Новые техники окрашивания: Упс ! Страница не найдена !

Содержание

Упс ! Страница не найдена !

Коллекция весна-лето

Коллекция осень-зима

Backstage осень-зима

Backstage весна-лето

Новые Техники окрашивания волос — тенденции

Лучшие колористы Санкт-Петербурга как часто мы слышим подобные регалии, но истинных не так много, одним из признанных мастеров своего дела является Мария Мельникова, которая организовала курсы, где обучают новым техникам окрашивания волос.

Алексей Осипчук и Мария Мельникова являются представителями нового поколения мастеров из Санкт-Петербурга, занимающихся окрашиванием волос. У этих специалистов новый взгляд на окрашивание волос. Именно Мария Мельникова привнесла на российский рынок такие модные тенденции окрашивания как брондирование, омбре и бейбилайтс.

Эти мастера знают все тонкости открытых техник окрашивания волос. На курсах можно пройти обучение технике шатуш, обучение технике окрашивания омбре, брондированию, технике бейбилайтс.

Омбре окрашивание

Омбре окрашивание представляет собой колорирование волос в два или три или большее количество цветов. Переход между темным оттенком у корней к светлому на кончиках получается плавным, за счет этого достигается эффект выгоревших под воздействием солнечных лучей локонов. Омбре окрашивание выполняется кисточкой, без использования фольги. Мастера колористики обучат всем тонкостям техники омбре.

Техника шатуш

Окрашивание локонов техникой шатуш выполняется с открытым доступом воздуха (фольга не используется). За счет этого область осветления получается более красочной, необходимость в дополнительном окрашивании локонов отпадает.

Если Вы хотите научиться технике шатуш, Мария Мельникова поможет Вам в этом.

Окрашивание санлайт

Окрашивание санлайт – это игра на контрастах. Темные корни смешиваются со светлыми кончиками, благодаря технике санлайт, осветление получается очень легким. Техника санлайт подходит для всех оттенков волос.

Брондирование

Многие слышали о брондировании волос, но не все знают, что это такое. Брондирование – это способ окрашивания локонов, позволяющий найти компромисс между светлым и темным цветом. Эта техника совсем недавно вошла в моду и завоевала большую популярность. Брондирование – это выбор тех, кто любит экспериментировать с цветом волос. При брондировании темные оттенки аккуратно сочетаются со светлыми. Брондирование можно делать на русых и светло-каштановых волосах. При такой технике окрашивания цвет волос выглядит естественным. Пряди переливаются на солнце, волосы кажутся более пышными.

Отличие брондирования от мелирования в том, что Используется одновременно несколько светлых оттенков. Окрашивание получается плавным, в то время как при омбре осветлить равномерно удается только кончики. Контраста при таком окрашивании не улавливается, четкого разделения на темные и светлые пряди нет. Грамотное сочетание тонких прядей разных оттенков создает переливы на волосах.

Мария Мельникова научит, как правильно делать брондирование волос.

Бейбилайтс окрашивание

Бейбилайтс – это сочетание балаяжа и, полюбившемся многим Открытых техник, создающих мерцающий блеск в волосах.

Babylights окрашивание подходит для любого цвета волос. Техника babylights создает различные отливы на волосах. Теплые металлические отблески смотрятся очень эффектно, волосы визуально кажутся более объемными. Эту технику также называют «солнечный поцелуй», осветлению подвергаются отдельные прядки, чаще всего, находящиеся рядом с лицом и кончики.

Под руководством таких профессионалов, как Мария Мельникова, научиться технике бейбилайтс несложно.

Обучение колористике профессионалами позволит Вам в совершенстве овладеть открытыми техниками окрашивания

волос, стать истинным мастером в этом деле.

модные техники окрашивания волос 2019

Открываем сезон экспериментов с новыми техниками окрашивания! Модные тренды и стильные варианты — уже в нашем материале!

В этом сезоне стоит обратить внимание на оттенки с интересным подтоном. Например, медовым, металлическим или даже фиолетовым. Все индивидуально, ведь цвет волос может подчеркнуть яркость глаз и сделать тон кожи более ровным.

Разберем самые интересные техники окрашивания?

Техника окрашивания — Lowlights

Главная деталь — контраст. Добавьте светлых бликов на темные волосы. Эта техника очень напоминает air touch или контуринг. Разница в том, что для этого окрашивания используют «глубокие» и насыщенные цвета. Красивые варианты можно увидеть в Instagram-профиле у Hair-master @coloredbycaitlin.

Модное окрашивание на лето: Cold brew

Техника окрашивания сочетает в себе сразу несколько оттенков. Среди основных: шоколадный, карамельный, янтарный и медовый. Универсальная гамма, которая подойдет многим! Как комбинировать? Все ответы и красивые варианты — в Instagram-аккаунте у Hair-master @carra_balayage.

Техника окрашивания — AirTouch

Стильное окрашивание, которое стало популярным еще в прошлом сезоне. Главная деталь — плавный переход и естественный оттенок. Секрет такой техники состоит в том, что все волосы разделяются на тонкие пряди, которые выдуваются феном. Стильные примеры можно посмотреть в Instagram-аккаунте у Hair-master @tamila_hairstylist.

Стильное окрашивание в один тон

Время от времени хочется отдохнуть от разных hair-техник и необычных дизайнов. Отличный вариант — окрашивание в один тон. Выберите цвет, который сможет подчеркнуть вашу красоту. Производители предлагают самые разные вариации «классических» оттенков. Например, черный с фиолетовым подтоном или теплый блонд с кремовым отблеском.

Модное окрашивание на лето — Balayage

Техника баляж видоизменятся каждый сезон. Комбинируйте сразу несколько оттенков.

Один из трендов летнего сезона — кофейное окрашивание. Экспериментируйте с этой цветовой гаммой.

Готовы к экспериментам с новыми техниками окрашивания?

Также вам будет интересно: Hair-тренд: три модных цвета в окрашивании волос

Flower photo created by freepik — www.freepik.com, Instagram @coloredbycaitlin, Instagram @tamila_hairstylist, Instagram @carra_balayage

Материалы по теме:

Модное окрашивание волос (на средние волосы). Новые техники окрашивания волос

Современные модницы любят и умеют удивлять окружающих необычными решениями в своем стиле. Выразительные, густые брови – этот тренд уже давно всем известен, так что если хочешь удивить – удиви необычной красотой своих волос!

Будучи в поисках ответа на вопрос: какое модное окрашивание волос на средние волосы стоит выбрать современной девушке, лучше всего пристально изучить все варианты окрашивания, которые находятся на пике популярности, чтобы выбрать действительно наиболее достойное решение. А мы вам в этом поможем, ведь данная статья коротко расскажет о наиболее интересных трендах «мира прядей и локонов».

Окрашивание с помощью техники шатуш – идеальное решение для настоящих леди

Если вы не готовы к кардинальным переменам образа и пряди необычного (например, розового) цвета для вас это перебор, рекомендуем ознакомиться с таким понятием, как «техника окрашивания шатуш». Шатуш профессионалы-стилисты также называют «мелирование в калифорнийском стиле», ведь оно имеет множество поклонниц-звезд из солнечного Голливуда.

Если говорить простыми словами, техника окрашивания шатуш подразумевает создание на прядях эффекта природного выгорания, то есть волосы у корней будут более темные, а вот кончики высветляют в привлекательный и подходящий именно вам цвет, который на несколько оттенков светлее, чем волосы у макушки. Шатуш на красивых, ухоженных волосах смотрится не только очень натурально, но и крайне привлекательно, так как плавный переход между тонами делает волосы, хотя бы зрительно, более объемными. Шатуш будет отлично смотреться и на прямых волосах, и на мягких локонах.

Балаяж как альтернатива шатушу

Эффекта выгоревших прядей можно добиться, если выбрать для себя такое модное окрашивание волос на средние волосы, как балаяж. Это так же популярный вариант мелирования, но только в «классическом варианте» пряди окрашиваются по вертикали, а используя технику балаяж, окрашивание происходит по горизонтали. Поэтому такое модное окрашивание волос средней длины подразумевает использование сразу трех оттенков красок, чтобы переход был максимально натуральным и привлекательным.

Дерзкий, смелый и «вкусный» цвет волос

От всеми любимой классики перейдем к действительно необычному виду окрашивания. В этом году модные цвета окрашивания волос потеснил оригинальный клубничный блонд, ставший настоящей бомбой, ведь его предпочитают современные девушки, которые не боятся повышенного уровня внимания от окружающих.

Ранее девушки тонировали все волосы, кончики или насколько прядей в медовые, персиковые, карамельные и другие «вкусные» оттенки, а вот клубничное тонирование – это новинка нового сезона. Клубничный блонд – это то модное окрашивание волос на средние волосы. Которое идеально подойдет для юных девушек с совершенной фарфоровой кожей, так как еще больше подчеркнет хрупкие очертания их кукольного личика. Стилисты рекомендуют для такого окрашивания использовать только мягкие розовые оттенки, напоминающие сладкую конфетку. Хотя такой вид окрашивания делает свою обладательницу зрительно более юной, выбирать его нужно только тем леди, которые еще не достигли тридцатилетнего возраста, чтобы просто-напросто не выглядеть глупо.

Волосы пепельного цвета – решение для смелых и уверенных в себе красоток

Следующее модное окрашивание волос на средние волосы, о котором бы хотелось упомянуть, превратит любой ваш образ в образ современной Снежной королевы, так как мы рекомендуем поэкспериментировать и окрасить свою шевелюру в один из необычных, но таких привлекательных пепельных или платиновых оттенков. Правильно подобранный тон позволяет наслаждаться серебристыми прядями как девушкам со смуглой кожей и ярко выраженными темными бровями, так и девушкам, которые гордятся аристократичной бледностью своей кожи.

Пепел, правда, не всем к лицу

Но известнейшие стилисты рекомендуют выбирать такой вид окрашивания только девушкам младше тридцати, так как серебро на волосах может просто старить более зрелую мадам. Если вы все же горите желанием превратиться в платиновую блондинку, обращайтесь за помощью к профессионалам и уточните, что желаете, чтобы корни волос были на два-три тона темнее, чем кончики, такой контраст сыграет вам на руку.

Насыщенный шоколад всегда в моде

Пусть тенденции мира моды меняются и приходят новые веяния, а окрашивание в глубокие шоколадные оттенки всегда будет на пике популярности. Такое модное окрашивание волос для брюнеток сделает из каждой настоящую красотку, так как глубина правильно подобранного оттенка завораживает и заставляет завидовать столь красивой и ухоженной шевелюре. Стилисты говорят, что шоколадные оттенки подойдут практически каждой представительнице нежного пола, стоит только подбирать тон в зависимости от цветотипа кожи. Как смуглая нимфа, так и бледная аристократка с ухоженными волосами насыщенного цвета шоколада, всегда воспринимаются мужчинами, как роковые и очень привлекательные женщины.

Не забудем и об омбре, а также его интерпретациях

Те, кто говорит, что техника окрашивания омбре – это пережиток прошлых сезонов глубоко ошибаются, так как она и сегодня находится на пике популярности и ее выбирают для себя многие девушки и женщины.

Ранее рассматриваемые нами шатуш и балаяж подразумевают мягкий и очень плавный переход между оттенками, а вот при окрашивании омбре переход делается выразительным и даже контрастным. Классическое омбре – это темные корни у макушки и кончики. Которые должны быть намного светлее. Линия перехода чаще всего размещается где-то на середине длины прядей, хотя, для коррекции формы лица, стилисты рекомендуют ее немного сдвигать вверх или вниз. Многие красивые девушки остаются верными классическому варианту окрашивания омбре, а вот дерзкие отдают предпочтение его перевернутой интерпретации.

Перевернутое омбре – всем ли к лицу

Необычно смотрится на волосах средней длины такой вариант окрашивания, как перевернутое омбре. С названия становится понятно, что при процессе окрашивания совершается замена оттенков, то есть от корней наносится светлый тон, а кончики делают более темными. Многие модницы предпочитают даже очень контрастные варианты красок, например, «золотистый блонд» и насыщенный угольный оттенок. Очевидно, что подобное окрашивание подойдет только для девушек со светлой кожей и выразительными чертами лица. Девушкам с круглой формой лица такой вид окрашивания не рекомендуется, так как светлый тон возле скул сделает личико еще более округлым.

«Просто космос» или цветное омбре

Если раньше девушки с необычным цветом волос, например, синим, фиолетовым или зеленым, просто шокировали прохожих. То теперь все чаще многие отзываются с восхищением о таком типе окрашивания, как цветное омбре. Это выбор экстравагантных и творческих личностей, которые только так могут себя комфортно чувствовать. Использование двух или больше необычных оттенков краски и умелые руки мастера могут сотворить на вашей шевелюре настоящее чудо, и вы уж точно уже никогда не будете обделены вниманием от окружающих.

И напоследок стоит сказать…

Все современные модные стрижки и окрашивание – это еще один способ самовыражения представительниц нежного пола. Если вы всегда мечтали покрасить волосы необычным способом – это ваш шанс реализовать такую мечту, ведь нынешнее общество воспринимает подобные моднице тенденции. Не стоит себе отказывать в желании меняться. Ведь другого времени и другой жизни для воплощения желаний у нас не будет.

тренды, новые техники, модные в 2021 оттенки волос

Встреча нового года всегда ассоциируется с новыми целями и желаниями перемен. Это справедливо и для мира моды, где дизайнеры уже определили модную в грядущем сезоне одежду, а визажисты подобрали идеи лучшего макияжа. Парикмахеры тоже приготовили обладательницам как длинных, так и коротких локонов несколько сюрпризов. Уже захотелось попробовать? Предлагаем рассмотреть идеи модного окрашивания волос 2021, чтобы почерпнуть несколько идей для своей будущей прически.

Тренды окрашивания волос в 2021

Каждый из вариантов по-своему подчеркнет ваш образ, но учтите, что выбрать один будет непросто: в мире моды большие перемены и тренды окрашивания волос в 2021 не оставят представительниц прекрасного пола равнодушными.

Уходим в черный

Занятые работой с брондом и получением пастельных переливов, колористы в упор не обращали внимания на самый обычный черный цвет. Но не в этом году: сегодня черный — один из модных оттенков волос 2021. Особенно если это glossy black, который выглядит «влажным» и напоминает блеск лакированной кожи.

Больше русого

Все еще интересуетесь, какой цвет волос модный в 2021? Посмотрите в сторону русых оттенков. Если раньше считалось, что оттенок делает образ блеклым, сегодня колористы наоборот предлагают попробовать этот естественный оттенок. Особенно если девушки предпочитают контрастные тона в макияже — с таким цветом мейк будет смотреться еще эффектнее.

Голографическое окрашивание

Выбирая, как можно красить волосы в 2021 году, обратите внимание и на более смелые решения, если готовы попробовать что-нибудь нестандартное. Например, голографическое окрашивание, которое смотрится футуристично и очень эффектно.

Скрытое окрашивание

Хочется экспериментов, но боитесь поменять имидж слишком кардинально? Такая идея позволяет владелице локонов сохранить обычную прическу и получить стильный образ, если заколоть часть волос. Скрытое цветное окрашивание волос в 2021 — новый тренд.

Техника Money Piece

Это еще один вариант того, как покрасить волосы в 2021. Название, кстати, говорит о том, что вариант бюджетный — достаточно сделать только две пряди у лица, чтобы обновить прическу.

Вариант окрашивания мани пис отлично подходит как для ярких цветов волос, так и для классики.

Окрашивание Twilighting

Среди модных тенденций 2021 появилась и техника Twilighting, которая сочетает в себе элементы окрашивания бейбилайтс и балаяж. Осветленные широкие пряди с плавными переходами чередуются с тонкими. В результате достигается эффект визуального объема, хотя естественность при этом максимально сохраняется.

Отталкиваемся от длины волос

Чтобы выбрать модный цвет волос 2021, можно отталкиваться не только от собственных предпочтений, но и от длины волос. Ведь некоторые техники могут проявить себя на длинных локонах, пока другие смогут подчеркнуть эффект стрижек пикси или каре.

Короткие

Здесь все зависит от эффекта, которого вы хотите добиться. Например, при графичном каре наверняка хочется подчеркнуть четкие линии стрижки. В таком случае смотрите в сторону однотонного окрашивания.

А в случае стрижки, которую вы планируете укладывать «небрежно», можно создать игру цветов за счет различных переходов. Здесь будут хорошо смотреться и цветные пряди.

Длинные

Здесь техники могут показать себя во всей красе: есть где разгуляться. Омбре или балаяж будут смотреться шикарно, можно использовать сразу несколько оттенков, поиграв с переходами.

Желаемый оттенок

Чтобы выбрать, как покрасить волосы модно в 2021, определитесь, в каких оттенках хотите увидеть свои локоны. Отсюда можно отталкиваться при выборе итогового результата.

Модное окрашивание в блонд 2021: оттенки в тренде

Если хочется чего-то светлого и нежного, блонд — невыходящая из моды классика. А вот какие оттенки сделают цвет еще более благородным:

Для темных волос

Желающие стать брюнеткой или шатенкой тоже найдут много интересного в тенденциях этого года. Вот что предлагают парикмахеры:

шоколад с чили;

розовый бронд.

Для рыжеволосых девушек

Ну а те, кто хочет превратиться в огненных красавиц с рыжими локонами, могут попробовать как классические оттенки, так и яркие решения. Вот что можно отметить:

имбирный пряник;

тающая карамель;

Разобрав лучшие цвета покраски волос в 2021, вы сможете подобрать идею, исходя из своей длины волос, желаемой укладки и просто предпочтений, ведь идей много и фантазии точно есть где разгуляться. А технику смогут подобрать как любительницы ярких прядей, так и ценители классики.

Модное окрашивание волос 2020: трендовые оттенки, новые технологии окрашивания | lady style

С завидной регулярностью появляются новые инновационные технологии окрашивания волос и ультрамодные оттенки. И 2020 год не стал исключением и предлагает девушкам много интересных вариантов окрашивания, которые позволят всегда оставаться в тренде.

Конечно, при выборе конкретного оттенка важное значение имеет именно индивидуальный подход. Но, если вы хотите выглядеть не только красиво, но и модно, стоит более внимательно присмотреться к последним новым тенденциям, которые вам обязательно понравятся.

Давайте ознакомимся с главными оттенками, которые будут на пике популярности в 2020 году.

www.pinterest.ru

ФИОЛЕТОВЫЕ ОТТЕНКИ

Все также остается актуальным и востребованным среди молодых девушек нежно-лиловый цвет. Наиболее выигрышно он смотрится в стильном сиреневом омбре, с плавным переходом от ярко фиолетового цвета до бледно-сиреневого. При этом может использоваться практически вся палитра фиолетового цвета.

www.pinterest.ru

ЗОЛОТИСТО-МЕДОВЫЙ ОТТЕНОК

Ну разве можно устоять перед нежным и невероятно красивым оттенком «теплый мед»? Это смесь медного и пшеничного цветов. К тому же это просто идеальный цвет для девушек со светлыми глазами.

www.pinterest.ru

ПАСТЕЛЬНО-РОЗОВЫЕ ОТТЕНКИ

Мягкий и нежный оттенок розовой пастели просто идеально смотрится на волосах любой длины. Он подходит как для ровных, так и волнистых прядей. Его могут выбирать как обладательницы длинных волос, так и девушки отдающие предпочтение коротким и стильным стрижкам.

www.pinterest.ru

ПЫЛЬНО-РОЗОВЫЙ ОТТЕНОК ИЛИ ЦВЕТ СЕРАЯ ФУКСИЯ

Это интересный, трендовый и смешанный тон. Выглядит данный оттенок как что-то среднее между розовым и серым цветами. Намного легче получить такой тон будет именно обладательницам светлых волос, в отличие от брюнеток. Если у вас темные волосы, но вы хотите именно такой оттенок, предварительно нужно будет осветлить волосы и регулярно осветлять прикорневую зону перед каждым окрашиванием.

www.pinterest.ru

www.pinterest. ru

КАРАМЕЛЬНЫЙ И МЕДНО-ШОКОЛАДНЫЙ ОТТЕНОК

Темный цвет волос можно разбавит теплыми и красивыми медными оттенками, которые сделают интересный акцент. Благодаря появлению светлых прядок цвет локонов будет более мягким. Это будет идеальный выбор для девушек с темными волосами. Но такое окрашивание могут использовать и светловолосые девушки, однако обязательно нужно будет делать более яркий макияж, чтобы лицо стало более выразительным.

www.pinterest.ru

ПЕСОЧНЫЙ ОТТЕНОК

Благородный, нежный и немного желтоватый оттенок прекрасно подходит девушкам со светотипом «ранняя осень» или «весна». Также это прекрасный вариант немного освежить свой образ, если хочется перемен, но к кардинальным изменениям вы еще не готовы.

www.pinterest.ru

ПОПУЛЯРНЫЕ ТЕХНИК ОКРАШИВАНИЯ

Мода диктует не только новые трендовые оттенки для волос, но и более современные техники окрашивания. Чтобы добиться некоторых оттенков требуется комбинирование цветов, справиться с которым сможет только опытный специалист.

Наиболее популярным техниками окрашивания в 2020 году будут:

«The Money Piece». Это способ окрашивания, который позволит быстро и дешево скорректировать прическу, получив свежий и интересный оттенок. Например, каштановые волосы можно дополнить светлыми прядками у лица.
Дип-дай. Эта техника окрашивания чем-то напоминает омбре и позволяет создать красивый и плавный градиентный переход от натурального оттенка волос с более яркому цвету на кончиках.
Скрытое окрашивание. Данная техника позволит получить неординарный и интересный оттенок волос, который можно будет легко скрыть, если потребуется. Окрашивается только нижний слой волос.
Калифорнийское мелирование. При помощи данной техники окрашивания можно получить стильный эффект выгоревших волос. Лучше всего этот вид окрашивания использовать на длинных волосах. Благодаря градиенту на разных уровнях достигается желаемый объем.

ФОТО ПРИМЕРЫ МОДНОГО И ТРЕНДОВОГО ОКРАШИВАНИЯ В СЕЗОНЕ 2020 ГОДА:

www.pinterest.ru

www. pinterest.ru

Ставьте лайки и делитесь комментариями! Подписывайтесь на канал! Впереди ждет еще много интересного!

Новые техники окрашивания. Это стоит попробовать!

Весной каждая вторая девушка хочет перемен – мы садимся на диету, ищем идеальное пальто и, конечно, задумываемся о новой стрижке или цвете волос. Если ты уже готова к преображению, то советуем заглянуть в салоне красоты MAHASH. Здесь тебе предложат новые техники окрашивания Pure Tone System на основе богатой палитры органических красителей AVEDA.

MAHASH PURE TONE – твой вариант, если ты хочешь оставаться в тренде, но не желаешь выходить за рамки натурального цвета.

BABYLIGHT – техника неравномерного окрашивания для создания эффекта легкого свечения волос.

COLOR RELIEF INSPIRATIONS – подходит для волос любой длины. Пожалуй, это самая сложная и креативная техника для колориста, ведь главная задача мастера – создать контрастный, рельефный рисунок, который будет подчеркивать (а если нужно, и создавать) объем и красоту локонов.

COLOR LAYERS INSPIRATIONS – когда объемный, богатый цвет притягивает взгляд своей глубиной. Мастер создает моноцвет и дополняет его плавными переходами и бликами оттенков.

COLOR SHAGGY INSPIRATIONS – специально создана для средней длины волос. Ее главное отличие – оттенки с легкими бликами.

SOFT BLACK COLOR – щадящая техника окрашивания для темных волос. Учти, чтобы создать желаемый цвет, мастер будет использовать осветляющую формулу на основе натуральных ингредиентов и протеиновых коктейлей. Но это очень мягкие красители, они не повреждают структуру и не портят качество волос.

Кстати, до 31 марта на первое окрашивание в любом салоне MAHASH действует скидка 50%, получить ее ты можешь на сайте anding. mahash.ru.

Методы окрашивания в замороженной секции: передовые лабораторные практики

Алехандро С. Мендоса, доктор медицины , специалист по хирургической патологии / GI
Джон Бишоп, доктор медицины , профессор медицинских наук, заместитель председателя клинической службы, отделение патологии и лабораторной медицины, Калифорнийский университет в Дэвисе

ВВЕДЕНИЕ

Окрашивание тканей во время замороженного среза — один из наиболее важных шагов в получении точного патологического диагноза.Визуализация и различение микроскопических деталей могут быть затруднены, если окрашивание выполнено неправильно. Здесь мы рассмотрим два распространенных метода окрашивания (H&E, толуидиновый синий), используемые во время замороженного среза, сравним их преимущества и ограничения и опишем лучшие лабораторные практики для достижения оптимального результата окрашивания.

H&E

H&E — это наиболее часто используемый из всех методов окрашивания, доступных в замороженных срезах. H&E прост в исполнении, недорог и надежен.Двумя основными компонентами красителя являются гематоксилин и эозин.

Гематоксилин — это натуральный краситель, полученный из бревна Haematoxylon campechianum, произрастающего в мексиканском штате Кампече. Это основной краситель, который окрашивает кислые компоненты клетки, такие как нуклеиновые кислоты, гликозаминогликаны и кислые гликопротеины, в сине-фиолетовый оттенок. ^1,2,3 Эозин — это кислотный краситель, который служит отличным контрастом гематоксилину, который воздействует на цитоплазму клеток, в частности, на митохондрии, секреторные гранулы и коллаген.³ Придает разные оттенки красного и розового цитоплазме разных типов клеток и разных типов соединительной ткани. ⁴

H&E может выполняться двумя разными методами: прогрессивным или регрессивным. В прогрессивном методе ткань сначала окрашивают раствором гематоксилина, который содержит избыток солей алюминия или кислоты, что увеличивает сродство к ядрам. ⁵ Перед нанесением контрастного красителя следует промывание водой. Изменение цвета связано с избирательным сродством компонентов ткани к гематоксилину.При регрессивном методе первым шагом является перекрашивание среза ткани нейтральным раствором гематоксилина. Затем используют кислотный спирт для удаления лишнего пятна, а затем щелочной раствор для получения нейтрализованного участка ткани. Интенсивность окрашивания контролируется визуальным осмотром под микроскопом. Прогрессивный метод дает более воспроизводимые результаты, но регрессивный метод предлагает более четкую степень дифференциации. ^6,7

Преимущества:

H&E дает отличную морфологию, обеспечивая отличный контраст между клеточными компонентами.⁵ H&E обеспечивает лучшую визуализацию некроза отдельных клеток, кератинизации и кератиновых жемчужин, которые являются частыми гистологическими находками при хорошо дифференцированной плоскоклеточной карциноме. H&E обеспечивает стабильность окрашенных тканей в течение многих лет без выцветания. Окраска H&E также совместима в сочетании с различными окислителями, протравами и дифференцирующими агентами. ⁸ H&E надежен и прост в эксплуатации.

Ограничения:

Одним из основных ограничений H&E является продолжительность процедуры окрашивания.Подготовка одного слайда может занять от 3 до 5 минут, в зависимости от протокола практики. Из-за большого количества используемых красителей выполнение H&E во время замороженного участка иногда может стать сложной задачей, особенно когда одновременно обрабатываются несколько частей или участков. H&E также плохо окрашивает эластичный материал, ретикулярные волокна, базальные мембраны и липиды. Он дает лишь ограниченное представление о конкретной биохимической природе ткани, особенно о кислотных и основных компонентах. ⁹

Толуидиновый синий

Толоний хлорид, также известный как толуидиновый синий (ТВ), представляет собой катионный (основной) тиазиновый метахроматический краситель, который имеет высокое сродство к кислым компонентам ткани и окрашивает нуклеиновую кислоту в синий цвет, а полисахариды — в фиолетовый. ¹⁰ Когда он связывается с гликозаминогликанами, он выделяет красновато-пурпурное окрашивание, называемое метахромазией. ¹¹ Это свойство особенно полезно в хирургии Мооса по поводу базальноклеточного рака (BCC), потому что контраст синих агрегатов BCC с красновато-пурпурной метахромазией гликозаминогликанов в окружающей строме помогает очертить очень маленькие гнезда или несколько кластеров опухолевых клеток из придаточные образования.

Преимущества:

Окрашивание толуидиновым синим происходит быстрее и проще, чем H&E, и не требует контрастного окрашивания.¹¹ TB — надежное пятно, для которого требуется только один первичный краситель, в отличие от H&E. Сведение к минимуму времени окрашивания сокращает время ожидания пациента, облегчает поток пациентов и освобождает персонал для выполнения других задач. ¹² Метахромазия при BCC и микрокистозной карциноме придатков (MAC) может быть полезной при обнаружении небольшого количества инфильтрирующих опухолевых клеток, которые в противном случае могли бы быть пропущены. ^13,14 Тучные клетки и мукополисахариды в строме, окружающей BCC, могут быть выделены пурпурным оттенком, что побуждает к тщательному поиску остаточной опухоли.Тучные клетки имеют ярко-фиолетовые метахроматические гранулы на TB и в большом количестве в строме BCC. Обилие тучных клеток может указывать на остаточную опухоль. ⁸

Ограничения:

Ядерная детализация хуже по сравнению с H&E. ¹¹ Многие патологоанатомы / хирурги Мооса не обучены лечению туберкулеза, и поэтому могут сначала столкнуться с трудностями при использовании туберкулеза. Им может потребоваться некоторое время, чтобы ознакомиться со схемой окрашивания туберкулеза. ⁸ Как и в случае H&E, эластичный материал, ретикулярные волокна, нервные волокна и жир трудно идентифицировать.

Лучшие лабораторные практики:

Независимо от того, какой метод окрашивания замороженных срезов является предпочтительным, следующие общие передовые лабораторные практики помогают обеспечить оптимальный результат окрашивания.

Носите соответствующие средства индивидуальной защиты, чтобы избежать травм и кожного поглощения.
Оптимальное окрашивание достигается при толщине срезов 5-6 мкм.
Не допускайте высыхания замороженных срезов на воздухе во время процедуры окрашивания для лучшего сохранения морфологии тканей.
Дренажные слайды после каждого шага, чтобы избежать травм и кожного впитывания.
Регулярно меняйте растворы для окрашивания в соответствии с приемлемым лабораторным протоколом. Следует учитывать количество окрашенных слайдов, а также время использования.
Храните химические вещества в прохладном, сухом, хорошо вентилируемом месте, а легковоспламеняющиеся вещества — в утвержденном шкафу или комнате.
Обеспечьте достаточную вентиляцию и регулярно проверяйте вытяжные шкафы для удаления дыма, которые могут минимизировать количество вдыхаемых химических паров.
Контроль качества следует выполнять ежедневно, прежде чем приступить к работе с образцами от пациентов.

Общие проблемы с быстрым окрашиванием H&E

Слабое окрашивание гематоксилином:
Из-за автолиза или плохой фиксации, чрезмерной декальцификации, недостаточного времени окрашивания, чрезмерного обесцвечивания, слабого гематоксилина из-за уноса, загрязнений, тонких срезов и недостаточного удаления спирта или недостаточной предварительной промывки водой до окрашивания гематоксилином

Чрезмерное окрашивание гематоксилином:
Из-за высыхания ткани, чрезмерного времени окрашивания, слишком слабого или недостаточного времени удаления пятен, толстый срез.

Слабое окрашивание эозином:
Из-за слишком высокого pH эозина, загрязнения спиртовым ополаскивателем, ухудшения качества эозина из-за чрезмерного уноса, тонких срезов, недостаточного времени окрашивания, чрезмерной дифференциации последующим 95% спиртом.

Чрезмерное окрашивание эозином:
Из-за более сильного раствора красителя (может быть из-за чрезмерного испарения), использование изопропилового спирта в качестве ополаскивателя, толстые срезы, чрезмерное время окрашивания

Водяные шарики или белая дымка под покровным стеклом:
Из-за неполного обезвоживания среза, образованного смесью воды и очищающего агента.

Эозиновое кровотечение из среза ткани:
Из-за недостаточной очистки от спирта, который остается в срезе ткани и вызывает кровотечение.

Sample Rapid H&E Staining Method:

95% этиловый спирт (10 капель)
Формалин 10%, с фосфатным буфером (10 погружений)
Дистиллированная вода (10 раз)
Окраска гематоксилином, модифицированная по Харрису (30 секунд)
Дистиллированная вода (10 раз)
Дистиллированная вода (10 раз)
95% этиловый спирт (10 дипсов)
Eosin Y (15 секунд)
95% этиловый спирт (10 дипсов)
95% этиловый спирт (10 дипсов)
100% этиловый спирт (10 дипсов)
100% этиловый спирт (10 дипсов)
Клиринговый агент (10 дипсов)
Клиринговый агент (10 дипсов)
Покровное стекло с совместимой монтажной средой

Общие проблемы с толуидиновым синим

Слабое окрашивание толуидиновым синим:
Из-за автолиза или плохой фиксации, чрезмерной декальцификации, недостаточного времени окрашивания, чрезмерного обесцвечивания / ополаскивания водой, слабого раствора из-за уноса воды, загрязнений, тонких срезов

Чрезмерное окрашивание толуидиновым синим:
Из-за высыхания ткани, чрезмерного времени окрашивания, недостаточного удаления пятен / ополаскивания водой, толстые срезы

Водяные шарики или белая дымка под покровным стеклом:
Из-за неполного обезвоживания среза, образованного смесью воды и очищающего агента

Образец Метод окрашивания толуидиновым синим:

Спиртовой формалин (10 капель)
Водопроводная вода (10 раз)
Водопроводная вода (10 раз)
1% T-синий (40 секунд)
Водопроводная вода (10 раз)
70% этанол (10 раз)
95% этанол (10 раз)
100% этанол (10 капель)
100% этанол (10 раз)
Клиринговый агент (10 дипсов)
Клиринговый агент (10 дипсов)
Покровное стекло с совместимой монтажной средой

Заключение:

Выбор метода окрашивания в замороженной секции обычно основывается на индивидуальной тренировке или личном опыте. Следует учитывать преимущества и ограничения каждого метода, независимо от того, предпочтение отдается H&E или TB. Важно понимать, что характеристики окрашивания зависят от техники, марки раствора / красителя и опыта. Твердое понимание принципов методов окрашивания H&E или TB имеет решающее значение при поиске и устранении неисправностей. Окрашивание тканей должно быть воспроизводимым и надежным. Превосходная визуализация и различение гистологических деталей срезов ткани имеют решающее значение для быстрой и точной патологической диагностики во время замороженного среза.Наконец, другие красители, такие как масляный красный O для жира, гематоксилин и периодическая кислота Шиффа (PAS) для выделения гликогена и мукопротеинов, а также некоторые иммуногистохимические окраски также доступны во время замороженного участка и должны быть рассмотрены, если они доступны.

СПРАВОЧНАЯ ИНФОРМАЦИЯ:

Бэнкрофт Дж. Д., Гэмбл М., редакторы. Теория и практика гистологических методов. 6-е изд. Нью-Йорк: Черчилль Ливингстон; 2008.
Бэнкрофт Дж. Д., Стивенс А. Гистопатологические пятна и их диагностическое использование.Нью-Йорк: Черчилль Ливингстон; 1975.
Junqueira LC, Carneiro J. Основы гистологии. 11-е изд. Нью-Йорк: McGraw Hill, Inc.; 2005.
Росс М.Х., Войцех П. Гистология: текст и атлас. 5-е изд. Балтимор: Липпинкотт Уильямс и Уилкинс; 2006.
Ларсон К., Хо ХХ, Анумолу П.Л., Чен ТМ. Окрашивание тканей гематоксилином и эозином в микрографической хирургии Мооса: обзор. Dermatol Surg. 2011 Август; 37 (8): 1089-99. DOI: 10.1111 / j.1524-4725.2011.02051.x. Epub 2011 2 июня. Обзор. PubMed PMID: 21635628.
Прис А. Руководство по гистологическим методам. 3-е изд. Бостон: Литтл, Браун и компания; 1972 г.
Luna L, редактор. Руководство по гистологическим методам окрашивания Института патологии Вооруженных сил. 3-е изд. Нью-Йорк: McGraw-Hill, Inc .; 1968.
Humphreys TR, Nemeth A, McCrevey S, Baer SC, Goldberg LH. Пилотное исследование по сравнению окрашивания толуидиновым синим и гематоксилином и эозином базальноклеточного и плоскоклеточного рака во время операции Мооса. Dermatol Surg. 1996 августа; 22 (8): 693-7.PubMed PMID: 8780761.
Виттекинд Д. Традиционное окрашивание для рутинной диагностики патологии, включая роль дубильной кислоты. 1. Значение и ограничения окрашивания гематоксилин-эозином. Biotech Histochem 2003; 78: 261-70.
Sridharan, G; Шанкар, АА (2012). Толуидиновый синий: обзор его химического состава и клинической применимости. J Oral Maxillofac Pathol. 16: 251–5. DOI: 10.4103 / 0973-029X.99081.
Aslam A, Aasi SZ. Обработка замороженных тканей в хирургии Мооса. Dermatol Surg.2019 декабрь; 45 Приложение 2: S57-S69. DOI: 10.1097 / DSS.0000000000002260. PubMed PMID: 31764292.
Тодд ММ, Ли Дж. У., Маркс Ви. Быстрое окрашивание толуидиновым синим для микрографической хирургии Мооса. Dermatol Surg. 2005 Февраль; 31 (2): 244-5. PubMed PMID: 15762224.
Тегерани Х, Мэй К., Моррис А., Мотли Р. Улучшает ли двойное использование толуидинового синего и окраски гематоксилином и эозином обнаружение базальноклеточной карциномы слушателями хирургии Моса? Dermatol Surg. 2013 июл; 39 (7): 995-1000. DOI: 10.1111 / dsu.12180. Epub 2013 6 марта.PubMed PMID: 23465179.
Wang SQ, Goldberg LH, Nemeth A. Достоинства добавления слайдов, окрашенных толуидиновым синим, в хирургии Мооса при лечении микрокистозной карциномы придатков. J Am Acad Dermatol. 2007 июн; 56 (6): 1067-9. PubMed PMID: 17504725.
Карсон, Фрейда Л. и Криста Хладик Каппеллано. Гистотехнология: самоучитель. 4-е изд. Чикаго: ASCP Press, 2015. 120–121.

Гистология в 3-D: новый метод окрашивания позволяет

Изображение : Эти изображения были созданы с использованием нового метода окрашивания: слева: Микро-КТ изображение почки мыши, справа: Нано-КТ изображение той же ткани. посмотреть еще

Предоставлено: Mueller, Pfeiffer / TUM / воспроизведено с разрешения PNAS .

На сегодняшний день исследование образцов тканей пациента означало разрезание их на тонкие срезы для гистологического анализа. Теперь это можно изменить — благодаря новому методу окрашивания, разработанному междисциплинарной группой из Технического университета Мюнхена (TUM). Это позволяет специалистам исследовать трехмерные образцы тканей с помощью системы Nano-CT, также недавно разработанной в ТУМ.

Срезы тканей — это обычная процедура в больницах, например, для исследования опухолей. Как следует из названия, для этого нужно разрезать образцы тканей тела на тонкие срезы, затем их окрашивать и исследовать под микроскопом. Медицинские работники давно мечтают о возможности исследования всего трехмерного образца ткани, а не только отдельных срезов. Наиболее очевидным шагом вперед здесь является компьютерная томография (КТ) — также стандартный метод, используемый в повседневных клинических рабочих процессах.

Предыдущие ограничения разрешения и контрастности

До сих пор на пути к достижению этой цели стояли два основных препятствия. Во-первых, разрешение обычных компьютерных томографов слишком низкое. Сегодняшние системы микро- и нано-компьютерной томографии редко подходят для использования в передовой медицине. Некоторые из них не обеспечивают достаточно высокое разрешение, в то время как другие полагаются на излучение от ускорителей крупных частиц.

Во-вторых, известно, что мягкие ткани трудно исследовать с помощью оборудования компьютерной томографии.Образцы необходимо окрасить, чтобы они в первую очередь были видны. Пятна для компьютерной томографии иногда очень токсичны, и их нанесение требует очень много времени. Иногда они изменяют ткань до такой степени, что дальнейший анализ становится невозможным.

Успешное сотрудничество физики, химии и медицины

Однако теперь ученые из Мюнхенской школы биоинжиниринга (MSB) ТУМ решили обе проблемы. В ноябре 2017 года профессор Франц Пфайффер и его команда представили систему Nano-CT, которая обеспечивает разрешение до 100 нанометров и подходит для использования в типичных лабораторных условиях.В текущем выпуске научного журнала PNAS междисциплинарная исследовательская группа из физики, химии и медицины также представляет метод окрашивания для гистологического исследования с помощью Nano-CT.

Совместимость с традиционными методами

Используя почку мыши, ученые успешно продемонстрировали, что Nano-CT может генерировать трехмерные изображения, которые соответствуют информационной зернистости срезов тканей. В основе метода окрашивания лежит эозин, стандартный краситель, используемый при взятии образцов тканей, который ранее считался непригодным для КТ.

«Наш подход включал разработку специальной предварительной обработки, чтобы мы в любом случае могли использовать эозин», — подчеркивает химик доктор Мадлин Буссе. Этот метод окрашивания настолько эффективен по времени, что его можно использовать и в повседневной клинической работе. «Еще одно важное преимущество состоит в том, что нет проблем с использованием установленных методов для исследования образца ткани после сканирования», — добавляет Буссе.

Улучшение, а не замена

На следующем этапе исследователи исследуют образцы тканей человека.Однако гистология КТ не собирается в ближайшее время заменять традиционные методы. По крайней мере, на данный момент команда рассматривает новую процедуру как дополнительную — например, дает врачам дополнительную информацию о трехмерном распределении клеток и ядер. Франц Пфайффер также видит здесь новые возможности для фундаментальных медицинских исследований: «Наряду с диагностическими приложениями неразрушающее трехмерное обследование с помощью Nano-CT может дать новое понимание микроскопического происхождения широко распространенных заболеваний, таких как рак.«

###

Публикация:

М. Буссе, М. Мюллер, М. А. Кимм, С. Ферстль, С. Аллнер, К. Ахтерхольд, Дж. Герцен, Ф. Пфайффер, «Трехмерная виртуальная гистология, доступная с помощью специфичного для цитоплазмы рентгеновского окрашивания для микроскопических и наноскопическая компьютерная томография », PNAS (2018). DOI: 10.1073 / pnas.1720862115

М. Мюллер, И. де Сена Оливейра, С. Аллнер, С. Ферстль, П. Бидола, К. Мехлем, А. Ферингер, Л. Хен, М. Дьерольф, К. Ахтерхольд, Б.Gleich, J. U. Hammel, H. Jahn, G. Mayer, F. Pfeiffer. «Миоанатомия ноги бархатного червя, выявленная с помощью лабораторной томографии с нанофокусным источником рентгеновского излучения». PNAS (2017). DOI: 10.1073 / pnas.1710742114

Дополнительная информация:

Система Nano-CT и метод окрашивания были разработаны в Мюнхенской школе биоинженерии (MSB). Этот междисциплинарный исследовательский центр TUM является самым многопрофильным университетским учреждением в Европе, ориентированным на взаимодействие между медициной, инженерией и естественными науками. Франц Пфайффер, профессор биомедицинской физики, является директором MSB.

Мюнхенская школа биоинжиниринга: http://www.bioengineering.tum.de

Проф. Франц Пфайффер: http://www.professoren.tum.de/en/pfeiffer-franz

Кафедра биомедицинской физики: http://www.e17.ph.tum.de/en

Пресс-релиз Nano-CT: https://www.tum.de/en/about-tum/news/press-releases/detail/article/34261/

изображений с высоким разрешением:

https: // mediatum.ub.tum.de/1432531

Контакт:

Проф. Д-р Франц Пфайффер
Кафедра биомедицинской физики и Мюнхенская школа биоинженерии
Мюнхенский технический университет
Тел .: 49-89-289-12551
[email protected]

Журнал

Труды Национальной академии наук

Заявление об ограничении ответственности: AAAS и EurekAlert! не несут ответственности за точность выпусков новостей, размещенных на EurekAlert! участвующими учреждениями или для использования любой информации через систему EurekAlert.

Новый метод окрашивания связок и сухожилий мелких позвоночных на JSTOR

Абстрактный
Методы очистки и окрашивания широко используются для изучения строения мелких позвоночных. Эти методы состоят в основном из очищения мягких тканей путем ферментативного или щелочного переваривания и окрашивания костей, хрящей или нервов. Однако, несмотря на возрастающую потребность в описании других структур мягкой анатомии, таких как связки и сухожилия, доступные методы визуализации этих тканей представляют собой проблему, требующую очень тонких разрезов и трехмерных реконструкций с использованием срезов тканей или микротомографии.В этой статье мы представляем простой и экономичный метод окрашивания волокнистых соединительных тканей, особенно связок и сухожилий. Метод начинается с ферментативного протеолиза, который предотвращает неселективную деградацию мягких тканей. Затем кости окрашивают, чтобы облегчить понимание структуры, связанной с интересующей костной тканью. Затем соединительные ткани окрашивают в два этапа: сначала глубоким окрашиванием, а затем спиртовой дифференцировкой. Конечные продукты хранятся в глицерине.Преимущество нашей техники состоит в том, что она такая же простая и короткая, как традиционные методы окрашивания костей и хрящей, требует недорогих материалов и оборудования и применима к образцам, хранящимся в музеях. Мы демонстрируем, что наш высокоэффективный метод хорошо работает с образцами основных групп позвоночных. Такой подход облегчит анатомическое описание опорно-двигательного аппарата, помогая проводить морфологический, функциональный и таксономический анализ.
Информация о журнале
Copeia — это всемирно уважаемый, широко цитируемый ежеквартальный журнал, публикующий оригинальные исследования рыб, амфибий и рептилий с упором на систематику, экологию, сохранение, поведение, генетику, морфологию и физиологию.
Информация об издателе
Американское общество ихтиологов и герпетологов посвящено научное изучение рыб, земноводных и рептилий. Основные акценты Общество должно увеличивать знания об этих организмах, распространять эти знания посредством публикаций, конференций, симпозиумов и других средств, и поощрять и поддерживать молодых ученых, которые будут делать успехи в будущем. в этих областях. Программы Американского общества ихтиологов и Герпетологи участвуют в глобальных усилиях по интерпретации, пониманию и сохранению природное разнообразие Земли и способствовать разумному использованию природных ресурсов на благо человечества.
Гистологические методы: подготовка тканей
Методы с использованием серебра и золота:
Пропитка серебром и золотом — старые техники окрашивания, которые часто использовался много лет назад. Их до сих пор иногда используют для
наблюдать за детальными структурами и биологическими процессами, такими как
межклеточные соединения, моторные концевые пластинки и, как видно здесь, нейроны
клетка процессы. В зависимости от используемого метода и материала
(Серебряное золото), конечный результат — коричневый, золотой или черный. На фото
вот нейрон окрашены серебром; это окрашивание позволяет получить
Хорошенько посмотрите на сложную цитоскелетную систему, окружающую ядро нейрона. Помните, что серебряная морилка также используется для наблюдения за сетчатыми волокнами.
Ключ изображения:
N = ядро
Судан Черный и осмий:
Осмий и суданский черный — это красители, которые используются для выделения участков, богатых липидами.Миелин, например, представляет собой липидную структуру, которая окружает нервные аксоны. При нормальном окрашивании участки, богатые миелином, не определяются, но при использовании осмий или суданского черного липидсодержащие структуры отображаются как коричневый / черный цвет. В этом примере показаны коричневые жировые клетки с множеством мелких липидсодержащих гранул. Также для справки изображена та же коричневая жировая ткань, подвергшаяся нормальному воздействию H&E.
Окраска по Нисслю:

Термин «вещество Ниссля» — это то, с чем вы познакомитесь, когда нервная ткань
освещались в классе, позже во время блока «Основы».Вещество Ниссля — это еще один термин для обозначения грубых эндоплазматический ретикулум / рибосомы, обнаруженные в нейронах. Краситель Ниссля — это базовый краситель, который используется для обнажают скопления RER, обычно встречающиеся вокруг тела нейрональной клетки.
Иммуногистологические методы:
Иммуногистологические методы — одни из новейших и наиболее эффективных методов окрашивания.
доступны для гистологии, и они стали незаменимыми в клинической лаборатории для диагностики гистопатология.Как следует из названия, в методе задействованы принципы иммунологии, использующие
сверхтонкая специфичность между антителами и антигенами. Короче говоря, антитела — это маркеры.
продуцируется иммунной системой, которая по своей природе связывается с одной чужеродной молекулой / соединением,
который называется антигеном. С появлением молекулярной биологии и наших знаний
иммунология позволяет создавать антитела к большинству биологических соединений; Введение
нормальные человеческие компоненты, например, инсулин, у других видов, таких как коровы, будут вызывать антитела к человеческому инсулину у коровы.Большие количества антитела можно синтезировать с использованием моноклональная технология. Давайте продолжим с инсулином. Предположим, вы были заинтересованы в обнаружении
какие клетки внутри островка Лангерганса производят больше всего инсулина. Сначала возьмите
образец ткани и обработайте его раствором, содержащим синтезированные антитела к инсулину. В антитела будут связываться с инсулином в клетках, и избыток раствора смывается (позволяет говорить с образцом только связанным антителам).Для удобства выставления позиции
антитела, они предварительно связаны с индикаторным веществом. Используется несколько веществ; некоторые используют флуоресценцию, другие используют основные химические реакции для получения цвета. Самый полезный метод — использовать индикатор. вещество, которое на самом деле является ферментом, способным превращать бесцветное соединение в окрашенный продукт. Ведь антитела были связаны со своим антигеном и избыток смылся, бесцветный субстрат вступает в реакцию со связанным ферментом только в тех областях, где антитела обнаружили антиген, создав окрашенную область в прямой связи с антигеном. В нашем примере с инсулином области с наибольшим раскраски будут те, у которых самая высокая концентрация инсулина.
На этих двух разных диаграммах показаны некоторые принципы иммуногистологических методов. Первый шаг (вверху а) показывает антитела которые были сделаны против интересующей мишени (антигена), применяемой в культуре клеток. После переплета и стирки индикатор наносится раствор (вверху b), который превращает бесцветный субстрат, прикрепленный к антителу, в окрашенный продукт.По окраске участки
с интересующей мишенью кажутся окрашенными из-за связывания теперь окрашенного комплекса антитело-антиген (верхний С). Другой метод (слева B) использует второе антитело с врожденной флуоресценцией, специфичное для исходного антитела. Этот комплекс двойных антител обнажает целевой области с использованием флуоресцентных фотопроявлений.
Ганс Христиан Грам: биолог, помогавший исследовать бактерии
Биолог Ганс Кристиан Грам разработал один из наиболее важных методов окрашивания, используемых в микробиологии для идентификации бактерий под микроскопом.
Здоровье 13 сентября 2019 г.
Лилиан Анекве
Ганс Христиан Грам, биолог-новатор, который разработал метод окрашивания по Граму для исследования бактерий под микроскопом
Alamy
Ганс Христиан Грам, изобретатель техники окрашивания по Граму, был биологом-первопроходцем, который разработал систему классификации, которая привела к исследованию 30 000 формально названных видов бактерий.Он является героем последнего каракуля Google, созданного в честь его рождения 13 сентября 1853 года. Грам, работая с немецким патологом и микробиологом Карлом Фридландером, разработал эту технику в Берлине в начале 1880-х годов. Он до сих пор известен как один из наиболее важных методов окрашивания, используемых в микробиологии для идентификации бактерий под микроскопом.
Грамм первых капель реагентов, вещества, вызывающего химическую реакцию, на образцы ткани легких. Он обнаружил различия в окраске бактерий, которые теперь известны как Streptococcus pneumoniae и Klebsiella pneumoniae.Наблюдаемые различия по Граму обусловлены составом клеточной стенки бактерий. У некоторых бактерий клеточная стенка состоит из пептидогликана, полимера сахара и аминокислот. Эти «грамположительные» бактериальные клетки сохраняют цвет пятна — обычно это комплекс кристаллического фиолетового и йода или метиленового синего — и под микроскопом кажутся пурпурными или коричневыми. Другие, не содержащие пептидогликан, не окрашиваются, называются грамотрицательными и имеют красный цвет.
Его популярность достигла пика между 1940 и 1960 годами. Пирс Гарднер, доцент медицины Гарвардской медицинской школы, писал о окраске по Граму и его интерпретации в 1974 году: «Мы считаем, что мазок, окрашенный по Граму, следует рассматривать как часть физического обследования пациента с острым бактериальным заболеванием. инфекции и входит в репертуар всех врачей, оказывающих первичную помощь остро больным ».
Совсем недавно окрашивание по Граму использовалось для выявления новых антибиотиков, которые играют ключевую роль в борьбе с устойчивостью к противомикробным препаратам.Тейксобактин — один из двух новых антибиотиков, выпущенных на фармацевтический рынок в 2015 году — был идентифицирован с помощью нового подхода к испытанному методу скрининга почвы на наличие бактерий, которые эволюционировали, чтобы убить своих конкурентов.
Команда из Северо-Западного университета в Бостоне, штат Массачусетс, провела скрининг 50 000 типов почвенных бактерий на наличие антибиотиков, убивающих таких насекомых, как инфекция MRSA, полученная в больнице, и бактерии, вызывающие туберкулез с множественной лекарственной устойчивостью.
Техника окрашивания была важна, поскольку скрининг идентифицировал тейксобактин, который, по-видимому, действует на «грамположительную» группу бактерий, воздействуя на липид на их клеточных стенках вместе с другими молекулами.При правильном использовании исследователи, стоящие за открытием тейксобактина, могут стать жизнеспособным вариантом лечения бактериальных заболеваний — и безопасным от угрозы устойчивости — в течение как минимум 30 лет.
Хотя дифференциация бактерий на грамположительные и -отрицательные является фундаментальной для большинства систем идентификации бактерий, исследователи утверждали, что метод окрашивания по Граму подвержен ошибкам, «плохо контролируется и не требует стандартизации» — о чем сам Грэм предупреждал, когда его работа была опубликовано в 1884 году.
«Я опубликовал метод, хотя мне известно, что он пока очень дефектный и несовершенный», — отметил он. «Но есть надежда, что в руках других следователей это окажется полезным».
Проблемы с методом Грама привели к поиску других тестов, и в литературе появилось несколько альтернатив, которые претендуют на его усовершенствование. Тем не менее окраска по Граму остается одним из наиболее часто выполняемых тестов в лаборатории клинической микробиологии и основным методом лечения бактериальных инфекций и спасения жизней.
Подробнее по этим темам:
Новый метод окрашивания может помочь отобразить весь мозг
Метод окрашивания позволяет реконструировать все нервные клетки и их связи в пределах досягаемости.
Считается, что обучение основано на изменении связей между нервными клетками. Знание, какие нервные клетки связаны с какими другими нервными клетками, значительно поможет нам понять, как работает мозг. Поэтому ученые давно мечтают составить карту, а затем расшифровать коннектом, принципиальную схему мозга.С разработкой специального метода окрашивания Шон Микула и Винфрид Денк и из Института нейробиологии Макса Планка в Мартинсриде закрыли один из последних методологических пробелов: как окрашивать весь мозг. Картирование всего мозга мыши теперь кажется вполне достижимым, но даже если оборудование работает так, как задумано, сбор одних данных займет несколько лет, а анализ прибл. 40 петабайт данных могут занять десятилетия.
Многое произошло с тех пор, как в конце 19 века ученые впервые начали исследовать нервные клетки под микроскопом.Анатомия, химия, физиология и клеточная биология как в здоровом, так и в больном мозге с тех пор широко изучаются. Как мысли и чувства возникают в результате деятельности отдельных клеток и что происходит, когда клетки отключаются от сети, например, из-за дегенеративных заболеваний, до сих пор неясно. Поэтому очень важно знать подключения к сети. Обнаружение всех этих связей — цель коннектомики.
Человеческий мозг содержит около 100 миллиардов нейронов и около квадриллиона (1015) межклеточных соединений.Хотя составление карты коннектома человеческого мозга в настоящее время является научной фантастикой, разработка серийного сканирующего электронного микроскопа и других методов визуализации и анализа сделала коннектом мозга мыши, который в 3000 раз меньше человеческого, стал доступным. «Важным этапом, которого все еще не было, была подготовка образца всего мозга», — говорит Шон Микула. Последние шесть лет он работал над окрашиванием всего мозга мыши, чтобы контраст был равномерным по всему мозгу, а ультраструктурная информация, необходимая для отслеживания проводов мозга и обнаружения его синапсов, не разрушалась.Предыдущие методы окрашивания могли надежно окрашивать только относительно небольшие образцы тканей. Но как только мозг разделен на маленькие части, нейронные провода больше не могут быть отслежены между частями, что препятствует последующему созданию карты всего мозга. Методы, нацеленные на окрашивание всего мозга, либо окрашивали мозг слишком слабо или неравномерно, либо разрушали ультраструктуру мозга. В результате восстановление всех связей нервных клеток оставалось невозможным.
Новый метод окрашивания закрывает один из последних методологических пробелов: теперь можно нанести на карту каждую нервную клетку и ее синапсы в мозгу мыши.Изображение предоставлено: MPI нейробиологии / С. Микула.
Шон Микула и Винфрид Денк представили свой метод BROPA для окрашивания всего мозга. Аббревиатура BROPA обозначает сложную последовательность этапов окрашивания и полоскания, включая растворы осмия и пирогаллола. Весь процесс окрашивания занимает около четырех недель. «Мое терпение было подвергнуто серьезным испытаниям, потому что только к концу этого периода можно узнать, было ли изменение в процессе окрашивания хорошим или плохим», — объясняет Шон Микула.Но после долгого ожидания и доработки два ученых теперь удовлетворены своим новым методом: «Наши результаты показывают, что отдельные аксоны можно надежно проследить, а синапсы можно распознать с помощью серийного сканирующего электронного микроскопа с блокировкой лица в мозге мыши, окрашенном BROPA. », — говорит Микула. Это важный успех для команды, так как Винфрид Денк изобрел серийный сканирующий электронный микроскоп с торцевой поверхностью более 10 лет назад с этой целью.
«Сейчас мы находимся на важный шаг ближе к нашей цели — записать полный мозг мыши со всеми его клетками и связями под электронным микроскопом», — объясняет Винфрид Денк, директор Института нейробиологии Макса Планка. Как только будет доставлено и испытано новое поколение приборов, на что уйдет больше года, ученые намерены приступить к проекту. «По моим оценкам, на простой сбор данных уйдет около двух с половиной лет», — говорит Денк. За это время будет сгенерировано около 40 петабайт данных. «Мы как-нибудь будем управлять хранилищем, это анализ, который нас все еще беспокоит», — добавляет Микула. Полученные на данный момент результаты показывают, что автоматизированные компьютерные программы могут довольно надежно распознавать окрашенные BROPA синапсы и тела клеток.Но даже редкие разрывы приводят к недопустимой фрагментации нервных волокон. «Я уверен, что мы, как поле, сможем решить и эту проблему», — говорит Винфрид Денк. На фоне расшифровки генома человека это на самом деле не кажется маловероятным: когда в середине 1970-х годов были расшифрованы первые участки ДНК, секвенирование всего генома человека поначалу казалось таким же невозможным, как и теперь коннектомное картирование весь человеческий мозг.
Об этом исследовании картирования мозга
Исследователи из Университета Миссури Мика Мазурек, Джозеф Хилгард, Джеффри Рудер и Брюс Бартолоу из Департамента психологии здоровья, Департамента психологических наук и Центра Томпсона по аутизму и расстройствам нервного развития также внесли свой вклад в исследование.
Источник: Доктор Стефани Меркер — Институт Макса Планка
Источник изображения: Изображение предоставлено MPI of Neurobiology / S. Mikula
Оригинальное исследование: Аннотация к статье «Окрашивание всего мозга с высоким разрешением на электроны. реконструкция микроскопической схемы »Шон Микула и Винфрид Денк в Nature Methods . Опубликовано в Интернете 13 апреля 2015 г. doi: 10.1038 / nmeth.3361
Abstract
См. Также
Окрашивание всего мозга с высоким разрешением для реконструкции электронных схем
В настоящее время только электронная микроскопия обеспечивает разрешение, необходимое для реконструкции нейронные цепи полностью и с разрешением одного синапса. Поскольку почти все модели поведения основаны на нейронных вычислениях, широко распространенных по всему мозгу, реконструкция цепей всего мозга — и, в конечном счете, всего мозга — очень желательна. Однако для этих реконструкций необходимо подготовить неразделенный мозг для наблюдения под электронным микроскопом. Здесь мы описываем препарат, BROPA (окрашивание восстановленным осмием в масштабе всего мозга с помощью пирогаллол-опосредованной амплификации), который приводит к сохранению и окрашиванию ультраструктурных деталей по всему мозгу с разрешением, необходимым для отслеживания нейронных процессов и выявления синаптических контактов между ними.Используя последовательную электронную микроскопию лица (SBEM), мы проверили способность человека-аннотатора надежно и на больших расстояниях следовать по нейронным «проводам», а также способность обнаруживать синаптические контакты. Наши результаты показывают, что метод BROPA может производить препарат, подходящий для реконструкции нейронных цепей, охватывающих весь мозг мыши.
«Окрашивание всего мозга с высоким разрешением для реконструкции электронных схем» Шон Микула и Винфрид Денк в Nature Methods .Опубликовано в Интернете 13 апреля 2015 г. doi: 10.1038 / nmeth.3361
Понравился этот пост? Не стесняйтесь поделиться им.
Новые методы окрашивания для гистологов
На сегодняшний день исследование образцов тканей пациента означало разрезание их на тонкие срезы для гистологического анализа. Теперь это можно изменить — благодаря новому методу окрашивания, разработанному междисциплинарной группой из Технического университета Мюнхена (TUM). Это позволяет специалистам исследовать трехмерные образцы тканей с помощью системы Nano-CT, также недавно разработанной в ТУМ.Срезы тканей — это обычная процедура в больницах, например, для исследования опухолей. Как следует из названия, для этого нужно разрезать образцы тканей тела на тонкие срезы, затем их окрашивать и исследовать под микроскопом. Медицинские работники давно мечтают о возможности исследования всего трехмерного образца ткани, а не только отдельных срезов. Наиболее очевидным шагом вперед здесь является компьютерная томография (КТ) — также стандартный метод, используемый в повседневных клинических рабочих процессах.Современные системы микро- и нано-компьютерной томографии редко подходят для использования в медицине. Некоторые из них не обеспечивают достаточно высокое разрешение, в то время как другие полагаются на излучение от ускорителей крупных частиц. Во-вторых, известно, что мягкие ткани сложно исследовать с помощью оборудования компьютерной томографии. Образцы необходимо окрасить, чтобы они в первую очередь были видны. Пятна для компьютерной томографии иногда очень токсичны, и их нанесение требует очень много времени. Однако теперь ученые из Мюнхенской школы биоинжиниринга (MSB) ТУМ решили обе проблемы.В ноябре 2017 года профессор Франц Пфайффер и его команда представили систему Nano-CT, которая обеспечивает разрешение до 100 нанометров и подходит для использования в типичных лабораторных условиях. В текущем выпуске Proceedings of the National Academy of Sciences (PNAS) междисциплинарная исследовательская группа из физики, химии и медицины также представляет метод окрашивания для гистологического исследования с помощью Nano-CT.