillan M. Ошибки в интерпретации окрашивания по Граму из положительных культур крови.Am J Clin Pathol. 2006 ноябрь; 126 (5): 686-90. [PubMed: 17050065]

    Окрашивание по Граму — StatPearls — Книжная полка NCBI

    Введение

    Окрашивание по Граму является одним из наиболее важных методов окрашивания в микробиологии. Он получил свое название от датского бактериолога Ганса Христиана Грэма, который впервые представил его в 1882 году, главным образом для выявления организмов, вызывающих пневмонию. [1] Часто при первом проведенном тесте окрашивание по Граму включает использование кристаллического фиолетового или метиленового синего в качестве основного цвета.[2] Термин для организмов, которые сохраняют основной цвет и кажутся пурпурно-коричневыми под микроскопом, — грамположительные организмы. Организмы, которые не поглощают первичную окраску, под микроскопом выглядят красными и являются грамотрицательными организмами.

    Первым этапом окрашивания по Граму является использование красителя кристаллического фиолетового для первоначального окрашивания предметных стекол. Следующий шаг, также известный как закрепление красителя, включает использование йода для образования кристаллического фиолетово-йодного комплекса для предотвращения легкого удаления красителя. Впоследствии для удаления красителя используется обесцвечивающее средство, часто растворитель этанол и ацетон.Основной принцип окрашивания по Граму заключается в способности стенки бактериальной клетки удерживать краситель кристаллического фиолетового во время обработки растворителем. [3] Грамположительные микроорганизмы имеют более высокое содержание пептидогликана, тогда как грамотрицательные микроорганизмы имеют более высокое содержание липидов. [4]

    Первоначально все бактерии поглощают краситель кристаллический фиолетовый; однако при использовании растворителя липидный слой грамотрицательных организмов растворяется. С растворением липидного слоя грамнегативы теряют первичную окраску.Напротив, растворитель обезвоживает стенки грамположительных клеток с закрытием пор, предотвращая диффузию фиолетово-йодного комплекса, и, таким образом, бактерии остаются окрашенными [5]. Продолжительность обесцвечивания является критическим этапом при окрашивании по Граму, поскольку длительное воздействие обесцвечивающего агента может удалить все пятна от обоих типов бактерий. [6]

    Последним этапом окрашивания по Граму является использование основного красителя фуксина для придания обесцвеченным грамотрицательным бактериям розового цвета для облегчения идентификации. Он также известен как контрастное пятно.Некоторые лаборатории используют сафранин в качестве контрастного красителя; однако основной фуксин окрашивает грамотрицательные организмы более интенсивно, чем сафранин. Аналогично, Hemophilus spp., Legionella app и некоторые анаэробные бактерии плохо окрашиваются сафранином.

    Сбор образцов

    Для окрашивания по Граму можно использовать различные клинические образцы. Некоторые из часто используемых образцов — это мокрота, кровь, спинномозговая жидкость, асцитическая жидкость, синовиальная жидкость, плевральная жидкость, моча и т. Д.Также можно использовать мазки из ноздрей, горла, прямой кишки, раны, шейки матки и т. Д. Сбор образцов всегда должен производиться в стерильных контейнерах.

    Процедуры

    Типы оборудования, необходимого для окрашивания по Граму, включают:

    Реагенты, необходимые для окрашивания по Граму, включают:

    • Кристаллический фиолетовый (первичное окрашивание) [1]
    • Раствор йода по Граму (протрава) [1]
    • Ацетон / этанол (50:50 по объему) (обесцвечивающее средство) [1]
    • 0.1% основной раствор фуксина (контрастный краситель) [1]
    • Вода

    Процедура

    1. Подготовка мазка на предметном стекле:

    • Петля для посева используется для переноса капли суспендированной культуры на предметное стекло микроскопа.

    • Если в чашке Петри или наклонной культуральной пробирке есть колония, добавляют каплю или несколько петель воды, чтобы облегчить перенос минимального количества колонии на предметное стекло.

    • Требуется минимальное количество культуры. Если культура может быть обнаружена визуально на петле посева, это указывает на сбор слишком большого количества культуры.

    • Культуру распределяют с помощью петли для посева до однородной тонкой пленки по кругу диаметром 15 мм. Типичный слайд может содержать до 4 небольших мазков, если исследуется более одной культуры.

    • Предметное стекло можно сушить на воздухе или сушить с помощью тепла на слабом огне.Ползун следует перемещать круговыми движениями над пламенем, чтобы предотвратить перегрев или образование кольцевых узоров на ползуне. Тепло способствует адгезии клеток к предметному стеклу и предотвращает значительную потерю культуры во время ополаскивания.

    2. Окрашивание по Граму:

    • К фиксированной культуре добавляют краситель кристаллического фиолетового.

    • Через 10–60 секунд пятно сливается, а излишки пятна смываются водой. Цель — смыть пятно без потери закрепленной культуры.

    • Раствор йода используется для покрытия мазка на 10-60 секунд. Этот шаг известен как «закрепление красителя». Раствор йода сливают, предметное стекло ополаскивают проточной водой. Лишняя вода с поверхности стряхивается. [7]
    • На предметное стекло добавлено несколько капель обесцвечивающего средства. Обесцвечивающие средства часто представляют собой смешанный растворитель этанола и ацетона. Этот этап известен как «обработка растворителем». Предметное стекло ополаскивают водой в течение 5 секунд. Чтобы предотвратить чрезмерное обесцвечивание грамположительных клеток, прекратите добавлять обесцвечивающее средство, как только растворитель перестанет окрашиваться, когда он течет по предметному стеклу.

    • Мазок окрашивают основным раствором фуксина в течение 40-60 секунд. Раствор фуксина смывается водой, а избыток воды промокается бибулярной бумагой. Слайд также можно сушить на воздухе после стряхивания лишней воды.

    3. Микроскопическое исследование предметного стекла:

    • Предметное стекло необходимо исследовать под микроскопом в масляной иммерсии.

    • При первичном исследовании предметных стекол следует использовать объектив X40 для оценки распределения мазков, а затем их следует исследовать с помощью масляного иммерсионного объектива X100.

    • Все области слайда требуют первичного осмотра. Следует исследовать участки толщиной всего в одну ячейку. Толстые области на слайдах часто дают переменные и неверные результаты.

    • Лейкоциты и макрофаги окрашивают грамотрицательные.

    • Клетки плоского эпителия окрашивают грамположительные.

    Используются различные модификации окрашивания по Граму, такие как окрашивание по Граму Аткин, окрашивание по Граму Берк и т. Д.

    Показания

    Окрашивание по Граму показано при подозрении на бактериальную инфекцию для легкой и ранней диагностики.[8]

    Возможный диагноз

    Окрашивание по Граму помогает в диагностике заболевания или патологического состояния.

    Примеры грамположительных организмов:

    • Кокки: Staphylococcus видов и Streptococcus видов

    • Bacilli: Corynebacterium видов, Clostridium видов и Listeria видов

    • Примеры грамотрицательных организмов. :
    • Кокки: Neisseria gonorrheae, Neisseria meningitidis, и Moraxella видов

    • Бациллы: Спирали Escherichia, виды Pseudomonas , Proteus видов и видов клебсиелл

      000

      грабсиеллы и видов клебсиелл. К вариабельным организмам относятся:

    • Actinomyces видов

    Нормальные и критические результаты

    Нормальным признаком стерильной биологической жидкости должно быть отсутствие каких-либо патологических микроорганизмов в мазке.Организмы идентифицируются по цвету и форме. Грамположительные организмы имеют фиолетовый или синий цвет, а грамотрицательные — розовый или красный цвет. Бациллы палочковидные, а кокки сферические.

    Результаты окрашивания по Граму, указывающие на основные бактериальные инфекции:

    • Грамположительные кокки в скоплениях: Обычно характерны для видов Staphylococcus , таких как S. aureus.

    • Грамположительные кокки в цепочках: Обычно характерны для видов Streptococcus , таких как S.pneumoniae, стрептококки группы В

    • Грамположительные кокки в тетрадках: Обычно характерны для Micrococcus spp.

    • Грамположительные бациллы, толстые: Обычно характерны для Clostridium spp., Таких как C. perfringes , C. septicum .

    • Грамположительные бациллы, тонкие: Обычно характерны для Listeria spp.

    • Разветвленные грамположительные палочки: обычно характерны для Actinomyces и Nocardia .

    • Грамотрицательные диплококки: Обычно характерны для видов Neisseria , таких как N. meningitidis .

    (Обратите внимание: виды Moraxella и Acinetobacter spp., Часто являются диплококками по морфологии. Иногда Acinetobacter могут проявляться как грамположительные кокки, а могут быть плеоморфными.

    • Coccobacilli : Обычно характерен для Acinetobacter spp., И они могут быть грамположительными, грамотрицательными или грамположительными.

    • Грамотрицательные бациллы, тонкие: обычно характерны для Enterobacteriaceae , таких как E. coli .

    • Коккобациллы: Обычно характерны для видов Hemophilus , таких как H. influenzae .

    • Изогнутый: Обычно характерен для Vibrio spp.,; Campylobacter spp., Например V. cholerae и C. jejuni .

    • Форма тонкой иглы: Обычно характерна для Fusobacterium spp.

    Организмы с грамотрицательными изменениями: эти организмы не подразделяются ни на грамположительные, ни на грамотрицательные.

    Мешающие факторы

    Если образец не является стерильным, образец может быть заражен множеством организмов. Точно так же неправильный сбор образцов и предварительное использование антибиотиков могут помешать росту организмов. Во время интерпретации окраски по Граму, как описано Всемирной организацией здравоохранения в 2003 году, необходимо выполнить следующие шаги:

    1.Общий характер мазка требует анализа при малом увеличении (10X)

    • Фон слайда, как правило, должен быть грамотрицательным или прозрачным

    • Белые кровяные тельца, если они есть, должны окрашивать грамотрицательные

    • Тонкие кристаллические фиолетовые преципитаты или осадки горечавки не следует путать с грамположительными bacillus бактерии

    • Мазок должен быть толщиной в одну клетку, без перекрытия клеток

    2.Следует использовать малое увеличение, чтобы отметить следующее:

    • Относительное количество полиморфноядерных нейтрофилов (PMN), мононуклеарных клеток и эритроцитов (RBC)

    • Относительное количество плоских эпителиальных клеток и нормальных бактерий микробиоты

    • Расположение, расположение и форма организмов

    3. Нефтьиммерсионное исследование нескольких месторождений необходимо отметить следующее:

    • Микроорганизмы: если идентифицированы, обратите внимание на номера и морфологию

    • Формы: кокки, палочки, коккобациллы, филаменты и дрожжевые

    • Внешний вид концов: закругленные, конические, вогнутые, булавовидные и уплощенная

    • Внешний вид сторон: параллельные, яйцевидные, неправильные или вогнутые

    • Ось организма: прямая, изогнутая или спиральная

    • Плеоморфизм (изменение формы)

    • Ветвистая или клеточная удлинители

    Осложнения

    Интерпретация слайдов может быть затруднена, если микроскопический мазок толстый и комковатый.Время обесцвечивания следует тщательно контролировать, чтобы избежать обесцвечивания или чрезмерного обесцвечивания. Более густые мазки требуют более длительного времени обесцвечивания. Точно так же следует проводить оценку еще свежих культур. Старые культуры имеют тенденцию терять клеточные стенки пептидогликана, что предрасполагает грамположительные клетки к грамотрицательным или грамположительным. Окрашивание по Граму бесполезно для организмов без клеточной стенки, таких как виды Mycoplasma , и для более мелких бактерий, таких как виды Chlamydia и Rickettsia .

    Окраска по Граму не может ложно выявить микроорганизмы в следующем сценарии:

    • Использование антибиотиков перед взятием образца

    • Несоответствующий возраст посева: слишком молодой или слишком старый

    • Фиксация мазка до его высыхания

    • Мазок слишком толстый

    • Низкая концентрация кристаллического фиолетового

    • Чрезмерная термофиксация

    • Чрезмерная промывка между этапами

    • Недостаточное воздействие йода

    • Длительное обесцвечивание

    • Чрезмерное контрастное окрашивание

    • Опыт

    • и просмотр слайда

    Иногда результаты окрашивания по Граму могут не совпадать с окончательными результатами посева и потенциально могут привести к неправильному использованию антибиотиков.[10]

    Клиническая значимость

    Окраска по Граму часто является первоначальным диагностическим тестом для оценки инфекций. Использование окраски по Граму способствует быстрому применению соответствующих антибиотиков. Однако генетические последовательности и молекулярные методы более специфичны, чем классическое окрашивание по Граму.

    Список литературы

    1.
    BARTHOLOMEW JW, MITTWER T. Окрашивание по Граму. Bacteriol Rev.1952 Март; 16 (1): 1-29. [Бесплатная статья PMC: PMC180726] [PubMed: 14

    5]
    2.
    O’Toole GA. Classic Spotlight: как работает пятно по Граму. J Bacteriol. 2016, 01 декабря; 198 (23): 3128. [Бесплатная статья PMC: PMC5105892] [PubMed: 27815540]
    3.
    LIBENSON L, McILROY AP. О механизме образования пятен по Граму. J Infect Dis. 1955 июль-август; 97 (1): 22-6. [PubMed: 13242849]
    4.
    SHUGAR D, BARANOWSKA J. Исследования окраски по Граму; важность белков в реакции Грама. Acta Microbiol Pol (1952). 1954; 3 (1): 11-20. [PubMed: 13147751]
    5.
    HASLETT AS. Химическое значение теста Грама для бактерий. Aust J Sci. 1947, 21 июня; 9 (6): 211. [PubMed: 20255991]
    6.
    Попеску А., Дойл Р.Дж. Окраска по Граму спустя более века. Biotech Histochem. 1996 Май; 71 (3): 145-51. [PubMed: 8724440]
    7.
    МИТТВЕР Т., БАРТОЛОМЬЮ Д.В., КАЛЛМАН Б.Дж. Механизм граммовой реакции. II. Функция йода в пятне по Граму. Stain Technol. 1950 Октябрь; 25 (4): 169-79. [PubMed: 14782050]
    8.
    Уилсон МЛ. Клинически значимая, экономичная клиническая микробиология. Стратегии уменьшения ненужного тестирования. Am J Clin Pathol. 1997 Февраль; 107 (2): 154-67. [PubMed:
  • 64]
  • 9.
    Beveridge TJ, Davies JA. Клеточные ответы Bacillus subtilis и Escherichia coli на окрашивание по Граму. J Bacteriol. 1983 ноябрь; 156 (2): 846-58. [Бесплатная статья PMC: PMC217903] [PubMed: 6195148]
    10.
    Rand KH, Tillan M. Ошибки в интерпретации окрашивания по Граму из положительных культур крови.Am J Clin Pathol. 2006 ноябрь; 126 (5): 686-90. [PubMed: 17050065]

    Часто задаваемые вопросы по методам бактериального окрашивания @ www.microrao.com

    Как классифицируются методы окрашивания?
    • Простая окраска: используется только одна окраска и все бактерии окрашиваются одинаково. Например: метиленовый синий, разбавленный карбол фуксин
    • Дифференциальное окрашивание: разные бактерии окрашивают по-разному, чем обычная техника окрашивания, в зависимости от их физиологических свойств. Например: окрашивание по Граму и кислотостойкое окрашивание
    • .
    • Специальная окраска: где видны структуры бактерий, такие как споры, гранулы, капсулы и т. Д.Например: техника импрегнации серебром для демонстрации спирохет, окраска по Фельгену для демонстрации ядра, окраска Суданом черным для демонстрации липидных вакуолей, окраска Рю для демонстрации жгутиков, окраска Альберта для демонстрации метахроматических гранул.
    • Отрицательное окрашивание: фон окрашен кислотным красителем, например тушью или нигрозином. Используется для демонстрации капсул.

    Как классифицируются пятна?

    Пятна классифицируются в зависимости от pH их хромофора (окрашивающего иона) на кислые, основные и нейтральные.Кислые красители имеют анионный хромофор, например натрий + эозинат-. Основные красители имеют катионный хромофор, например, метиленовый синий + хлорид-. Кислотные красители сильнее сочетаются с цитоплазматическими компонентами бактерий, особенно с ядром, которое имеет основную природу. Нейтральные красители содержат как кислотные, так и основные компоненты, которые сводят на нет друг друга. Они представляют собой краситель по Романовскому и используются для окрашивания паразитарных форм. Пятна могут быть естественными (например, кармин и гематоксилин) или производными каменноугольной смолы / анилином (например, метиленовым синим, кристаллическим фиолетовым).Суправитальный (клетки удаляются из тела) и прижизненный (клетки все еще являются частью тела).


    Что такое полихромный метиленовый синий?

    Раствор метиленового синего Лёффлера, обработанный гидроксидом калия, превращается в полихромный метиленовый синий после длительного хранения при встряхивании. Используется в реакции Макфадина на Bacillus anthracis в мазках крови и демонстрации метахроматических гранул Corynebacterium diphtheriae.


    Кто изобрел окраску по Граму?

    Ганс Христиан Грам изобрел это пятно в 1884 году.Первоначальный состав представлял собой анилин генциановый фиолетовый, йод Люголя, абсолютный спирт и коричневый бисмарк.


    Каковы теории окрашивания по Граму?
    • Теория клеточной стенки: Клеточная стенка грамположительных бактерий в 40 раз толще, чем у грамотрицательных клеток, поэтому считается, что они помогают удерживать комплекс краситель-йод.
    • Теория содержания липидов: Клеточная оболочка грамотрицательных бактерий содержит дополнительную мембрану (внешнюю мембрану), следовательно, содержит больше липидов, чем грамположительные бактерии.Ацетон или спирт растворяют липид, образуя большие поры в грамотрицательных бактериях, через которые просачивается комплекс краситель-йод. Спирт / ацетон обезвоживает грамположительные бактерии, сокращая клеточную стенку и закрывая поры.
    • Теория рибонуклеата магния: соединение рибонуклеата магния и основного белка, сконцентрированное на клеточной мембране, помогает грамположительным бактериям удерживать первичный краситель. Грамотрицательные бактерии этим веществом не обладают.
    • Цитоплазматический pH Теория: считается, что цитоплазма грамположительных бактерий более кислая (2), чем цитоплазма грамотрицательных (3).Следовательно, говорят, что краситель с большей аффинностью связывается с грамположительными клетками.

    Какая часть бактерий действительно окрашивается?

    Окрашивается цитоплазма (особенно нуклеиновая кислота), а не клеточная стенка. Наличие неповрежденной клеточной стенки важно для сохранения грамположительности. Формы с дефицитом клеточной стенки, такие как Mycoplasma и L-формы, являются грамотрицательными.


    Какие бактерии или бактериальные компоненты не могут быть окрашены окрашиванием по Граму?
    • Чрезвычайно тонкие бактерии, такие как Treponema
    • Клетки, содержащие восковые вещества, непроницаемые для окрашивания, такие как Mycobacteria
    • Минутные внутриклеточные бактерии, такие как хламидии и риккетсии
    • Клеточные органеллы, такие как капсулы, споры, жгутики и т. Д.

    Какие альтернативы используются при окрашивании по Граму?
    • Первичное окрашивание: кристаллический фиолетовый, метиловый фиолетовый и генциановый фиолетовый
    • Протравливание: йод по Граму, реже йод Люголя
    • Обесцвечивающее средство: спирт, ацетон, смесь актеона и спирта (1: 1)
    • Контрастное пятно: разбавленный карбол фуксин, сафранин, нейтральный красный (краситель Сандифорда на гонококки)

    Какие положительные и отрицательные контроли для окрашивания по Граму?
    • Положительный контроль: стафилококки
    • Отрицательный контроль: E.coli, гнойные клетки

    При каких условиях грамположительные бактерии могут появиться грамотрицательными?
    • При чрезмерном обесцвечивании в результате длительного воздействия обесцвечивающего средства или использования только ацетона.
    • Когда клеточная стенка повреждается под воздействием лизоцима или антибиотиков, действующих на клеточную стенку, таких как пенициллин.
    • Старые культуры с ослабленной клеточной стенкой или действием автолитических ферментов
    • Фагоцитируемые бактерии, клеточная стенка которых подвергается действию лизосомального содержимого

    Какой этап окраски по Граму наиболее важен?

    Обесцвечивание — самый важный этап, поскольку на этом этапе различают грамположительные и грамотрицательные бактерии.Чрезмерное обесцвечивание может привести к появлению грамположительных бактерий, грамотрицательных, а недостаточное обесцвечивание может привести к появлению грамположительных бактерий.


    Каковы применения окрашивания по Граму?
    • Экспресс-диагностика таких заболеваний, как бактериальный менингит
    • Выбор эмпирических антибиотиков на основании результатов окрашивания по Граму
    • Выбор подходящей питательной среды на основании результатов окрашивания по Граму
    • Скрининг качества клинических образцов, например мокроты, которая должна содержать много гнойных клеток и мало эпителиальных клеток
    • Подсчет бактерий
    • Оценка морфологии и типов бактерий в клиническом образце

    Назовите грамположительный гриб?

    Candida sps


    Какие существуют модификации окраски по Граму?
    • Kopeloff and Beerman’s (Первичное окрашивание: метиловый фиолетовый, средство для обесцвечивания: ацетон или смесь спирта и ацетона 1: 1)
    • Jensen’s (Основное окрашивание: метиловый фиолетовый, средство для обесцвечивания: абсолютный спирт, контрастное окрашивание: нейтральный красный)
    • Preston and Morrell’s (первичное окрашивание: кристаллический фиолетовый, средство для обесцвечивания: йод-ацетон)
    • Weigert’s (первичное окрашивание: карбол генциановый фиолетовый, обесцвечивающее средство: анилин-ксилол).Это используется для окрашивания срезов тканей.

    Что такое кислотостойкое окрашивание?

    Определенные бактерии или их структуры обладают способностью удерживать первичный краситель (сильный карбол фуксин) и сопротивляться обесцвечиванию слабыми минеральными кислотами, такими как h3SO4, HCl. Такие бактерии или их структура называются кислотоустойчивыми, и это свойство называется кислотоустойчивостью. Существует два типа кислотостойкого окрашивания: горячий и холодный. Горячий метод (Ziehl-Neelsen) включает нагрев слайда, в то время как холодные методы, такие как Kinyoun и Gabbett, не включают нагрев слайда.


    Кто ввел кислотостойкое окрашивание?

    Эрлих в 1882 году открыл кислотостойкость. Оригинальный метод заключался в окрашивании анилин-генциановым фиолетовым и обесцвечивании сильной азотной кислотой. Позже он был улучшен Цилем и Нильсеном.


    Почему микобактерии кислые?

    Клеточные стенки микобактерий состоят из воскообразного вещества, миколовой кислоты, которое относительно непроницаемо для обычных методов окрашивания. Но под воздействием тепла и протравы (фенола) клетка может быть окрашена.Цель нагревания — размягчить восковой материал клеточной стенки и позволить пятну проникнуть в клетку. Основной фуксин лучше растворяется в феноле, а фенол — лучший растворитель для липидов и восков.


    Какие компоненты входят в состав красителя Циля-Нильсена?
    • Первичная окраска: Strong Carbol Fuchsin (содержит основной фуксин и фенол)
    • Обесцвечивающее средство: 20% серная кислота
    • Контрастное пятно: Метиленовый синий Loeffler или 1% малахитовый зеленый, пикриновая кислота для дальтоников

    Что такое кислотно-спиртовой обесцвечивающий агент?

    3% HCl в 95% спирте (метилированный спирт).Это полезно для дифференциации сапрофитных микобактерий от патогенных микобактерий. Патогенные микобактерии обладают кислотоустойчивостью и устойчивостью к алкоголю, но сапрофитные микобактерии обладают только кислотоустойчивостью. Сапрофитные микобактерии могут дезориентироваться алкоголем. 95% спирт можно использовать в качестве вторичного обесцвечивающего средства после обесцвечивания кислотой. Особенно используется при окрашивании мазков, приготовленных из мочи, которые могут содержать Mycobacterium smegmatis.


    Какие используются различные разбавления серной кислоты?
    • Mycobacterium leprae — 5% h3SO4
    • Ооцисты Cryptosporidium, Isospora — 1% h3SO4
    • Срезы тканей, содержащие актиномикты, нокардии — 1% h3SO4
    • Культуры нокардии — 0.5% h3SO4
    • Споры бактерий — 0,25-0,5% h3SO4

    Какие бывают холодные методы кислотостойкого окрашивания?

    Два метода, а именно метод Киньюна и метод Габбетта, не включают нагрев слайдов, поэтому они называются холодными методами. Нагревание заменяется повышенной концентрацией фенола и увеличением продолжительности окрашивания. Метод Киньюна предпочтителен для обнаружения ооцист Cryptosporidium в образцах фекалий. Метод Габбетта включает в себя обесцвечивающее средство и контрастное пятно в одном растворе.


    Почему горку следует заливать сильным карболовым фуксином?

    Для равномерного распределения тепла, иначе ползун может сломаться.


    Какие меры предосторожности необходимо соблюдать при подготовке или наблюдении мазков на КУБ?
    • Для каждого образца необходимо использовать новое предметное стекло, поскольку царапины могут дать ложноположительный результат.
    • Необходимо сделать однородный мазок из толстой части мокроты.
    • Банки для окрашивания не следует использовать для окрашивания мазков, так как существует риск перекрестного заражения.
    • Свежая промокательная бумага должна использоваться для каждого мазка для сушки предметного стекла, чтобы предотвратить переход с одного предметного стекла на другой.

    Как интерпретировать мазок?

    Перед объявлением мазка отрицательным необходимо просмотреть не менее 100 иммерсионных полей. Чувствительность мазка низкая, поскольку для получения положительного результата необходимо наличие 104 бацилл / мл. Если количество бацилл меньше этого, шансы обнаружить их меньше. В таком случае образец следует подвергнуть методам концентрирования, таким как метод Петрова.Если мазок на КУБ положительный, его следует подсчитать / оценить. Отсутствие AFB не исключает туберкулеза. Оценка мазков имеет прогностическое значение.


    Как оценивается мазок?

    Мазки классифицируются в зависимости от количества обнаруженных бацилл.

    • 3-9 бацилл / весь мазок: +
    • ≥10 бацилл / весь мазок: ++
    • ≥10 бацилл / в большинстве иммерсионных полей: +++

    Какие еще методы доступны для окрашивания микобактерий?

    Мазки мокроты на микобактерии можно окрашивать флуоресцентными красителями, такими как аурамин и родамин, поскольку они имеют сродство к миколиновой кислоте в стенках своих клеток.Флуоресцентная микроскопия полезна при скрининге большого количества образцов. При использовании мощного сухого объектива можно быстро увидеть большую площадь мазка.


    Как выглядят микобактерии в виде бусинок?

    Внешний вид в виде бусинок используется для описания внешнего вида микобактерий, когда клетка не окрашивается равномерно, показывая окрашенные и неокрашенные области. Эти формы обычны для Mycobacterium tuberculosis, тогда как Mycobacterium bovis окрашивает равномерно. Большинство сапрофитных микобактерий окрашиваются равномерно.


    Что такое метахроматические гранулы?

    Метахроматические гранулы — это запасы полиметафосфата, производимые Corynebacterium diphtheriae в питательной среде. Эти гранулы также известны как гранулы Babes Ernst, гранулы Volutin, полярные тела и т. Д. Их называют метахроматическими гранулами, потому что они проявляют метахромазию, свойство, при котором гранулы имеют цвет, отличный от цвета используемого красителя. При окрашивании полихромметиленовым синим они кажутся пурпурными.Они вырабатываются в изобилии в среде, содержащей сыворотку, например, в сыворотке Loeffler’s slope.


    Какими способами можно продемонстрировать эти гранулы?

    Пятно Альберта, пятно Нейссера, пятно Думера и пятно Пью. Они могут быть продемонстрированы как преломляющие тела при мокром покрытии или немного более грамположительных структур при окрашивании по Граму.


    Почему бациллы расположены под углом друг к другу?

    Бациллы расположены под углом друг к другу, напоминая английскую букву V или L или китайскую букву (клинопись), потому что дочерние клетки не разделяются полностью после деления клеток (бинарного деления).


    Что содержат раствор Альберта A (1) и B (2)?

    Раствор A (1) содержит толуидиновый синий, малахитовый зеленый, ледяную уксусную кислоту и спирт, а раствор B (2) содержит йод и йодид калия в дистиллированной воде.


    Окраска по грамму под микроскопом — цель, процедура и подготовка

    Назначение, процедура и подготовка

    Окрашивание по Граму, вероятно, является одной из наиболее часто используемых процедур окрашивания, используемых в области микробиологии.Это одно из дифференциальных красителей, которые используются для характеристики бактерий в одной из двух групп: грамположительные бактерии или грамотрицательные бактерии.

    Грамположительные бактерии обычно имеют более сильное сродство к кристаллическому фиолетовому при нанесении грамм йода, чем грамотрицательная клеточная стенка.

    Будучи протравой, грамм йод образует комплекс с кристаллическим фиолетовым в пятне, который крепче прикрепляется к клеточной стенке грамположительных бактерий, чем грамотрицательных бактерий.

    В то время как грамположительные бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет из-за наличия толстого пептидогликанового слоя в стенках их клеток, грамотрицательные бактерии окрашиваются в красный цвет из-за более тонкого пептидогликанового слоя в их клеточной стенке (более толстый пептидогликановый слой позволяет для удержания пятна, но более тонкий слой — нет).


    Техника

    Окрашивание включает 3 основных этапа / процесса, которые включают:

    o Окрашивание кристаллическим фиолетовым (водорастворимый краситель)

    o Обесцвечивание (с использованием этанола / ацетона)

    o Противокрашивание (с использованием Safranin)

    Из-за различий в толщине пептидогликанового слоя на клеточных стенках этих бактерий грамположительные бактерии сохранят окраску кристаллического фиолетового после процесса обесцвечивания с использованием этилового спирта / ацетона.

    После окрашивания образца кристаллическим фиолетовым для обесцвечивания образца используют этиловый спирт. Он достигает своей цели за счет обезвоживания пептидогликанового слоя путем его сжатия и сжатия. При этом большой кристаллический фиолетовый не может проникнуть через плотный слой пептидогликана, и, следовательно, он попадает в клеточную стенку грамположительных бактерий.

    С другой стороны, внешняя мембрана грамотрицательных клеток не может удерживать комплекс кристаллического фиолетового йода, и, следовательно, цвет теряется.

    Сафранин — более светлая окраска по сравнению с кристаллическим фиолетовым и, таким образом, нарушает пурпурную окраску грамположительных клеток.


    Теория

    В водном растворе кристаллический фиолетовый диссоциирует на ионы CV + и CV-. Эти ионы проникают через стенки и мембраны как грамположительных, так и отрицательных клеток.

    CV + будет взаимодействовать с отрицательно заряженными компонентами бактериальных клеток и приобретать пурпурный цвет.При добавлении йода катионы йода (I- или I3-) взаимодействуют с CV +, что приводит к образованию более крупных комплексов CVI в цитоплазме и внешних слоях клетки.

    При добавлении обесцвечивающего агента (этанола) он взаимодействует с липидами мембран как грамположительных, так и грамотрицательных положительных и грамотрицательных веществ.

    Это приводит к потере внешней мембраны, что, в свою очередь, оставляет пептидогликановый слой открытым. Для грамотрицательных клеток этанол вызывает неплотность стенок и, следовательно, они не могут удерживать большие комплексы CV-L во время обесцвечивания.

    В некоторых процессах окрашивания с использованием окрашивания по Граму получают образец грамм-переменных, который представляет собой смесь розового и пурпурного.

    У некоторых родов, таких как Arthrobacter, Actinomyces и Corynebacterium, клеточная стенка особенно чувствительна к разрушению во время деления клеток.

    Это приводит к грамотрицательному окрашиванию грамположительных клеток.

    С другой стороны, в культурах Clostridium и Bacillus уменьшение толщины пептидогликана во время роста совпадает с увеличением количества клеток, которые, в свою очередь, окрашивают грамотрицательные.


    Препараты

    1. Первичный краситель (реагенты кристаллического фиолетового для окрашивания)

    Раствор A

    o 2 грамма кристаллического фиолетового (сертифицировано 90 процентов содержания красителя)

    o 20 мл этанола (95 процентов) объем / объем)

    Раствор B

    o 0,8 грамма оксалата аммония,

    o 80 мл дистиллированной воды,

    Смешайте A и B, чтобы получить реагент для окрашивания кристаллическим фиолетовым, и храните в течение 24 часов.

    2. M Ордант (граммы йода)

    грамм йода,

    грамм йодида калия,

    или 300 мл дистиллированной воды,

    Использование ступки, йода и калия молотый, медленно добавляя воду и продолжая измельчать до полного растворения йода. (Храните это в янтарной бутылке)

    3. Обесцвечивающее средство

    o Этанол, 95% (об. / Об.)

    Однако ацетон или ацетон 1: 1 с этанолом,

    o 50 мл ацетон

    o 50 мл этанола (95%)

    4. Контраститель (сафранин)

    Рабочий раствор :

    o 10 мл исходного раствора (2,5 грамма сафранина O и 100 мл 95-процентного этанола)

    o 90 мл дистиллированной воды


    Процедура

    Подготовка мазка

    Важно отметить, что толщина мазка образца на предметном стекле является важным фактором во время подготовки образца.Мазок не должен быть слишком толстым или слишком тонким.

    Пометьте слайд.

    Бактерии — нанесите образец на предметное стекло с помощью посевной иглы. Это также можно сделать, нанеся на предметное стекло каплю физиологического раствора, затем образец и затем перемешав.

    Затем его следует дать высохнуть на воздухе перед термофиксацией, осторожно пропустив предметное стекло через горелку Бунзена (избегайте ожога образца).

    Актиномицеты — то же самое, что и бактерии, но если попытаться получить часть колонии на предметном стекле, пока она еще не повреждена, это может быть достигнуто с помощью скальпеля.


    Процедура окрашивания

    o Залейте предметное стекло реагентом для окрашивания кристаллическим фиолетовым примерно на 1 минуту,

    o Промойте предметное стекло слабой непрямой струей водопроводной воды в течение примерно 2 секунд, залейте предметное стекло протравой (йодом Грама), затем подождите, пока минута,

    o Промойте предметное стекло еще раз в слабой непрямой струе водопроводной воды в течение примерно 2 секунд,

    o Залейте предметное стекло обесцвечивающим средством и подождите 15 секунд.Это также можно сделать, добавляя по капле на предметное стекло, пока обесцвечивающий агент, стекающий с предметных стекол, не станет прозрачным,

    o Залейте предметное стекло контрастным сафранином (и подождите около минуты (от 30 секунд до 1 минуты)

    o Промойте предметное стекло, используя слабую непрямую струю водопроводной воды до точки, где появляется цвет в сточных водах, а затем промокните абсорбирующую бумагу,

    o Добавьте каплю иммерсионного масла на окрашенный образец и наблюдайте под микроскопом


    Окрашивание по Граму помогает охарактеризовать бактерии как грамположительные или грамотрицательные, позволяя микроскопистам-энтузиастам / профессионалам проверять стенку и мембрану бактериальной клетки, что, в свою очередь, влияет на различные аспекты ее патогенности и уровня вирулентности.


    См. Также:

    Эндоспорное пятно — определения, методика и процедура

    Капсульное пятно — определения, методы и процедуры

    Дополнительная литература: деление клеток, дифференциация клеток и цитопатология и узнайте о наборах для окрашивания для микроскопов.

    Вернуться на главную страницу «Бактерии»

    Вернуться к изучению различий между грамположительными и грамотрицательными бактериями

    Возврат от окрашивания по Граму к окрашиванию клеток при микроскопии

    Возврат пятен по Граму в информационный центр для микроскопии



    Ссылки

    Visca, P, Petrucca, A., Де Мори, П., Феста, А., Эвангело, Б., Антинори, А., и Петросилло, Н., (2001) Сообщество — Acinetobacter radioresistens Bacteremia у ВИЧ-положительных пациентов. Emerging Infectious Disease 7 (6): 1032 — 1035. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2631918/pdf/11747736.pdf

    Андерсон, Г.К. Беверидж, Т. Дж., И Х. К. Кларк. 1983. Химический механизм окраски по Граму и синтез нового электронно-непрозрачного маркера для электронной микроскопии, который заменяет йодную протраву красителя.J. Bacteriol. 156 (2): 837-845.

    Макклелланд Р., 2001. Пятно по Граму — ключ к микробиологии. Наблюдатель в медицинской лаборатории [сериал в Интернете]. Апрель 2001 г. [цитировано 6 августа 2005 г.]

    Ссылки

    faculty.stcc.edu/rapp/BIOT251/gram_stain_procedure.htm

    /microleton.edu /research_methods/microscopy/viable_quant.html

    .

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *